本文關(guān)鍵詞：細胞外基質(zhì)因子在兔軟骨細胞損傷模型中的表達變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:獲取、培養(yǎng)體外兔膝關(guān)節(jié)軟骨細胞;建立軟骨細胞損傷模型并分析兔關(guān)節(jié)軟骨細胞損傷模型中細胞外基質(zhì)因子II型膠原(Col-II),基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP13),基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP1)和透明質(zhì)酸(HA)基因mRNA五個時間點的表達變化。方法:取健康4周齡新西蘭大白兔,雌雄均可,麻醉之后,無菌環(huán)境解剖雙膝關(guān)節(jié),收集軟骨細胞。體外培養(yǎng)獲取的軟骨細胞,并將生長狀態(tài)良好的細胞傳代,之后接種于六孔板培養(yǎng),制備損傷模型。用顯微鏡觀察損傷前和損傷后1、3、5、7 d共5個時間點的軟骨細胞的形態(tài)變化并拍照。采用實時熒光定量PCR檢測軟骨細胞損傷前和損傷后1、3、5、7 d共5個時間點的II型膠原酶,基質(zhì)金屬蛋白酶3,基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1和透明質(zhì)酸基因mRNA表達變化。結(jié)果:兔關(guān)節(jié)軟骨細胞損傷模型被成功制備。損傷后Ⅱ型膠原mRNA 1 d組表達比正常細胞水平少(P0.05),損傷后3 d組與7d組較1 d組增多,在第7天時,恢復(fù)到正常水平。與正常組相比,損傷后1天組MMP13 mRNA表達下降,約為正常組的1/47,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),損傷后3天組和5天組較1天組上升,5天組高于3天組5倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),高于7天組31倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。TIMP 1 mRNA損傷后1天組比正常組表達升高,損傷后3天組低于1天組和5天組,1天組高于3天組2倍,5天組高于3天組2倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),損傷3天后基因升高,第7天達到正常水平。損傷后1天組和3天組HA mRNA表達量低于正常組,5天組高于所有其他損傷時間點,高于正常組3倍,高于1天組13倍,高于3天組6倍,高于7天組10倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:MMP13、TIMP1、透明質(zhì)酸和II型膠原基因在細胞損傷后的表達變化都具有一定的規(guī)律,本實驗通過研究細胞外基質(zhì)因子在軟骨細胞損傷模型不同時間點的表達變化,為未來基因治療軟骨損傷選擇合適的窗口期。
【關(guān)鍵詞】：軟骨細胞 損傷模型 基質(zhì)金屬蛋白酶13 抑制物基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物1 透明質(zhì)酸
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R-332;R68
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-22
• 一、實驗材料11-14
• 二、實驗方法14-22
• 結(jié)果22-29
• 討論29-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻34-39
• 致謝39-40
• 附錄40-50
• 附錄A 中英文術(shù)語縮略語對照表40-41
• 附錄B 主要試劑配制方法41-42
• 附錄C 個人簡歷42-43
• 附錄D 綜述43-50
• 參考文獻48-50

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