本文關(guān)鍵詞：胰島素原乳腺特異表達(dá)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因小鼠模型的制備，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：利用非胰島p細(xì)胞生產(chǎn)胰島素一直生物合成胰島素研究領(lǐng)域的熱點(diǎn),胰島素原在胰島p細(xì)胞中主要通過(guò)PCl/3, PC2和CPH三種酶加工成有活性的胰島素。研究發(fā)現(xiàn),PC1/3酶在哺乳動(dòng)物乳腺細(xì)胞中廣泛表達(dá)。本研究合成了兩條經(jīng)過(guò)修飾得人胰島素原基因,Seq-662、Seq-792,以及未經(jīng)過(guò)修飾的胰島素原基因,Seq-663。構(gòu)建乳腺特異表達(dá)載體662-PBC-1、663-PBC-1、792-PBC-1。利用人乳腺癌細(xì)胞系,BCAP-37制備轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,分離單細(xì)胞來(lái)源細(xì)胞65株,其中攜帶外源基因的細(xì)胞23株。選取其中的662-B4、663-4和792-F三株進(jìn)行誘導(dǎo)、刺激人胰島素原基因的表達(dá)顯示,在相同誘導(dǎo)時(shí)間內(nèi),不同轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中人胰島素原基因的表達(dá),隨著葡萄糖刺激濃度的不斷增加,但是不同細(xì)胞對(duì)于葡萄糖的反應(yīng)存在不同。綜上所述,本研究構(gòu)建了2個(gè)修飾的人胰島素原乳腺表達(dá)載體,并且檢測(cè)發(fā)現(xiàn),他們能夠在細(xì)胞和個(gè)體水平很好的誘導(dǎo)表達(dá)人胰島素原基因。這將為今后在大動(dòng)物乳腺中生產(chǎn)人胰島素提供理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：人胰島素原 轉(zhuǎn)基因小鼠模型
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1;R-332
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 縮略詞表8-9
• 引言9-12
• 1 材料12-13
• 1.1 主要儀器設(shè)備12
• 1.2 主要材料、試劑及耗材12
• 1.3 細(xì)胞培養(yǎng)液、誘導(dǎo)液以及刺激液的配制12-13
• 2 方法13-17
• 2.1 人類(lèi)乳腺癌細(xì)胞BCAP-37的培養(yǎng)13
• 2.2 人胰島素原乳腺特異性表達(dá)載體的構(gòu)建13
• 2.3 BCAP-37細(xì)胞轉(zhuǎn)染、單克隆培養(yǎng)13-14
• 2.4 人胰島素原轉(zhuǎn)基因BCAP-37細(xì)胞的鑒定14-15
• 2.5 BCAP-37細(xì)胞的誘導(dǎo)刺激及鑒定實(shí)驗(yàn)15
• 2.6 原核顯微注射技術(shù)制備人類(lèi)胰島素原轉(zhuǎn)基因小鼠15
• 2.7 轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定及不同組織中人胰島素原基因的表達(dá)分析15-16
• 2.8 轉(zhuǎn)人胰島素原基因HST胎兒成纖維細(xì)胞制備16
• 2.9 統(tǒng)計(jì)方法16-17
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-24
• 3.1 人乳腺特異性表達(dá)載體662-PBC1、663-PBC1以及792-PBC1的構(gòu)建及鑒定17
• 3.2 人類(lèi)乳腺癌細(xì)胞系BCAP-37的轉(zhuǎn)染及挑取單克隆實(shí)驗(yàn)17-21
• 3.3 人類(lèi)乳腺癌細(xì)胞BCAP-37陽(yáng)性單克隆測(cè)序鑒定21
• 3.4 轉(zhuǎn)基因小鼠鑒定21-24
• 4 討論24-26
• 參考文獻(xiàn)26-29
• 文獻(xiàn)綜述29-40
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 致謝40-41
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文41

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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本文編號(hào)：257890