【摘要】：人胚胎干細(xì)胞（hESCs）是發(fā)育生物學(xué)研究和再生醫(yī)學(xué)研究的重要材料。不同hESCs細(xì)胞系之間的基因表達(dá)、表觀遺傳學(xué)模式以及分化傾向存在差異。建立更多的hESCs系有助于增加對細(xì)胞特性的了解。同時，在現(xiàn)有基礎(chǔ)上優(yōu)化hESCs的建系方法對于獲得達(dá)到臨床應(yīng)用級別的hESCs至關(guān)重要。 目的：以優(yōu)化的建系方法，獲得hESCs細(xì)胞系并探索其向神經(jīng)細(xì)胞分化的能力。方法：使用1ml注射器分離內(nèi)細(xì)胞團（ICM）建立hESCs系，并將其培養(yǎng)于小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）和人包皮成纖維細(xì)胞（HFF）制成的混合飼養(yǎng)層上，以機械法和酶消化法傳代培養(yǎng)。隨后將建立的hESCs系進行全能性鑒定，包括檢測干性基因表達(dá)和體內(nèi)外分化潛能。最后，將建立的hESCs細(xì)胞系于體外進行定向誘導(dǎo)，檢測其分化成神經(jīng)細(xì)胞的能力。結(jié)果：本研究使用1ml注射器以全機械法成功建立一株hESCs細(xì)胞系HN4，此細(xì)胞系具備hESCs的特性：典型的克隆形態(tài)；具有堿性磷酸酶活性；表達(dá)Oct-4,Nanog,Rex-1,SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-60, Tra-1-81,；體外長期傳代能維持正常的核型；具有在體內(nèi)外分化成具有三個胚層來源組織的能力。同時，HN4能夠在體外定向誘導(dǎo)分化成神經(jīng)干細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞。意義：本研究創(chuàng)新使用的1ml注射器全機械建系法省時省力、經(jīng)濟、無異源化合物污染，是一項值得廣泛推廣的建系方法。本研究建立的hESCs細(xì)胞系具有分化全能性并且具備定向分化為神經(jīng)細(xì)胞的潛能，是體外研究人胚胎發(fā)育和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育以及神經(jīng)退行性疾病治療研究的理想細(xì)胞系。
【圖文】：

圖 1.1. 全機械法分離 ICM 建立胚胎干細(xì)胞系[16]3.3. 全胚胎培養(yǎng)法由于目前真正用于 hES 研究的胚胎大多數(shù)是由于質(zhì)量較差而被捐獻(xiàn)的胚許多囊胚可能形態(tài)不是很好，ICM 很小或不明顯，這樣就給免疫外科法和機離法帶來困難。Kim 等[17]將此類胚胎經(jīng)過自然孵化或酶解法脫掉透明帶后直種于飼養(yǎng)層細(xì)胞上，通過反復(fù)傳代提出 TE 細(xì)胞和已分化的細(xì)胞，并成功建hES 細(xì)胞系。該方法的優(yōu)點是操作簡單、分離過程無動物源物質(zhì)污染。但是未去除 TE 細(xì)胞，需要經(jīng)過更多代數(shù)的傳代純化才能建立 hES 細(xì)胞系，建系較低。3.4. 激光法2008 年，，Cortes 等人用激光打孔破壞滋養(yǎng)外胚層的方法提高小鼠 ICM和 ES 細(xì)胞建系的效率[18]，很快激光作為代替免疫外科法的方法同樣被用于

建立HN4
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R329

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本文編號：2552022