本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞外基質(zhì)因子在兔軟骨細(xì)胞損傷模型中的表達(dá)變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:獲取、培養(yǎng)體外兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞;建立軟骨細(xì)胞損傷模型并分析兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞損傷模型中細(xì)胞外基質(zhì)因子II型膠原(Col-II),基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP13),基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP1)和透明質(zhì)酸(HA)基因mRNA五個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化。方法:取健康4周齡新西蘭大白兔,雌雄均可,麻醉之后,無(wú)菌環(huán)境解剖雙膝關(guān)節(jié),收集軟骨細(xì)胞。體外培養(yǎng)獲取的軟骨細(xì)胞,并將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞傳代,之后接種于六孔板培養(yǎng),制備損傷模型。用顯微鏡觀察損傷前和損傷后1、3、5、7 d共5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的軟骨細(xì)胞的形態(tài)變化并拍照。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)軟骨細(xì)胞損傷前和損傷后1、3、5、7 d共5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的II型膠原酶,基質(zhì)金屬蛋白酶3,基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1和透明質(zhì)酸基因mRNA表達(dá)變化。結(jié)果:兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞損傷模型被成功制備。損傷后Ⅱ型膠原mRNA 1 d組表達(dá)比正常細(xì)胞水平少(P0.05),損傷后3 d組與7d組較1 d組增多,在第7天時(shí),恢復(fù)到正常水平。與正常組相比,損傷后1天組MMP13 mRNA表達(dá)下降,約為正常組的1/47,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),損傷后3天組和5天組較1天組上升,5天組高于3天組5倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),高于7天組31倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TIMP 1 mRNA損傷后1天組比正常組表達(dá)升高,損傷后3天組低于1天組和5天組,1天組高于3天組2倍,5天組高于3天組2倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),損傷3天后基因升高,第7天達(dá)到正常水平。損傷后1天組和3天組HA mRNA表達(dá)量低于正常組,5天組高于所有其他損傷時(shí)間點(diǎn),高于正常組3倍,高于1天組13倍,高于3天組6倍,高于7天組10倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:MMP13、TIMP1、透明質(zhì)酸和II型膠原基因在細(xì)胞損傷后的表達(dá)變化都具有一定的規(guī)律,本實(shí)驗(yàn)通過研究細(xì)胞外基質(zhì)因子在軟骨細(xì)胞損傷模型不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化,為未來(lái)基因治療軟骨損傷選擇合適的窗口期。
【關(guān)鍵詞】：軟骨細(xì)胞 損傷模型 基質(zhì)金屬蛋白酶13 抑制物基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物1 透明質(zhì)酸
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R-332;R68
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-22
• 一、實(shí)驗(yàn)材料11-14
• 二、實(shí)驗(yàn)方法14-22
• 結(jié)果22-29
• 討論29-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 致謝39-40
• 附錄40-50
• 附錄A 中英文術(shù)語(yǔ)縮略語(yǔ)對(duì)照表40-41
• 附錄B 主要試劑配制方法41-42
• 附錄C 個(gè)人簡(jiǎn)歷42-43
• 附錄D 綜述43-50
• 參考文獻(xiàn)48-50

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：256970