【摘要】：目的:研究穩(wěn)定表達(dá)亨廷頓蛋白(Huntingtin,Htt)氨基末端片段Htt-586片段的PC12細(xì)胞在衣霉素誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的條件下,對Htt586片段的剪切與蓄積的影響。 方法:采用慢病毒表達(dá)系統(tǒng)建立高分化PC12細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)野生型與突變型Htt-586片段的亨廷頓舞蹈病的細(xì)胞模型,并用衣霉素處理制作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型。運用MTT法檢測衣霉素對細(xì)胞存活的影響,Western blot檢測CHOP、HSP70、Caspase-12蛋白的表達(dá)作為ER應(yīng)激的指標(biāo),檢測LC3,p62水平指示ER應(yīng)激條件下細(xì)胞自噬活性的改變,并檢測ER應(yīng)激條件下突變Huntingtin蛋白在細(xì)胞內(nèi)的剪切與蓄積情況。 結(jié)果:利用慢病毒表達(dá)系統(tǒng),建立了穩(wěn)定表達(dá)野生型與突變型Htt-586片段的PC12高分化細(xì)胞株;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑衣霉素(TM)在濃度為250 ng/ml下作用36 h能夠顯著激活穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激效應(yīng),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指示蛋白CHOP、caspsase-12顯著上升。同時,抗凋亡蛋白Bcl-2水平顯著下降。細(xì)胞的自噬指標(biāo)蛋白LC3-II水平明顯增加,p62升高。Htt586片段尤其是突變Htt586蓄積明顯增多。 結(jié)論:成功建立衣霉素介導(dǎo)的穩(wěn)定表達(dá)野生型與突變型Htt-586片段的PC12細(xì)胞株的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)模型。研究表明,衣霉素顯著誘導(dǎo)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,并進(jìn)而引起Htt蛋白的蓄積。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號：2564368