【摘要】：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細(xì)胞的重要細(xì)胞器,負(fù)責(zé)新生蛋白質(zhì)的合成折疊、修飾以及轉(zhuǎn)運(yùn)等。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)平衡對(duì)于維持正常的細(xì)胞功能至關(guān)重要。當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)難以承擔(dān)錯(cuò)誤折疊蛋白的負(fù)荷時(shí)則引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,激活未折疊蛋白反應(yīng)(UPR,Unfolded Protein Response)信號(hào)通路,以此增強(qiáng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的蛋白質(zhì)加工處理能力。但長期的嚴(yán)重的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生時(shí),就會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生凋亡。研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。GSK3β,一種組成性激活的絲氨酸/蘇氨酸激酶,有多種功能,如控制細(xì)胞的代謝,細(xì)胞周期,基因表達(dá),發(fā)育,腫瘤發(fā)生和神經(jīng)保護(hù)等。近期研究發(fā)現(xiàn),GSK3β介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程,但參與凋亡的一些具體機(jī)制還不是很清楚。 為研究GSK3β在小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞(CGNs)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中的作用,本文選取兩種誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的化學(xué)物質(zhì)衣霉素(TM,一種N-連接的糖基化的抑制劑)和二硫蘇糖醇(DTT)處理CGNs。發(fā)現(xiàn)TM的濃度從10μg/ml增加到50μg/ml,細(xì)胞的存活率并不隨TM的濃度的增加而減少,大概有60%的細(xì)胞依然存活,而當(dāng)DTT的濃度從0.15 mM增加到1 mM時(shí),細(xì)胞的存活率由80%下降到30%,說明TM和DTT都能誘導(dǎo)CGNs的凋亡,TM誘導(dǎo)凋亡的過程較為緩慢,相比之下,DTT誘導(dǎo)細(xì)胞的快速凋亡。在我們已建立的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ突A(chǔ)上檢測GSK3β活性變化,發(fā)現(xiàn)TM通過增強(qiáng)GSK3β-Ser9的磷酸化而抑制GSK3β活性,而DTT則通過減弱GSK3β-Ser9的磷酸化而增強(qiáng)GSK3β的活性。本文進(jìn)一步檢測GSK3β的上游和下游的一些關(guān)鍵信號(hào)分子。已有的研究表明,Akt和JNK是GSK3β上游的重要調(diào)節(jié)激酶。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn),TM和DTT并不明顯影響Akt的活性變化,而TM能瞬時(shí)性激活JNK,峰值出現(xiàn)在5分鐘左右,DTT則能較長時(shí)間激活JNK,持續(xù)時(shí)間約為6小時(shí)。我們推測JNK活性的變化可能跟GSK3β有關(guān),利用SP600125抑制JNK的活性后,發(fā)現(xiàn)TM誘導(dǎo)的GSK3β-Ser9磷酸化水平明顯降低,但DTT對(duì)GSK3β-Ser9磷酸化的抑制沒有顯著變化,說明JNK可能是TM誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中GSK3β上游的一個(gè)調(diào)節(jié)分子。為研究JNK和GSK3β對(duì)細(xì)胞存活的影響,本文發(fā)現(xiàn)JNK活性的抑制可加劇TM誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡,但顯著減弱DTT誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡;LiCl抑制GSK3β活性能減弱TM誘導(dǎo)的caspase-3的激活和CHOP蛋白的表達(dá),而對(duì)DTT誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡無影響,說明JNK可能通過調(diào)控GSK3β的活性來調(diào)節(jié)TM誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激下細(xì)胞的存活。最后,我們還檢測了能調(diào)節(jié)JNK活性的蛋白磷酸酶PP2A的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)PP2A可能通過調(diào)控JNK的活性而參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。 總之,本文研究發(fā)現(xiàn)TM處理下能瞬時(shí)性激活JNK,JNK可能通過調(diào)控GSK3β的活性來影響CGNs的存活,PP2A可能也參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

應(yīng)途徑構(gòu)成未折疊蛋白反應(yīng)（圖 1-1）。第一個(gè)反應(yīng)涉及到上調(diào)編碼侶蛋白的基因，這些基因包括 BiP/GRP78 和 GRP94。這有助于提升蛋并阻止蛋白質(zhì)的聚集。第二個(gè)反應(yīng)包括翻譯的弱化以減小生物合成的未折疊蛋白進(jìn)一步的積累。第三個(gè)反應(yīng)是通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解（ER-asation,ERAD）途徑降解錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)，那些在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中不能重新折疊蛋白質(zhì)被反向轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中后被蛋白酶體降解。當(dāng)上述的這些反應(yīng)網(wǎng)應(yīng)激時(shí)，，第四個(gè)反應(yīng)，即凋亡反應(yīng)發(fā)生了，它能清除不健康或受侵維持正常的發(fā)育和分化。

