【摘要】：在小鼠的二級淋巴器官中,生發(fā)中心(GC)B細胞是一個有著極其特別作用的B細胞群體。他們通常產(chǎn)生于由胸腺細胞依賴性抗原(T-dependent antigen)所引發(fā)的免疫應答中。這些有極快分裂能力的生發(fā)中心B細胞內(nèi)會發(fā)生體細胞高頻突變(SHM)和免疫球蛋白不同類型間的轉換重組(CSR)。通過篩選,對相應抗原具有高親和力的細胞得以生存,并分化繁殖成為可分泌抗體的漿細胞和記憶性B細胞。但是,在免疫應答中,調控生發(fā)中心B細胞存活的機制仍不清楚。 我們發(fā)現(xiàn)在生發(fā)中心B細胞中,ELL結合因子2(Eaf2)有特異性的高表達量。而且在正常小鼠B細胞中過量表達EAF2蛋白可導致顯著的細胞死亡增多。為了進一步研究在B細胞中Eaf2的作用,我們在C57BL/6背景下制作了Eaf2全身敲除小鼠。這種小鼠的B細胞在骨髓中的發(fā)育和脾臟中的成熟都表現(xiàn)正常,不同刺激下的細胞繁殖速度和血清中免疫球蛋白濃度也基本正常。 但是,在體外培養(yǎng)并加入不同刺激時,派氏淋巴集結(Peyer's patches)中的生發(fā)中心B細胞存活情況明顯好于對照組。同時,在胸腺細胞依賴性抗原NP-CGG免疫兩周后的脾臟切片免疫組化染色中,通過原位末端轉移酶標記(TUNEL)檢測細胞凋亡時,Eaf2敲除小鼠的生發(fā)中心B細胞凋亡明顯減少。同時,PNA陽性生發(fā)中心組織平均面積擴大到了約對照組的兩倍。 在免疫Eaf2敲除小鼠兩周后,不僅生發(fā)中心B細胞增多,記憶性細胞的比例也有上升。但是,這兩種細胞的比例在免疫后的第六周和第九周下降到了正常水平。相比于對照組,Eaf2敲除小鼠的總親和力和高親和力抗體生產(chǎn)均有增加。免疫球蛋白JH4內(nèi)含子區(qū)域的體細胞高頻突變頻率保持正常。但NP抗原特異性的VH186.2序列的總突變頻率和氨基酸替換突變率有所下降,說明敲除鼠的抗體親和力成熟(antibody maturation)受到影響。最后,通過細胞移植試驗,我們證明了Eaf2缺失并不損害免疫二次應答。 以上結果充分證明Eaf2可導致生發(fā)中心B細胞凋亡,它對于阻止生發(fā)中心過度擴張和促進B細胞抗體親和力成熟都有作用。這是目前發(fā)現(xiàn)的唯一可以直接影響由胸腺依賴性抗原刺激形成的生發(fā)中心面積的因子。我們的研究對于深入探討免疫應答中生發(fā)中心的反應機理,記憶性細胞和漿細胞的分化機制提供了新的見解。
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R392

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本文編號：2571547