【摘要】：Toll樣受體,作為重要的模式識別受體,能通過識別不同的病原微生物,活化特異的信號通路,起始細胞因子的表達。在10種已知的人類TLRs中,TLR3識別雙鏈RNA (dsRNA),即一種在病毒基因組復制過程中常見的副產(chǎn)物或者中間產(chǎn)物。樹突狀細胞(DC)是最強的專職抗原遞呈細胞,在天然免疫和適應性免疫的銜接中起著重要的作用。應答病毒感染或病毒雙鏈RNA類似物poly(I:C)時,DC能分泌IFN-p,而IFN-p又能活化DC,促進DC成熟。同時,也有研究表明TLR3通路與一些疾病進程相關,可作為潛在治療靶點。深入研究小分子化合物的活性及機制,開發(fā)成新型小分子免疫抑制劑,將彌補治療手段的不足。 Chaeoglobosin Fex (Cha Fex)是從球毛殼菌QEN-14中分離出的一種細胞松弛素。我們前期研究發(fā)現(xiàn)Cha Fex能抑制LPS誘導的巨噬細胞TLR4信號通路的活化,其中主要是通過阻斷IκB-α的降解及JNK、ERK1/2和p38的磷酸化,來下調(diào)LPS誘導的TNF-α、IL-6和MCP-1的表達水平。然而,Cha Fex對其他種類的抗原遞呈細胞的功能與活化狀態(tài)是否也有類似的作用,還待進一步的確認。 目的：(1)研究Cha Fex對poly(I:C)誘導活化的骨髓衍生的樹突狀細胞的影響；(2)探討Cha Fex對DC的調(diào)控機制。 方法：從小鼠骨髓前體細胞中誘導樹突狀細胞作為研究對象。CCK-8分析法檢測Cha Fex對DC活力的影響。Annexin V/PI雙染法檢測Cha Fex對DC凋亡的影響。利用ELISA試劑盒檢測DC分泌IFN-β的情況。實時熒光定量PCR檢測靶基因mRNA表達水平。流式細胞術檢測DC表面標志�；旌狭馨图毎磻獧z測DC對T細胞的刺激能力。流式細胞術檢測DC對右旋糖酐和羅丹明標記的poly(I:C)的吞噬能力。最后,利用western blot分析Cha Fex對TLR3下游的IRF-3、NF-κB和MAPK信號通路活化情況的影響。 結果：在TLR3配體poly(I:C)活化的DC中,Cha Fex可以在mRNA和蛋白水平上降低IFN-p的表達,相關炎性因子(如IP-10,IL-6,IL-12,TNF-α和MCP-1)的表達也有所下調(diào)；抑制DC吞噬抗原的能力,下調(diào)表面標志(包括CD40、CD80、CD86和MHC Ⅱ)的表達,進而抑制其成熟。Cha Fex處理后,DC活化T淋巴細胞的能力顯著下降。在進一步探尋相關調(diào)控機制時發(fā)現(xiàn),Cha Fex并不影響DC對poly(I:C)的內(nèi)吞,但可抑制IκB-α、IRF-3、p38和JNK的磷酸化水平,而對ERK1/2沒有影響。 結論：Cha Fex這種小分子化合物能夠抑制poly(I:C)活化的DC的成熟和功能,通過調(diào)控TLR3通路發(fā)揮免疫抑制作用,這提示我們Cha Fex可能會成為治療自身免疫性疾病的潛在藥物。
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R392

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