【摘要】：目的：分離培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells, ADSCs),探討其培養(yǎng)上清液對創(chuàng)面愈合的影響。 方法：經(jīng)患者知情同意，華中科技大學(xué)藥物臨床試驗倫理委員會批準(zhǔn)，取華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院整形外科腹部供皮區(qū)患者皮下廢棄脂肪組織約5g，分離、培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞，經(jīng)鑒定并部分成功向成脂和成骨誘導(dǎo)確認(rèn)為干細(xì)胞，提取其第3～5代脂肪干細(xì)胞上清液。在BALB/c裸鼠的背部兩側(cè)各去除一個直徑為6mm的圓形全厚皮片，形成兩個皮膚全層缺損創(chuàng)面，左側(cè)設(shè)為對照組，右側(cè)設(shè)為實驗組，共16只。使用夾板固定以防止創(chuàng)面收縮。取200ul脂肪干細(xì)胞上清液（conditioned medium of HumanAdipose-derived Stem Cells ADSCs-CM），分上、下、左、右四點(diǎn)平均注射于創(chuàng)面組織內(nèi)，每點(diǎn)30ul，剩余80ul噴灑創(chuàng)面表面；左側(cè)創(chuàng)面設(shè)為自身對照，單純應(yīng)用不含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液DMEM/F12，方法同上。分別于術(shù)后3、4、5、7、9和10天使用Image Proplus6.0圖像處理軟件測量創(chuàng)面大小，計算創(chuàng)面的愈合率；記錄各個創(chuàng)面愈合時間；術(shù)后7天和25天取創(chuàng)面組織做HE染色，進(jìn)行組織學(xué)分析。 結(jié)果：取自人腹部皮下脂肪經(jīng)分離、培養(yǎng)3天后,可見貼壁的ADSCs呈梭形。細(xì)胞免疫熒光檢測ADSCs特異性標(biāo)志物CD44、CD105表達(dá)陽性, CD34和CD45表達(dá)陰性，并成功向成脂和成骨分化。在術(shù)后第3、4、5、7、9和10天，實驗組創(chuàng)面愈合率在第3、7、9天時明顯高于對照組(P0.05)，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而在第4、5、10天時雖高于對照組，但P0.05,沒有統(tǒng)計學(xué)意義；組織病理學(xué)檢查可見，術(shù)后第7天實驗組呈現(xiàn)明顯炎性細(xì)胞浸潤，其毛細(xì)血管增生程度及肉芽組織厚度均較對照組高，實驗組肉芽組織厚度高于對照組（P＜0.05）；實驗組毛細(xì)血管密度高于對照組(P0.05）；在術(shù)后第25天，實驗組創(chuàng)面真皮層厚度較與對照組增厚，其差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。實驗組創(chuàng)面愈合平均時間為9.67±1.37天，對照組為12.08±0.9天，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論：人腹部皮下脂肪組織中可成功分離、培養(yǎng)干細(xì)胞；脂肪來源干細(xì)胞上清液可促進(jìn)創(chuàng)面愈合，增加皮膚組織中真皮層厚度。
【圖文】：

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文15圖1 創(chuàng)面模型示意圖。A：將圓規(guī)定長為6mm；B：使用美蘭在裸鼠背部中線兩側(cè)畫出擬切除的創(chuàng)面；C：在老鼠背部切取直徑為6mm的圓形創(chuàng)面；D：環(huán)形硅膠圈放在創(chuàng)面周圍，0/5尼龍線將硅膠圈間斷縫合在創(chuàng)緣周圍；E：透明粘貼薄膜封閉雙側(cè)創(chuàng)面；F：雙側(cè)創(chuàng)面分別注射200ul藥物，右側(cè)設(shè)為實驗組，注入ADSCs-CM，左側(cè)設(shè)為自身對照，，注入DMEM/F12。1.8 創(chuàng)面分析分別在裸鼠創(chuàng)面的第3天、4天、5天、6天、7天,9天和10天使用數(shù)碼相機(jī)（PENTAX

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文2 結(jié)果2.1 ADSCs的特征：第3代ADSCs培養(yǎng)3天后，觀察到貼壁的細(xì)胞呈長梭形（圖1）細(xì)胞免疫熒光檢測顯示：脂肪干細(xì)胞特異性標(biāo)志物CD44 和 CD105表達(dá)呈性,CD34和CD45表達(dá)陰性(圖3)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R329

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 折濤;胡大海;;脂肪源性干細(xì)胞內(nèi)分泌功能與再生醫(yī)學(xué)的研究進(jìn)展[J];中國美容醫(yī)學(xué);2008年05期

2 折濤;胡大海;張萬福;張軍;劉佳琦;蔡維霞;朱華宇;湯朝武;;ADSCs培養(yǎng)上清液對成纖維細(xì)胞的生物學(xué)影響[J];中國美容醫(yī)學(xué);2008年12期

3 馬鈺;李青;趙大慶;王淑芳;李望舟;閔婕;谷雨;;脂肪基質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其作為軟骨種子細(xì)胞的研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2007年05期

本文編號：2574016