【摘要】：目的構(gòu)建鼠疫耶爾森菌(鼠疫菌)中基因組無痕修飾的技術(shù)平臺(tái),深入研究鼠疫菌相關(guān)基因的功能及作用機(jī)制。方法通過不對(duì)稱PCR擴(kuò)增抗性盒片段(含修飾靶標(biāo)區(qū)域上下游同源臂),將其導(dǎo)入含pKD46質(zhì)粒的鼠疫菌中。在阿拉伯糖的誘導(dǎo)下,pKD46質(zhì)�？杀磉_(dá)與同源重組相關(guān)的3個(gè)酶(Exo,Beta和Gam蛋白),誘導(dǎo)重組后再導(dǎo)入p KSI-1質(zhì)粒與目的基因的重組載體,與抗性盒進(jìn)行第二次同源重組。通過加入阿拉伯糖和IPTG誘導(dǎo)pREDTKI表達(dá)重組酶和I-SceⅠ酶,可對(duì)未發(fā)生重組的抗性盒片段和p KSI-1質(zhì)粒上的I-SceⅠ位點(diǎn)酶切,從而起到消除抗性盒與質(zhì)粒作用,達(dá)到無痕修飾的目的。結(jié)果與結(jié)論成功構(gòu)建了鼠疫菌的Δwaa A和waa A(△9nt)兩個(gè)突變株。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇相應(yīng)的基因敲除方法,得到的無痕修飾菌株為鼠疫菌相關(guān)基因的功能研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué);軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;青海省地方病預(yù)防控制所;解放軍總醫(yī)院微生物科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上資助項(xiàng)目(31360034,31470138)
【分類號(hào)】：R378

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4 楊慧盈;一、鼠疫菌毒力相關(guān)蛋白與人蛋白相互作用的初步研究 二、鼠疫菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)內(nèi)蛋白相互作用及LcrG調(diào)控的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

5 李蓓;鼠疫耶爾森氏菌候選疫苗靶標(biāo)的篩選與初步驗(yàn)證[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

6 譚亞芳;鼠疫耶爾森氏菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)效應(yīng)蛋白YopK在致病機(jī)制中的作用研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

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本文編號(hào)：2552175