本文關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞集落刺激因子聯(lián)合轉(zhuǎn)化生長因子-β體外誘導(dǎo)髓源性抑制細(xì)胞的表型和功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來發(fā)現(xiàn)髓源性抑制細(xì)胞(Myeloid derived suppressor cells,MDSCs)在固有免疫和適應(yīng)性免疫中發(fā)揮著重要的作用。作為免疫抑制細(xì)胞,MDSCs用于治療臨床器官移植和自身免疫疾病已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。許多研究表明,多種細(xì)胞因子可以調(diào)控MDSCs的分化和功能,MDSCs也可以有效減少器官移植排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)病率。因此,體外建立一個從骨髓前體細(xì)胞或造血干細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生成熟和穩(wěn)定MDSCs的方法可為治療MDSCs相關(guān)疾病和MDSCs的臨床應(yīng)用提供必要技術(shù)和理論基礎(chǔ)。巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Macrophage-colony stimulating factor,M-CSF)作為調(diào)控因子,在單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞分化過程中發(fā)揮重要作用。研究表明,M-CSF在MDSCs的產(chǎn)生、募集、功能中發(fā)揮重要作用,而MDSCs本身也會自分泌M-CSF,形成反饋環(huán)路。轉(zhuǎn)化生長因子(Transforming growth factor beta,TGF-β)是炎癥反應(yīng)的一個強(qiáng)效調(diào)節(jié)因子,影響先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)。已有報道指出腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的TGF-β可以參與調(diào)節(jié)不成熟髓系細(xì)胞(Immature myeloid cells,IMCs)的免疫抑制活性,并且MDSCs上膜結(jié)合TGF-β1對介導(dǎo)其免疫抑制功能同樣起非常重要的作用。體外用M-CSF可誘導(dǎo)骨髓前體細(xì)胞分化為MDSCs,然而M-CSF誘導(dǎo)的MDSCs的穩(wěn)定性和免疫抑制活性還有待探討,并且M-CSF和TGF-β聯(lián)合體外誘導(dǎo)髓源性抑制細(xì)胞的表型及功能研究也未見報道。因此,我們采用體外M-CSF、M-CSF聯(lián)合TGF-β誘導(dǎo)小鼠骨髓前體細(xì)胞產(chǎn)生潛在免疫抑制性細(xì)胞。結(jié)果顯示,流式細(xì)胞儀檢測到TGF-β增強(qiáng)了M-CSF誘導(dǎo)的MDSCs的免疫抑制活性,誘導(dǎo)產(chǎn)生的MDSCs能夠顯著抑制自體同源T細(xì)胞增殖和IFN-γ分泌;同時還檢測到M-CSF聯(lián)合TGF-β誘導(dǎo)的MDSCs明顯減弱了CD8+T細(xì)胞活化標(biāo)志CD69、CD25的表達(dá)。實時熒光定量PCR分析顯示TGF-β促使M-CSF誘導(dǎo)的MDSCs高表達(dá)MDSCs功能相關(guān)因子TGF-β、環(huán)氧酶(Cyclo-oxygen-ase-2,COX2)和精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg-1),也增強(qiáng)了TGF-β+M-CSF誘導(dǎo)產(chǎn)生的MDSCs功能。在MDSCs抑制實驗中補(bǔ)加L-精氨酸,可以恢復(fù)CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的增殖能力,表明M-CSF聯(lián)合TGF-β誘導(dǎo)的MDSCs是通過消耗底物精氨酸的機(jī)制來發(fā)揮其免疫抑制活性的。
【關(guān)鍵詞】：髓源性抑制細(xì)胞 巨噬細(xì)胞集落刺激因子 轉(zhuǎn)化生長因子-β 精氨酸酶
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 縮略詞表7-15
• 第一章 前言15-30
• 1.1 MDSCs概述15-16
• 1.2 MDSCs體外誘導(dǎo)16-21
• 1.2.1 鼠骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)分化MDSCs16-17
• 1.2.2 鼠胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化MDSCs17-18
• 1.2.3 鼠其它細(xì)胞誘導(dǎo)分化MDSCs18
• 1.2.4 人的外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)分化MDSCs18-21
• 1.2.5 人的骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)分化MDSCs21
• 1.3 擴(kuò)增和激活MDSCs的內(nèi)生和外生因素21-29
• 1.3.1 集落刺激因子21-22
• 1.3.2 干細(xì)胞因子22
• 1.3.3 血管內(nèi)皮生長因子22-23
• 1.3.4 Flt3-Flt3L23
• 1.3.5 前列腺素E-環(huán)氧酶-2（PGE-COX2）反饋23-24
• 1.3.6 腫瘤壞死因子24
• 1.3.7 白細(xì)胞介素24-26
• 1.3.8 轉(zhuǎn)化生長因子26
