【摘要】：[目的] 觀察雄激素在血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù)過程中的積極作用,研究其促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)、抑制凋亡的分子信號(hào)途徑,初步探討雄激素替代治療保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的臨床可行性。 [方法] 1.離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 采用H2O2(100μM)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞(ECV-304細(xì)胞)18小時(shí)建立離體細(xì)胞凋亡模型,實(shí)驗(yàn)組予以不同濃度二氫睪酮(0.01,0.1,1μM)預(yù)處理2小時(shí),利用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化,MTT方法檢測(cè)細(xì)胞活性改變,Annexin V-FITC/PI標(biāo)記的流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)凋亡細(xì)胞比例,Western blot方法檢測(cè)Caspase-3、Caspase-9和phospho-p38MAPK表達(dá)。 2.整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 應(yīng)用球囊導(dǎo)管損傷雄性去勢(shì)大兔的髂動(dòng)脈內(nèi)膜,建立內(nèi)膜損傷并雄激素水平低下的整體動(dòng)物模型,實(shí)驗(yàn)組肌注不同濃度十一酸睪酮(3mg/kg,6mg/kg,12mg/kg),利用光鏡和掃描電鏡觀察血管內(nèi)膜和內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)情況。 [結(jié)果] 1.細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察(熒光顯微鏡) ①正常對(duì)照組和二氫睪酮(1μM)對(duì)照組：細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),大小比較一致,形態(tài)規(guī)則呈梭形,胞膜完整,沒有明顯凋亡跡象； ②H2O2損傷組：多數(shù)細(xì)胞體積縮小,與周圍細(xì)胞脫離,胞膜仍完整,核質(zhì)濃縮,核膜核仁破壞,呈現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學(xué)改變； ③三組不同濃度二氫睪酮預(yù)處理組：細(xì)胞呈現(xiàn)抗凋亡跡象,高濃度二氫睪酮(1μM)預(yù)處理組,細(xì)胞形態(tài)與正常對(duì)照組非常接近。 2.細(xì)胞活性觀察(MTT法) 正常對(duì)照組和二氫睪酮對(duì)照組細(xì)胞活性無明顯差異,H2O2損傷組細(xì)胞活性顯著下降。經(jīng)過二氫睪酮預(yù)處理,細(xì)胞活性逐漸恢復(fù),特別是大劑量二氫睪酮預(yù)處理后,細(xì)胞活性與正常對(duì)照組無明顯差異 3.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡(Annexin V-FITC/PI標(biāo)記) 正常對(duì)照組凋亡細(xì)胞比例2.95%,二氫睪酮對(duì)照組3.92%,H2O2損傷后凋亡細(xì)胞比例高達(dá)49.96%。經(jīng)過二氫睪酮預(yù)處理,凋亡細(xì)胞逐漸下降至33.54%、20.04%和6.76%,高濃度二氫睪酮預(yù)處理組凋亡細(xì)胞接近正常對(duì)照組。 4.凋亡相關(guān)因子caspase-3,caspase-9和p-p38MAPK檢測(cè)(Western blot法) H202損傷組,活性片段Caspase-3、Caspase、9和p-p38MAPK條帶最明顯,經(jīng)過二氫睪酮預(yù)處理的三個(gè)實(shí)驗(yàn)組,條帶逐漸變淡,高濃度二氫睪酮預(yù)處理組條帶亮度與正常對(duì)照組接近。 5.雄激素替代治療對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)情況(整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)) 光鏡下正常對(duì)照組內(nèi)膜無明顯增生,單純球囊損傷組內(nèi)膜增生最明顯,不同濃度十一酸睪酮替代治療組,血管內(nèi)膜增生逐漸改善。掃描電鏡下正常對(duì)照組血管內(nèi)皮細(xì)胞呈梭形,排列有序,大小均一；單純?nèi)?shì)組,內(nèi)皮細(xì)胞完全破壞,罕見完整細(xì)胞；不同濃度十一酸睪酮替代治療組,內(nèi)皮細(xì)胞排列逐漸規(guī)則,形態(tài)逐漸呈梭形,大小逐漸均一,其中高濃度組內(nèi)皮細(xì)胞接近正常對(duì)照組。 [結(jié)論] 雄激素具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、促進(jìn)損傷修復(fù)的作用,合適濃度范圍內(nèi),該作用呈現(xiàn)劑量依賴性；caspase-3, caspase-9和p-p38MAPK活性片段表達(dá)水平下降與雄激素的這一保護(hù)作用有關(guān)。在動(dòng)物水平,雄激素替代治療具有保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞、修復(fù)內(nèi)膜的作用。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2554567