發(fā)布時間：2019-10-13 11:55

【摘要】：谷氨酸脫氫酶(glutamate dehydrogenase, GDH)是參與谷氨酸新陳代謝的關(guān)鍵酶之一,它以NAD/NADP作為輔酶,可逆的催化谷氨酸脫氨,使之形成α-酮戊二酸和氮,從而參與谷氨酸的合成與分解。作為一種脫氫酶,它廣泛的存在于各種動植物以及微生物體內(nèi),常以四聚體或六聚體的形式存在,在生物體的碳、氮代謝中起著非常重要的作用。該酶在醫(yī)藥衛(wèi)生以及化學(xué)分析等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用,到目前為止,已有多種來源的GDH得到了詳細(xì)研究,但未見豬腦GDH的研究報道。因此,本文以來源廣泛、廉價的豬腦為材料,對GDH進(jìn)行了分離純化以及部分酶學(xué)性質(zhì)研究,為GDH的深入研究和應(yīng)用提供了數(shù)據(jù)支持,為該酶的獲得提供了一條新的途徑。其結(jié)果如下： 1.豬腦谷氨酸脫氫酶的分離純化 新鮮豬腦通過冷凍、勻漿、硫酸銨沉淀DEAE-Sepharose離子交換層析以及Superdex-200凝膠過濾層析等方法,獲得了電泳純的豬腦谷氨酸脫氫酶。其回收率為24.61%,純化倍數(shù)為70.07倍,酶比活力為13.63U/mg。 2.豬腦谷氨酸脫氫酶的性質(zhì)研究 理化性質(zhì)研究表明,豬腦谷氨酸脫氫酶的全酶相對分子質(zhì)量和亞基相對分子質(zhì)量分別為330.08kD和56.04kD,推測該酶可能由6個相同亞基構(gòu)成。它的最適反應(yīng)溫度為55-C,最適pH值為8.2。該酶在40℃以下以及pH6-8有非常好的穩(wěn)定性,其對NADH的表觀Km值為0.084mmol／L。3.有機(jī)溶劑、化學(xué)試劑及金屬離子對豬腦谷氨酸脫氫酶的影響 甲醇、乙醇、異丙醇、SDS、草酸、抗壞血酸等對該酶有較強(qiáng)的抑制作用,而EDTA對該酶則表現(xiàn)出一定的激活作用。Ca2+、Mg2+、Mn2+、Ba2+對豬腦谷氨酸脫氫酶表現(xiàn)出一定的抑制作用,而Cu2+、Co2+、Zn2+表現(xiàn)出的抑制作用卻非常明顯,最終都使酶幾乎完全失活,Na+、Li+、K+則對該酶沒有表現(xiàn)出明顯的作用。 4.豬腦谷氨酸脫氫酶的功能基團(tuán)研究 功能基團(tuán)的修飾結(jié)果表明：半胱氨酸的巰基、甲硫氨酸的硫醚基可能是豬腦谷氨酸脫氫酶活性中心的必需基團(tuán),參與了該酶活性中心的構(gòu)成。而絲氨酸殘基、組氨酸咪唑基、精氨酸胍基、二硫鍵、酪氨酸酚羥基、賴氨酸ε-氨基等上述幾種基團(tuán)可能不是豬腦谷氨酸脫氫酶活性中心的必需基團(tuán)或者只有極少數(shù)的上述幾種基團(tuán)是該酶活性中心的必需基團(tuán)。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R341

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 付海英;張紀(jì)周;楊宇丹;孫聰;遇紅梅;李奇;洪敏;;海洛因?qū)Υ笫蠊劝彼崦摎涿富虮磉_(dá)的影響[J];中國藥物依賴性雜志;2006年06期

2 吳云林;胡依群;;谷氨酸脫氫酶診斷肝病的新研究[J];國外醫(yī)學(xué).內(nèi)科學(xué)分冊;1984年12期

3 曹燕,王柏山,牛廣華,趙高陽;谷氨酸脫氫酶檢測在慢性肝炎中的應(yīng)用[J];上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志;2003年04期

4 蘇長蘭;;殼聚糖固定谷氨酸脫氫酶的研究[J];現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2006年02期

5 王丹;陳錦華;蘭小鵬;江藝;;血清谷氨酸脫氫酶對肝移植患者的預(yù)后評價[J];福州總醫(yī)院學(xué)報;2007年03期

6 張立江;王佳楠;高俊芬;;速率法檢測血清GLDH120例臨床分析[J];中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè)半月刊);2008年11期

7 李先富;潘秀珍;趙華梅;王長軍;唐家琪;;2型豬鏈球菌谷氨酸脫氫酶單克隆抗體的制備與鑒定[J];東南國防醫(yī)藥;2010年05期

8 朱漢明,夏臘菊,陳芳,柯三才,李小明;酶法測定血氨[J];湖北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1999年02期

9 李妍,寧云山,李莉,吳錦雅,董文其,李明;抗惡性瘧原蟲重組谷氨酸脫氫酶單克隆抗體的制備及其鑒定[J];中國寄生蟲病防治雜志;2004年03期

10 王丹;陳錦華;蘭小鵬;江藝;;血清谷氨酸脫氫酶對肝移植患者的預(yù)后評價[J];中國實驗診斷學(xué);2006年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李妍;寧云山;郝文波;李莉;李明;;惡性瘧原蟲(FCC1/HN)谷氨酸脫氫酶(GDH)融合蛋白的復(fù)性及純化的研究[A];中國動物學(xué)會原生動物學(xué)分會第十二次學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2003年