• 1.3.9 干擾素26-27
• 1.3.10 脂多糖27
• 1.3.11 趨化因子及其受體27
• 1.3.12 特異性抗體27-28
• 1.3.13 免疫抑制藥物28-29
• 1.4 MDSCs的臨床應(yīng)用前景29-30
• 第二章 材料和方法30-45
• 2.1 實驗材料30-34
• 2.1.1 實驗動物30
• 2.1.2 其它工具30
• 2.1.3 熒光標(biāo)記的表面染色抗體30
• 2.1.4 熒光標(biāo)記的細(xì)胞內(nèi)染色抗體30
• 2.1.5 流式染色封閉抗體30
• 2.1.6 細(xì)胞因子30-31
• 2.1.7 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑31-32
• 2.1.8 主要儀器32
• 2.1.9 引物32-34
• 2.2 溶液配制34
• 2.3 實驗方法34-41
• 2.3.1 小鼠骨髓細(xì)胞的制備34-35
• 2.3.2 體外誘導(dǎo)免疫抑制性細(xì)胞35
• 2.3.3 脾臟單細(xì)胞懸液的制備35-36
• 2.3.4 體外抑制功能實驗36-37
• 2.3.5 L-精氨酸逆轉(zhuǎn)實驗37
• 2.3.6 小鼠T淋巴細(xì)胞CD69、CD25表達(dá)動力學(xué)研究37-38
• 2.3.7 流式細(xì)胞儀進(jìn)行抗體的滴定38
• 2.3.8 細(xì)胞表面流式染色38-39
• 2.3.9 細(xì)胞因子流式染色39
• 2.3.10 RNA提取39-40
• 2.3.11 逆轉(zhuǎn)錄40-41
• 2.4 實驗設(shè)計41-45
• 2.4.1 M-CSF與不同濃度的TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs對CD4+T細(xì)胞增殖的影響41-42
• 2.4.2 M-CSF與不同濃度的TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs對CD8+T細(xì)胞增殖的影響42
• 2.4.3 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs的表型鑒定42
• 2.4.4 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs對T細(xì)胞早期活化標(biāo)志CD69的影響42-43
• 2.4.5 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs對T細(xì)胞晚期活化標(biāo)志CD25的影響43
• 2.4.6 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs對CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ 的影響43
• 2.4.7 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs免疫抑制功能相關(guān)細(xì)胞因子的檢測 .. 3043
• 2.4.8 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs通過引發(fā)精氨酸耗竭機(jī)制發(fā)揮抑制功能43-45
• 第三章 結(jié)果45-56
• 3.1 M-CSF與不同濃度的TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs對CD4+T細(xì)胞增殖的影響45-46
• 3.2 M-CSF與不同濃度的TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs對CD8+T細(xì)胞增殖的影響46-47
• 3.3 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs的表型鑒定47-49
• 3.4 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs對T細(xì)胞早期活化標(biāo)志CD69的影響49
• 3.5 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs對T細(xì)胞晚期活化標(biāo)志CD25的影響49-50
• 3.6 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs對CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ 的影響50-52
• 3.7 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs免疫抑制功能相關(guān)細(xì)胞因子的檢測52-53
• 3.8 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs通過引發(fā)精氨酸耗竭機(jī)制發(fā)揮抑制功能53-56
• 第四章 討論56-60
• 4.1 TGF-β 對M-CSF-MDSCs免疫抑制功能的影響56-57
• 4.2 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)M-MDSCs的表型鑒定57
• 4.3 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)MDSCs通過引發(fā)精氨酸耗竭機(jī)制發(fā)揮抑制功能57-58
• 4.4 M-CSF與TGF-β 聯(lián)合誘導(dǎo)產(chǎn)生MDSCs的臨床應(yīng)用前景58-60
• 第五章 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-73
• 致謝73-74
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄74-75

