【摘要】：在小鼠的二級(jí)淋巴器官中,生發(fā)中心(GC)B細(xì)胞是一個(gè)有著極其特別作用的B細(xì)胞群體。他們通常產(chǎn)生于由胸腺細(xì)胞依賴(lài)性抗原(T-dependent antigen)所引發(fā)的免疫應(yīng)答中。這些有極快分裂能力的生發(fā)中心B細(xì)胞內(nèi)會(huì)發(fā)生體細(xì)胞高頻突變(SHM)和免疫球蛋白不同類(lèi)型間的轉(zhuǎn)換重組(CSR)。通過(guò)篩選,對(duì)相應(yīng)抗原具有高親和力的細(xì)胞得以生存,并分化繁殖成為可分泌抗體的漿細(xì)胞和記憶性B細(xì)胞。但是,在免疫應(yīng)答中,調(diào)控生發(fā)中心B細(xì)胞存活的機(jī)制仍不清楚。 我們發(fā)現(xiàn)在生發(fā)中心B細(xì)胞中,ELL結(jié)合因子2(Eaf2)有特異性的高表達(dá)量。而且在正常小鼠B細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)EAF2蛋白可導(dǎo)致顯著的細(xì)胞死亡增多。為了進(jìn)一步研究在B細(xì)胞中Eaf2的作用,我們?cè)贑57BL/6背景下制作了Eaf2全身敲除小鼠。這種小鼠的B細(xì)胞在骨髓中的發(fā)育和脾臟中的成熟都表現(xiàn)正常,不同刺激下的細(xì)胞繁殖速度和血清中免疫球蛋白濃度也基本正常。 但是,在體外培養(yǎng)并加入不同刺激時(shí),派氏淋巴集結(jié)(Peyer's patches)中的生發(fā)中心B細(xì)胞存活情況明顯好于對(duì)照組。同時(shí),在胸腺細(xì)胞依賴(lài)性抗原NP-CGG免疫兩周后的脾臟切片免疫組化染色中,通過(guò)原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí),Eaf2敲除小鼠的生發(fā)中心B細(xì)胞凋亡明顯減少。同時(shí),PNA陽(yáng)性生發(fā)中心組織平均面積擴(kuò)大到了約對(duì)照組的兩倍。 在免疫Eaf2敲除小鼠兩周后,不僅生發(fā)中心B細(xì)胞增多,記憶性細(xì)胞的比例也有上升。但是,這兩種細(xì)胞的比例在免疫后的第六周和第九周下降到了正常水平。相比于對(duì)照組,Eaf2敲除小鼠的總親和力和高親和力抗體生產(chǎn)均有增加。免疫球蛋白JH4內(nèi)含子區(qū)域的體細(xì)胞高頻突變頻率保持正常。但NP抗原特異性的VH186.2序列的總突變頻率和氨基酸替換突變率有所下降,說(shuō)明敲除鼠的抗體親和力成熟(antibody maturation)受到影響。最后,通過(guò)細(xì)胞移植試驗(yàn),我們證明了Eaf2缺失并不損害免疫二次應(yīng)答。 以上結(jié)果充分證明Eaf2可導(dǎo)致生發(fā)中心B細(xì)胞凋亡,它對(duì)于阻止生發(fā)中心過(guò)度擴(kuò)張和促進(jìn)B細(xì)胞抗體親和力成熟都有作用。這是目前發(fā)現(xiàn)的唯一可以直接影響由胸腺依賴(lài)性抗原刺激形成的生發(fā)中心面積的因子。我們的研究對(duì)于深入探討免疫應(yīng)答中生發(fā)中心的反應(yīng)機(jī)理,記憶性細(xì)胞和漿細(xì)胞的分化機(jī)制提供了新的見(jiàn)解。
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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