【摘要】：目的：通過研究在體外經(jīng)化學(xué)誘導(dǎo)劑對人大隱靜脈來源的血管內(nèi)皮細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞進行分離并向內(nèi)皮細胞分化培養(yǎng),比較兩種來源內(nèi)皮細胞的生物學(xué)特性及細胞功能,分析作為種子細胞的可行性,為將來組織工程中的應(yīng)用提供一定的研究基礎(chǔ)。 材料：在無菌狀態(tài)抽取我科手術(shù)患者胸骨骨髓10ml；取CABG術(shù)中剩余的大隱靜脈段。 方法：采用膠原酶消化法在體外分離培養(yǎng)大隱靜脈血管內(nèi)皮細胞(hECs);用密度梯度離心法分離培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞(hMSCs),并在體外經(jīng)VEGF、bFGF及ECGF因子向內(nèi)皮細胞誘導(dǎo)分化(hMSC-ECs),觀察細胞前后生物學(xué)特征,描述細胞周期及生長曲線；流式細胞儀(FCM)測定分化細胞的誘導(dǎo)率；免疫組化鑒定細胞表面抗原標志Vimentin及α-SMA,內(nèi)皮細胞特異性標志抗原CD31、CD34、Ⅷ因子；并用Western blot方法測定Ⅰ型膠原蛋白,測定內(nèi)皮細胞功能指標(NO, PGI2, ET-1及t-PA),進行統(tǒng)計學(xué)比較分析。 結(jié)果：人大隱靜脈來源的內(nèi)皮細胞分離培養(yǎng)初期生長增殖較慢,免疫組化染色示抗原CD34, CD31及Ⅷ因子陽性；人骨髓間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)生長增殖速度快,呈成纖維細胞方向生長；免疫組化示表達Vimentin及α-SMA,誘導(dǎo)后還表達CD31, CD34及Ⅷ因子相關(guān)抗原。Western blot結(jié)果顯示三種細胞均有分泌Ⅰ型膠原蛋白的功能;測定細胞功能示：hECs組中ET-1及PGI2的含量明顯高于其余兩組的含量(p0.01)；三組中細胞t-PA的含量無明顯差異p0.05)；NO含量測定示,hECs組與hMSC-ECs組間無明顯差異卻均明顯高于hMSCs組p0.05)。凍存復(fù)蘇后細胞各項特性功能無明顯變化。 結(jié)論：分別來源于人大隱靜脈和骨髓組織的hECs, hMSCs在體外利用膠原酶消化法和密度梯度離心法可以成功進行分離、培養(yǎng)及擴增,且在體外條件下可成功向內(nèi)皮細胞方向誘導(dǎo)分化,以hMSCs誘導(dǎo)前后生長能力和細胞功能均較強,即使年齡處于中老年階段者仍然能分離出足夠的細胞數(shù),獲取較為簡便,且已基本具備內(nèi)皮細胞的功能；hECs及hMSCs均可成為組織工程的種子細胞,雖然hECs在整體的細胞功能上稍高于hMSCs,但hMSCs具有的特殊生物學(xué)特性極有希望成為種子細胞的最佳選擇。
【圖文】：

hMSCs及hMSC一ECs的生長曲線圖

hECs生長曲線
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

【參考文獻】

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1 黃盛東 ,劉曉紅 ,楊立信 ,龔德軍 ,劉延玲 ,徐志云;血管內(nèi)皮細胞生長因子基因轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)大鼠骨髓基質(zhì)干細胞分化為內(nèi)皮細胞[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2003年12期

2 楊立信 ,徐志云 ,張寶仁 ,黃盛東 ,劉延玲;體外誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細胞向內(nèi)皮細胞分化的實驗研究(英文)[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2003年12期

3 丁偉榮;吳曉牧;饒燕飛;楊志剛;柳U，

本文編號：2560732