圖 1-2. UPR 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。未折疊蛋白反應(yīng)涉及到的一些具體的信號(hào)通路，/XBP-1，PERK/eIF2 和 ATF6 三種信號(hào)通路，它們的下游的分子包括一些分子伴侶和折錄翻譯，以及凋亡相關(guān)蛋白 CHOP 的表達(dá)等。 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李娟;張殿寶;羅紹凱;趙瑩;黃蓓暉;谷景立;;β-catenin在多發(fā)性骨髓瘤中的表達(dá)及其臨床意義[J];癌癥;2007年09期

2 謝濤;袁響林;于世英;楊彬;董蘭蘭;;RNA干擾HIF-1α降低宮頸癌細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達(dá)[J];癌癥;2008年06期

3 賴菁;高志良;楊林;陳偉;周翔;柯偉民;;β-catenin基因多態(tài)性與乙型肝炎病毒相關(guān)肝細(xì)胞癌易感性的關(guān)系[J];癌癥;2009年06期

4 劉向東;萬瑩鏵;;Wnt信號(hào)傳導(dǎo)與腫瘤[J];癌癥進(jìn)展;2009年03期

5 賈文娟;李勝澤;;STAT3、cyclin D1在婦科腫瘤中的研究進(jìn)展[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年02期

6 孫健;盧健;鄒冬芳;吳國平;;APC基因異常甲基化在上皮性卵巢癌中的檢測及臨床意義[J];白求恩軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年05期

7 劉蘭華;;β-Catenin在宮頸上皮內(nèi)瘤樣變及宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義[J];長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年02期

8 鄭建明,朱明華;Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與人類腫瘤[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年12期

9 陳靖;張京霞;趙曉軍;劉淑霞;張欣;;β-catenin、GSK3β在食管癌中的表達(dá)及其與食管癌浸潤和轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)刊;2011年01期

10 孫健;盧健;鄒冬芳;吳國平;;結(jié)腸腺瘤性息肉病基因異常甲基化在上皮性卵巢癌中的檢測及臨床意義[J];東南國防醫(yī)藥;2008年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 汪麗艷;β-catenin siRNA對(duì)肝癌細(xì)胞系SMMC-7721和HepG-2增殖與凋亡的影響[D];吉林大學(xué);2011年

2 吳燕;RhoC與IQGAP1在調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞遷移、增殖中的相互作用[D];江蘇大學(xué);2011年

3 李博;食管鱗癌中腫瘤相關(guān)基因的甲基化研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

4 韓方;GSK-3β穩(wěn)定錯(cuò)配修復(fù)蛋白PMS2抑制卵巢癌的探索[D];華中科技大學(xué);2011年

5 莊新杰;SLXL1、SLX2和XLR5C及線粒體在生殖細(xì)胞中的定位和功能研究[D];廣西大學(xué);2011年

6 周偉;靶向干預(yù)糖原合成激酶-3β調(diào)控胰腺癌增殖、侵襲、血管生成、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及其分子機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2012年

7 程曉馨;Wnt途徑在胃癌中的異常激活及其與侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2005年

8 王力;HBx羧基端缺失40個(gè)氨基酸相關(guān)上調(diào)/下調(diào)基因的篩選和初步功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

9 徐洪濤;Axin調(diào)控β-catenin的表達(dá)與肺癌的關(guān)系[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

10 焦楊;Wnt通路相關(guān)基因在AFB1誘導(dǎo)大鼠肝癌及人肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊成勝;SALL4基因及其蛋白在兒童急性白血病的表達(dá)及其相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2010年

2 梅琛;Wnt拮抗基因在骨髓增生異常綜合征患者中甲基化水平分析[D];浙江大學(xué);2011年

3 張鑫馨;β-連環(huán)素及E-鈣粘附素在上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)及臨床意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

4 鄭斐斐;FZD2、FZD3基因?qū)ο严傧贅幽倚园┰鲋臣扒忠u能力的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

5 陳沂;Wnt-1、β-catenin、E-cadherin在宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

6 李芳;食管鱗狀細(xì)胞癌中WIF-1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)及mRNA表達(dá)的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

7 張星;結(jié)直腸癌中COX-2、c-myc、β-catenin和survivin的表達(dá)及其相互關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

8 黃中華;氯化鋰抑制GSK-3β對(duì)奧曲肽作用于Wnt/β-Catenin通路的影響[D];南華大學(xué);2011年

9 付利軍;TGF-β_1和CyclinD1在甲狀旁腺腫瘤中的表達(dá)和意義[D];鄭州大學(xué);2011年

10 董為;Wnt/β-catenin信號(hào)通路在HBx基因體外誘導(dǎo)大鼠卵圓細(xì)胞惡化過程中的作用[D];華中科技大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2572063