發(fā)布時間：2017-03-20 14:05

  本文關(guān)鍵詞：胰島素原乳腺特異表達轉(zhuǎn)基因細胞和轉(zhuǎn)基因小鼠模型的制備，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：利用非胰島p細胞生產(chǎn)胰島素一直生物合成胰島素研究領(lǐng)域的熱點,胰島素原在胰島p細胞中主要通過PCl/3, PC2和CPH三種酶加工成有活性的胰島素。研究發(fā)現(xiàn),PC1/3酶在哺乳動物乳腺細胞中廣泛表達。本研究合成了兩條經(jīng)過修飾得人胰島素原基因,Seq-662、Seq-792,以及未經(jīng)過修飾的胰島素原基因,Seq-663。構(gòu)建乳腺特異表達載體662-PBC-1、663-PBC-1、792-PBC-1。利用人乳腺癌細胞系,BCAP-37制備轉(zhuǎn)基因細胞,分離單細胞來源細胞65株,其中攜帶外源基因的細胞23株。選取其中的662-B4、663-4和792-F三株進行誘導(dǎo)、刺激人胰島素原基因的表達顯示,在相同誘導(dǎo)時間內(nèi),不同轉(zhuǎn)基因細胞中人胰島素原基因的表達,隨著葡萄糖刺激濃度的不斷增加,但是不同細胞對于葡萄糖的反應(yīng)存在不同。綜上所述,本研究構(gòu)建了2個修飾的人胰島素原乳腺表達載體,并且檢測發(fā)現(xiàn),他們能夠在細胞和個體水平很好的誘導(dǎo)表達人胰島素原基因。這將為今后在大動物乳腺中生產(chǎn)人胰島素提供理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：人胰島素原 轉(zhuǎn)基因小鼠模型
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1;R-332
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 縮略詞表8-9
• 引言9-12
• 1 材料12-13
• 1.1 主要儀器設(shè)備12
• 1.2 主要材料、試劑及耗材12
• 1.3 細胞培養(yǎng)液、誘導(dǎo)液以及刺激液的配制12-13
• 2 方法13-17
• 2.1 人類乳腺癌細胞BCAP-37的培養(yǎng)13
• 2.2 人胰島素原乳腺特異性表達載體的構(gòu)建13
• 2.3 BCAP-37細胞轉(zhuǎn)染、單克隆培養(yǎng)13-14
• 2.4 人胰島素原轉(zhuǎn)基因BCAP-37細胞的鑒定14-15
• 2.5 BCAP-37細胞的誘導(dǎo)刺激及鑒定實驗15
• 2.6 原核顯微注射技術(shù)制備人類胰島素原轉(zhuǎn)基因小鼠15
• 2.7 轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定及不同組織中人胰島素原基因的表達分析15-16
• 2.8 轉(zhuǎn)人胰島素原基因HST胎兒成纖維細胞制備16
• 2.9 統(tǒng)計方法16-17
• 3 實驗結(jié)果17-24
• 3.1 人乳腺特異性表達載體662-PBC1、663-PBC1以及792-PBC1的構(gòu)建及鑒定17
• 3.2 人類乳腺癌細胞系BCAP-37的轉(zhuǎn)染及挑取單克隆實驗17-21
• 3.3 人類乳腺癌細胞BCAP-37陽性單克隆測序鑒定21
• 3.4 轉(zhuǎn)基因小鼠鑒定21-24
• 4 討論24-26
• 參考文獻26-29
• 文獻綜述29-40
• 參考文獻36-40
• 致謝40-41
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文41

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 多曙光;吳應(yīng)積;羅奮華;旭日干;;牛乳腺上皮細胞的分離培養(yǎng)及其生物學(xué)特性[J];動物學(xué)研究;2006年03期

2 付玉華;周秀梅;錢其軍;;乳腺生物反應(yīng)器的研究和產(chǎn)業(yè)化進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2010年08期

3 包夢醒;吳新;;乳腺生物反應(yīng)器研究進展[J];中國牛業(yè)科學(xué);2014年04期

4 王秀明,姜雪梅,王玲玲,呂淑云;胰島素原轉(zhuǎn)換酶1、2和羧基肽酶H與2型糖尿病的關(guān)系[J];華中醫(yī)學(xué)雜志;2005年05期

5 王雪岷;;單細胞顯微操作法克隆技術(shù)[J];解剖學(xué)雜志;2006年06期

6 壽思明,陳英,朱寶利,敖紅,齊順章;轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺表達人胰島素基因的研究[J];生物工程學(xué)報;1999年02期

7 張曙云,葛煒,錢凱先;基因工程胰島素分泌細胞的研究[J];生命的化學(xué);1999年04期

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本文編號：257890