【摘要】：谷氨酸脫氫酶(glutamate dehydrogenase, GDH)是參與谷氨酸新陳代謝的關(guān)鍵酶之一,它以NAD/NADP作為輔酶,可逆的催化谷氨酸脫氨,使之形成α-酮戊二酸和氮,從而參與谷氨酸的合成與分解。作為一種脫氫酶,它廣泛的存在于各種動(dòng)植物以及微生物體內(nèi),常以四聚體或六聚體的形式存在,在生物體的碳、氮代謝中起著非常重要的作用。該酶在醫(yī)藥衛(wèi)生以及化學(xué)分析等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用,到目前為止,已有多種來源的GDH得到了詳細(xì)研究,但未見豬腦GDH的研究報(bào)道。因此,本文以來源廣泛、廉價(jià)的豬腦為材料,對(duì)GDH進(jìn)行了分離純化以及部分酶學(xué)性質(zhì)研究,為GDH的深入研究和應(yīng)用提供了數(shù)據(jù)支持,為該酶的獲得提供了一條新的途徑。其結(jié)果如下： 1.豬腦谷氨酸脫氫酶的分離純化 新鮮豬腦通過冷凍、勻漿、硫酸銨沉淀DEAE-Sepharose離子交換層析以及Superdex-200凝膠過濾層析等方法,獲得了電泳純的豬腦谷氨酸脫氫酶。其回收率為24.61%,純化倍數(shù)為70.07倍,酶比活力為13.63U/mg。 2.豬腦谷氨酸脫氫酶的性質(zhì)研究 理化性質(zhì)研究表明,豬腦谷氨酸脫氫酶的全酶相對(duì)分子質(zhì)量和亞基相對(duì)分子質(zhì)量分別為330.08kD和56.04kD,推測(cè)該酶可能由6個(gè)相同亞基構(gòu)成。它的最適反應(yīng)溫度為55-C,最適pH值為8.2。該酶在40℃以下以及pH6-8有非常好的穩(wěn)定性,其對(duì)NADH的表觀Km值為0.084mmol／L。3.有機(jī)溶劑、化學(xué)試劑及金屬離子對(duì)豬腦谷氨酸脫氫酶的影響 甲醇、乙醇、異丙醇、SDS、草酸、抗壞血酸等對(duì)該酶有較強(qiáng)的抑制作用,而EDTA對(duì)該酶則表現(xiàn)出一定的激活作用。Ca2+、Mg2+、Mn2+、Ba2+對(duì)豬腦谷氨酸脫氫酶表現(xiàn)出一定的抑制作用,而Cu2+、Co2+、Zn2+表現(xiàn)出的抑制作用卻非常明顯,最終都使酶幾乎完全失活,Na+、Li+、K+則對(duì)該酶沒有表現(xiàn)出明顯的作用。 4.豬腦谷氨酸脫氫酶的功能基團(tuán)研究 功能基團(tuán)的修飾結(jié)果表明：半胱氨酸的巰基、甲硫氨酸的硫醚基可能是豬腦谷氨酸脫氫酶活性中心的必需基團(tuán),參與了該酶活性中心的構(gòu)成。而絲氨酸殘基、組氨酸咪唑基、精氨酸胍基、二硫鍵、酪氨酸酚羥基、賴氨酸ε-氨基等上述幾種基團(tuán)可能不是豬腦谷氨酸脫氫酶活性中心的必需基團(tuán)或者只有極少數(shù)的上述幾種基團(tuán)是該酶活性中心的必需基團(tuán)。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R341

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本文編號(hào)：2548653