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 喻蓉;于化鵬;;髓源抑制性細(xì)胞在非腫瘤疾病中的研究進(jìn)展[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2013年10期

2 吳繼勇;嚴(yán)道南;馬華安;朱蕓;張世中;胡瑤;;鼻敏感顆粒對變應(yīng)性鼻炎小鼠樹突狀細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2014年13期

3 姜南雁;唐雋;徐云升;;GM-CSF在腫瘤免疫治療中的作用最新研究進(jìn)展[J];免疫學(xué)雜志;2015年08期

4 覃寶雄;詹金熹;李云;伍學(xué)恒;蒲仕明;周祖平;;G-MDSC在腫瘤發(fā)生中細(xì)胞豐度、周期及DNA合成的變化[J];臨床血液學(xué)雜志;2015年05期

5 雷愛華;周潔;;髓系衍生的抑制性細(xì)胞與腫瘤免疫耐受關(guān)系的研究進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2014年01期

6 李杰;郭秋均;林洪生;;中醫(yī)藥對腫瘤免疫抑制微環(huán)境的調(diào)控作用及分子機(jī)制研究[J];世界中醫(yī)藥;2014年07期

7 張憲亮;徐波;彭海霞;賀強(qiáng);何標(biāo);季瀏;;急性游泳運(yùn)動對高脂膳食誘導(dǎo)肥胖小鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞激活、炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激的影響[J];體育科學(xué);2015年09期

8 王雪飛;張新寧;許勇;胡明根;許大彬;薛瑞華;劉榮;;胰腺癌微環(huán)境及其免疫抑制作用的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2015年28期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 江匯涓;MDSC在骨髓增生異常綜合征中免疫抑制作用的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

2 Samuel Essien-Baidoo;[D];江蘇大學(xué);2013年

3 劉積鋒;煙草煙霧提取物及紅霉素干預(yù)對樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞分化為Th17的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

4 陸寧;巨噬細(xì)胞中表皮生長因子受體激活對細(xì)胞因子及實驗性結(jié)腸炎的調(diào)節(jié)作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

5 陳穎;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中EGFR活化對上皮性卵巢癌惡性行為的影響及機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

6 陳小娟;胃癌中CD40信號調(diào)節(jié)髓源性抑制細(xì)胞（MDSC）生物學(xué)功能的研究[D];蘇州大學(xué);2015年

7 趙林濤;腫瘤對CD8~+T細(xì)胞定向遷移至次級淋巴器官的影響及機(jī)制探討[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張瑞平;阻斷單核細(xì)胞趨化蛋白-1對LPS誘導(dǎo)炎癥小鼠子宮巨噬細(xì)胞及TNF-α的影響[D];河南師范大學(xué);2013年

2 安亞南;胸腺免疫耐受對顱腦手術(shù)損傷保護(hù)作用的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

3 王婷;左旋咪唑體外調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答的分子機(jī)制初探[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2014年

4 劉紅梅;共刺激分子B7-H1對小鼠髓源性抑制細(xì)胞免疫抑制功能的調(diào)節(jié)作用研究[D];蘇州大學(xué);2014年

5 張亮;樹突狀細(xì)胞在腎癌發(fā)生發(fā)展中作用的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

6 申晉;胃癌CD40~+MDSC亞群的鑒定及生物學(xué)功能初步分析[D];蘇州大學(xué);2014年

7 陳鵬;P65、VEGF和MMP-9在骨肉瘤組織中的表達(dá)及臨床病理意義[D];蘇州大學(xué);2013年

8 張亞輝;5-氟尿嘧啶對荷瘤小鼠CD8~+T細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響及其機(jī)制的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

9 任菲菲;白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ下調(diào)MyD88~+人卵巢癌細(xì)胞介導(dǎo)的免疫抑制作用[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2014年

10 劉金秋;冷熱治療乳腺癌抑制轉(zhuǎn)移及誘發(fā)免疫響應(yīng)的研究[D];上海交通大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞集落刺激因子聯(lián)合轉(zhuǎn)化生長因子-β體外誘導(dǎo)髓源性抑制細(xì)胞的表型和功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：256919