【摘要】：我國存在著世界上面積最大、最為復(fù)雜多樣的鼠疫自然疫源地,其中,青藏高原喜馬拉雅旱獺鼠疫自然疫源地是發(fā)生動(dòng)物鼠疫流行和人間鼠疫病例最多的疫源地之一。因此,系統(tǒng)研究喜馬拉雅旱獺鼠疫自然疫源地鼠疫菌的特征是我國鼠疫防治工作的重要組成部分,本研究包括兩部分內(nèi)容,即喜馬拉雅旱獺疫源地鼠疫菌默認(rèn)編碼序列差異位點(diǎn)特征的研究和用重組鼠疫菌素(Pst)檢測(cè)動(dòng)物和人血清中Pst抗體的研究。 一選擇喜馬拉雅旱獺疫源地的青藏高原型測(cè)序菌株Z176003的CDS序列與Default數(shù)據(jù)庫中的默認(rèn)編碼序列進(jìn)行比對(duì),通過分析與Z176003和云南玉龍測(cè)序菌株D106004基因組CDS位點(diǎn)的差異,并在青藏高原及相鄰鼠疫自然疫源地鼠疫菌(119株)中進(jìn)行驗(yàn)證,了解這些特征的分布情況和穩(wěn)定性。結(jié)果顯示：在6個(gè)基因位點(diǎn)(M4,12,3,6,8,9)基礎(chǔ)上,所有實(shí)驗(yàn)菌株表現(xiàn)為型間出現(xiàn)差異,而型內(nèi)高度一致。Ⅰ類西藏那曲、比如等地區(qū)的同型菌株與Z176003的測(cè)序結(jié)果完全一致,在上述位點(diǎn)保持了基本的原始狀態(tài)。Ⅱ類青藏高原地區(qū)菌株和青海田鼠菌株在M4,12位點(diǎn)保持與Z176003一致的原始狀態(tài)前提下,則在3,6,8,9位點(diǎn)分別出現(xiàn)了750bp,432bp,1446bp,2040bp的缺失。這些菌株的分離時(shí)間跨度為50多年,其分布的范圍包括西藏、青海、四川及甘肅的大部分喜馬拉雅疫源地,表明3,6,8,9位點(diǎn)在進(jìn)化過程中是比較活躍的,并已經(jīng)在這些地區(qū)形成了相對(duì)穩(wěn)定的遺傳學(xué)特征。Ⅲ類菌株主要包括滇西山地和玉龍的菌株,首先在M4、12位點(diǎn)發(fā)生了點(diǎn)突變,并表現(xiàn)為單個(gè)氨基酸的改變；同時(shí)在3,6,8,9位點(diǎn)也分別出現(xiàn)了750bp,432bp,1446bp,2040bp的缺失,顯示了與以上兩種類型疫源地鼠疫菌不同的特征,并穩(wěn)定存在于云南西北部的鼠疫自然疫源地。 二選取鼠疫菌的特異基因pst的重組克隆子經(jīng)IPTG誘導(dǎo),使其在宿主菌E.coliBL21中穩(wěn)定高效地表達(dá),用Ni-NTA柱親和層析技術(shù)純化并透析和濃縮的Pst抗原為基礎(chǔ)的ELISA間接法與鼠疫F1抗體的檢測(cè)方法,對(duì)青海省喜馬拉雅旱獺鼠疫自然疫源地內(nèi)大量不同地區(qū)、宿主以及時(shí)間的動(dòng)物和人血清樣本(375份)進(jìn)行了平行檢測(cè),分析結(jié)果顯示：人或動(dòng)物感染鼠疫菌后,早期血清中F1抗體達(dá)到一定水平時(shí),Pst抗體才出現(xiàn),并且隨著F1抗體的升高而升高,數(shù)月后仍維持在可檢出的水平。因此,當(dāng)動(dòng)物或人發(fā)生鼠疫感染之后,由鼠疫菌產(chǎn)生的Pst抗原應(yīng)該能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的Pst抗體。但是,如果在F1抗體水平較低的情況下,尚未檢出Pst抗體時(shí),仍然不能排除鼠疫感染的可能性。重組Pst作為一種新型的鼠疫血清學(xué)輔助診斷試劑與經(jīng)典的鼠疫檢測(cè)方法相結(jié)合,有助于解決鼠疫監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)工作中遇到的各種問題,使鼠疫的抗體檢測(cè)方法更具可靠性。
【圖文】：

引物C1部分菌株測(cè)序結(jié)果比較

圖6引物12部分菌株測(cè)序結(jié)果比較2.CDS上基因缺失的菌株的PCR擴(kuò)增電泳結(jié)果在圖7中PCR結(jié)果(一)，表示菌株中缺失目地CDS;同理，PCR結(jié)果(+)，，表示菌株中存在此目地CDS。M7系列多數(shù)菌株(113八19)PCR(+)，此特征與菌DIO6004相同，PCR(一)的特點(diǎn)與菌21760()3相同:3，6，8，9系列多數(shù)菌株(102/119)PCR卜)，此特征與菌DIO6004一樣，PCR(+)的特點(diǎn)與菌2176003一樣。23
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R378

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