【摘要】：NF-κ B和Cbl-b均是T細(xì)胞活化信號(hào)網(wǎng)絡(luò)中重要分子，其調(diào)控關(guān)系尚不完全清除。研究發(fā)現(xiàn)Cbl-b可影響T細(xì)胞內(nèi)NF-κ B水平。鑒于信號(hào)分子間調(diào)控作用的相互性，我們?cè)O(shè)想NF-κ B是否對(duì)Cbl-b也有調(diào)控作用？因此，我們分離一種T細(xì)胞特異性NF-κ B活化障礙小鼠的T細(xì)胞， western blot發(fā)現(xiàn)其Cbl-b顯著升高。利用AliBaba2.1軟件分析，發(fā)現(xiàn)Cbl-b啟動(dòng)子中含有可與NF-κ B結(jié)合的核苷酸序列。這初步證實(shí)我們的設(shè)想。本項(xiàng)目將進(jìn)一步利用EMSA來驗(yàn)證NF-κ B與預(yù)測(cè)的Cbl-b啟動(dòng)子中特定核苷酸序列結(jié)合及其特異性。通過轉(zhuǎn)染質(zhì)粒構(gòu)建NF-κ B P65超量表達(dá)，并通過雙報(bào)告基因技術(shù)觀察其對(duì)CBL-B啟動(dòng)子序列介導(dǎo)的蛋白翻譯和轉(zhuǎn)錄的影響。還將應(yīng)用小分子化合物下調(diào)T細(xì)胞內(nèi)NF-κ B，同時(shí)監(jiān)測(cè)Cbl-b mRNA的相應(yīng)變化和T細(xì)胞活化情況。同時(shí)通過用小分子化合物體內(nèi)應(yīng)用于CBL-B敲除小鼠的心臟移植模型，，觀察此NF-κ B抑制劑在野生型小鼠上引導(dǎo)的心臟移植物存活延長(zhǎng)的效應(yīng)能否同樣出現(xiàn)。以期從結(jié)構(gòu)和功能上證實(shí)NF-κ B對(duì)Cbl-b的調(diào)控，并為移植排斥反應(yīng)的防治提供新的治療靶點(diǎn)。
【圖文】：

1.2 TCR 結(jié)合反應(yīng)后，CBL-B 在 WT B6 小鼠 T 細(xì)胞中表現(xiàn)出濃度下降，而在Iκ Bα Δ N-Tg 小鼠 T 細(xì)胞中無類似反應(yīng)。CD3/CD28 mAbs 體外能顯著夠刺激活化 B6 小鼠 T 細(xì)胞中 NF-κ Bp65（圖 2）。而在相同刺激處理的 Iκ Bα Δ N-Tg 小鼠 T 細(xì)胞中 NF-κ Bp65 沒有顯著活化（圖 2.）。已經(jīng)發(fā)表的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中，B6 小鼠 T 細(xì)胞中的 CBL-B 在被 CD3/CD28mAbs 刺激孵育 24h 后顯著降低（圖 2.）。但當(dāng) Iκ Bα Δ N-TgT 細(xì)胞被 CD3/CD28mAbs 刺激孵育 24h 后，CBL-B 無降低（圖 2.）鑒于 Iκ Bα Δ N-Tg 小鼠和 WTB6 小鼠的主要區(qū)別在于 T 細(xì)胞缺乏 NF-κ B 活化，我們推斷 T 細(xì)胞中 NF-κ B活化能夠影響 CBL-B 的蛋白水平。因此，我們引入了一種 NF-κ B 抑制劑熊果酸用于進(jìn)一步檢驗(yàn)此假設(shè)。

CD3/CD28 mAbs 的刺激能夠顯著活化細(xì)胞中 NF-κ Bp65，而熊果素能夠劑量依耐性抑制 NF-κ Bp65 的活化。T細(xì)胞胞漿中的 CBL-B在 CD3/CD28 抗體刺激 24h后顯著降低，但經(jīng)熊果素處理后，降低程度被削減。更重要的是，對(duì) CBL-B的 降 低 的 抑 制 程 度 和 熊 果 素 濃 度 表 現(xiàn) 出 正 相 關(guān) （ 圖 3. ）。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2566763