2 李林海;李明;吳英松;王萍;;惡性瘧原蟲海南株(FCC1/HN)谷氨酸脫氫酶基因的克隆及序列分析[A];中國原生動物學(xué)學(xué)會第十一次學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2001年

3 范曉軒;徐紅;張旭家;楊福愉;;豬腦突觸體膜Ca~(2+)-ATPase的純化及GM_3的激活效應(yīng)[A];第七屆全國生物膜學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編[C];1999年

4 魏勇;應(yīng)大君;張偉;董世武;;幼齡家豬腦SVZ神經(jīng)干細(xì)胞的分離與鑒定[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

5 張燕;高中洪;;Hemin催化H_2O_2-NaNO_2氧化及硝化谷氨酸脫氫酶：硝化修飾無損其活性[A];第五屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2007年

6 李茂寧;趙武;秦毅斌;盧冰霞;李斌;梁家幸;肖愛歡;何穎;蘇乾蓮;梁保忠;覃勇;張偉;韋建華;曹國敏;黃偉堅;;廣西豬乙型腦炎病毒的分離與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

7 許志強(qiáng);陳曼娥;蔣曉江;;急性腦血管病患者心電圖改變與血漿NPY活性相關(guān)性研究[A];2000年全國危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2000年

8 陳奎發(fā);焦鵬;曹竹安;;谷氨酰胺合成途徑中的相關(guān)酶系及其基因工程改造[A];中國生物工程學(xué)會第三次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2001年

9 安玉會;賀付成;魏重琴;郭茂峰;鄭香梅;;酸性牛神經(jīng)肽1(ABNP-1)對小鼠腦內(nèi)氨基酸遞質(zhì)和第二信使物質(zhì)的影響[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

10 劉建紅;朱習(xí)平;梁大華;蔡保芳;梅芬娥;覃安妮;;巴馬小型豬制作睡眠呼吸障礙動物模型初探[A];中國睡眠研究會第二屆學(xué)術(shù)年會論著匯編[C];2001年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 羅聯(lián)輝;火烙療法治療豬腦脊髓炎[N];中國畜牧報;2002年

2 李荔;豬腦有望治“癡呆”[N];北京科技報;2010年

3 ;豬腦垂體促黃體素[N];河南科技報;2004年

4 華 夏;春補(bǔ)有美食[N];中國中醫(yī)藥報;2005年

5 少軒;食療健腦強(qiáng)記憶[N];中國醫(yī)藥報;2002年

6 ;防衰抗老“七字訣”[N];大眾科技報;2001年

7 ;富含鈣的食品[N];山西科技報;2002年

8 翟泰豐;心魂相守的患難夫妻[N];文學(xué)報;2004年

9 涂新山;組裝生命？[N];大眾衛(wèi)生報;2001年

10 文 陳德興（教授）;健忘該如何調(diào)補(bǔ)[N];上海中醫(yī)藥報;2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 王j;生物電阻抗斷層成像系統(tǒng)在豬腦內(nèi)血腫模型急性期實時監(jiān)護(hù)的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

2 張燕;鐵超載肝損傷機(jī)理及黃芩苷干預(yù)作用的研究[D];華中科技大學(xué);2009年

3 付海英;海洛因依賴動物腦嘌呤核苷酸及谷氨酸代謝變化與嘌呤核苷酸補(bǔ)償?shù)纳飳W(xué)效應(yīng)研究[D];吉林大學(xué);2007年

4 方馬榮;視覺細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)及傳導(dǎo)與視覺、軀體感覺刺激相關(guān)的皮層激活fMRI實驗研究[D];浙江大學(xué);2005年

5 劉臻;不同倍性鯽鯉蛋白質(zhì)代謝相關(guān)基因的克隆與表達(dá)研究[D];湖南師范大學(xué);2012年

6 閆峰賓;捻轉(zhuǎn)血矛線蟲成蟲免疫蛋白組和比較蛋白組研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 鄧玉;豬腦谷氨酸脫氫酶的分離純化及性質(zhì)和功能基團(tuán)研究[D];西南大學(xué);2012年

2 趙華梅;豬鏈球菌2型谷氨酸脫氫酶的克隆表達(dá)、單抗制備及核酸疫苗的初步研究[D];南京師范大學(xué);2006年

3 周衛(wèi);滲透脅迫對水稻氨同化酶的影響[D];武漢大學(xué);2004年

4 張吉;絲瓜種子萌發(fā)及子葉發(fā)育階段碳氮代謝相關(guān)酶的研究[D];武漢大學(xué);2004年

5 高云;大鼠腦組織中谷氨酸表達(dá)及其代謝的變化與癲癇相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

6 王丹;肝移植患者血清谷氨酸脫氫酶活性對供肝熱/冷缺血保存、再灌注損傷及肝移植預(yù)后的酶學(xué)診斷研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2005年

7 宋香;稀土離子Ce～（3+）對谷氨酸棒桿菌S_（9114）生長和發(fā)酵的影響[D];江南大學(xué);2005年

8 王少華;嗎啡對C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞NO、Glu和Gln含量及其代謝相關(guān)酶基因表達(dá)的影響[D];吉林大學(xué);2008年

9 曹艷;利用葡萄糖濃度在線控制系統(tǒng)提高谷氨酸發(fā)酵性能[D];江南大學(xué);2009年

10 于秋竹;氮素用量對飼用玉米氮代謝的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

，

本文編號：2548653