【摘要】：NF-κ B和Cbl-b均是T細胞活化信號網(wǎng)絡中重要分子，其調(diào)控關(guān)系尚不完全清除。研究發(fā)現(xiàn)Cbl-b可影響T細胞內(nèi)NF-κ B水平。鑒于信號分子間調(diào)控作用的相互性，我們設(shè)想NF-κ B是否對Cbl-b也有調(diào)控作用？因此，我們分離一種T細胞特異性NF-κ B活化障礙小鼠的T細胞， western blot發(fā)現(xiàn)其Cbl-b顯著升高。利用AliBaba2.1軟件分析，發(fā)現(xiàn)Cbl-b啟動子中含有可與NF-κ B結(jié)合的核苷酸序列。這初步證實我們的設(shè)想。本項目將進一步利用EMSA來驗證NF-κ B與預測的Cbl-b啟動子中特定核苷酸序列結(jié)合及其特異性。通過轉(zhuǎn)染質(zhì)粒構(gòu)建NF-κ B P65超量表達，并通過雙報告基因技術(shù)觀察其對CBL-B啟動子序列介導的蛋白翻譯和轉(zhuǎn)錄的影響。還將應用小分子化合物下調(diào)T細胞內(nèi)NF-κ B，同時監(jiān)測Cbl-b mRNA的相應變化和T細胞活化情況。同時通過用小分子化合物體內(nèi)應用于CBL-B敲除小鼠的心臟移植模型，，觀察此NF-κ B抑制劑在野生型小鼠上引導的心臟移植物存活延長的效應能否同樣出現(xiàn)。以期從結(jié)構(gòu)和功能上證實NF-κ B對Cbl-b的調(diào)控，并為移植排斥反應的防治提供新的治療靶點。
【圖文】：

1.2 TCR 結(jié)合反應后，CBL-B 在 WT B6 小鼠 T 細胞中表現(xiàn)出濃度下降，而在Iκ Bα Δ N-Tg 小鼠 T 細胞中無類似反應。CD3/CD28 mAbs 體外能顯著夠刺激活化 B6 小鼠 T 細胞中 NF-κ Bp65（圖 2）。而在相同刺激處理的 Iκ Bα Δ N-Tg 小鼠 T 細胞中 NF-κ Bp65 沒有顯著活化（圖 2.）。已經(jīng)發(fā)表的實驗數(shù)據(jù)中，B6 小鼠 T 細胞中的 CBL-B 在被 CD3/CD28mAbs 刺激孵育 24h 后顯著降低（圖 2.）。但當 Iκ Bα Δ N-TgT 細胞被 CD3/CD28mAbs 刺激孵育 24h 后，CBL-B 無降低（圖 2.）鑒于 Iκ Bα Δ N-Tg 小鼠和 WTB6 小鼠的主要區(qū)別在于 T 細胞缺乏 NF-κ B 活化，我們推斷 T 細胞中 NF-κ B活化能夠影響 CBL-B 的蛋白水平。因此，我們引入了一種 NF-κ B 抑制劑熊果酸用于進一步檢驗此假設(shè)。

CD3/CD28 mAbs 的刺激能夠顯著活化細胞中 NF-κ Bp65，而熊果素能夠劑量依耐性抑制 NF-κ Bp65 的活化。T細胞胞漿中的 CBL-B在 CD3/CD28 抗體刺激 24h后顯著降低，但經(jīng)熊果素處理后，降低程度被削減。更重要的是，對 CBL-B的 降 低 的 抑 制 程 度 和 熊 果 素 濃 度 表 現(xiàn) 出 正 相 關(guān) （ 圖 3. ）。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363

【共引文獻】

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本文編號：2566763