【摘要】：牛結(jié)核病(Bovine Tuberculosis,bTB)是一種嚴重危害養(yǎng)牛業(yè)的、人畜共患的慢性消耗性傳染病,主要由牛分枝桿菌(Mycobacterium bovis,M. bovis)感染所致。牛結(jié)核病的流行不僅嚴重影響到了畜牧業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展,而且對人類的健康和人類結(jié)核病的防控也造成了巨大的障礙�？ń槊�(BCG)是強毒性牛分枝桿菌經(jīng)歷230代傳代后的減毒株,作為疫苗應用已有多年的歷史,但仍有不足之處。 先天免疫和特異性的細胞免疫是機體抵抗結(jié)核感染的主要機制。從個體發(fā)育來看,當抗原物質(zhì)入侵機體以后,首先發(fā)揮作用的是先天免疫,而后產(chǎn)生特異性免疫。因此,先天免疫是一切免疫防護能力的基礎。 樹突狀細胞(DCs)是體內(nèi)最強大的專職抗原遞呈細胞(APC),是唯一能夠激活幼稚T細胞的APC,也是結(jié)核分枝桿菌在體內(nèi)的宿主細胞,在抗感染和免疫中具有重要意義。 IFN-γ是控制結(jié)核感染的關鍵性Th1型細胞因子,可以誘導Th0細胞向Th1細胞分化,活化更多對殺死或抑制結(jié)核分枝桿菌有非常重要作用的細胞毒性T細胞(CTL)和效應細胞,增加巨噬細胞清除結(jié)核分枝桿菌的能力。IFN-γ被認為是最主要的能激活巨噬細胞抵抗細胞內(nèi)病原體的先天免疫因子。 PTX3是先天體液免疫很重要的一個成分,在炎癥反應和防御某些肺部病原體感染中發(fā)揮著重要作用。多種微生物成分能通過相關的Toll樣受體被識別并激活樹突狀細胞,經(jīng)由相應的信號傳導通路誘導PTX3的產(chǎn)生。 本研究試圖用牛分枝桿菌和BCG作為模式菌,用樹突狀細胞作為體外感染的模式細胞,來探索先天免疫分子IFN-γ和PTX3在不同毒力株牛分枝桿菌差異誘導DCs免疫學效應的影響,以期闡釋毒力株牛分枝桿菌持續(xù)感染、逃避免疫和BCG疫苗保護作用或保護力不夠的原因。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下： (1) IFN-γ對不同毒力株M. bovis感染DCs分泌細胞因子的影響 通過ELISA檢測IL-4發(fā)現(xiàn),BCG感染組中IFN-γ對IL-4的分泌沒有什么影響。在M.bovis感染組,IFN-γ在12小時對IL-4的分泌起顯著抑制作用。對IL-10檢測發(fā)現(xiàn),BCG感染組的三個時間點,IFN-γ均能顯著抑制IL-10的分泌,而在M.bovis感染組,IFN-γ對IL-10的分泌幾乎沒有影響。檢測IL-12發(fā)現(xiàn),在BCG感染組,IFN-γ能降低IL-12的分泌,其中,12小時和24小時時差異顯著,而在M.bovis感染組中,三個時間點的IFN-γ均能顯著提高IL-12的分泌。ELISA檢測TNF-α發(fā)現(xiàn),IFN-γ在三個時間點的兩個感染組中均能顯著促進TNF-α的分泌。 (2)不同毒力株M. bovis差異誘導DCs分泌PTX3及信號通路的探索 實驗發(fā)現(xiàn)與空白組相比,BCG和M. bovis都能顯著刺激DCs分泌PTX3。可是,M.bovis感染組的PTX3分泌量要顯著少于BCG感染組。信號通路研究發(fā)現(xiàn)在BCG感染的DCs中,TLR2、TLR4和NF-κB的阻斷均顯著抑制PTX3的蛋白分泌,而在M. bovis感染的DCs中,TLR2和TLR4的阻斷沒有阻礙PTX3的分泌；NF-κB阻斷對PTX3的影響與BCG感染組一致。說明PTX3的分泌在BCG感染組中是受TLR2和TLR4/NF-кB信號通路的調(diào)節(jié),在M.bovis感染組,NF-κB的阻斷能顯著下調(diào)PTX3的分泌。研究發(fā)現(xiàn)利用單抗阻斷PTX3后DCs的成熟分化受到一定的抑制,說明PTX3有利于DCs的成熟和分化。 (3) IFN-γ、IL-1β、TNF-α、PGE2對感染不同毒力株M. bovis的DCs分泌PTX3的影響 IFN-γ預處理實驗發(fā)現(xiàn),在BCG感染組中,IFN-γ對PTX3表達以抑制為主而在M.bovis感染組則發(fā)現(xiàn)IFN-γ對PTX3 mRNA轉(zhuǎn)錄水平截然不同的影響,在12小時和24小時,IFN-γ均顯著誘導PTX3 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。IL-1β預處理實驗發(fā)現(xiàn),在BCG感染組中,IL-1β能顯著誘導PTX3的分泌,并且具有濃度依賴性,在M. bovis感染組中則顯示低濃度對PTX3的表達起促進作用,高濃度則為抑制作用。TNF-α預處理實驗發(fā)現(xiàn),在BCG感染組中,TNF-α在低濃度時能濃度依賴性誘導PTX3的分泌,但是過高的TNF-α則對PTX3分泌的促進作用受到抑制。在M.bovis感染組表現(xiàn)一定的濃度依賴性抑制PTX3的表達。PGE2預處理實驗發(fā)現(xiàn),當PGE2濃度達到一定水平時(200ng/mL)對PTX3的分泌具有濃度依賴性的抑制作用。還發(fā)現(xiàn)PGE2對DCs作用時間的長短也對PTX3的分泌造成影響,作用24小時時,PGE2對PTX3的分泌具有濃度依賴性的抑制作用,但是當作用時間長達36小時時,不同濃度的PGE2能顯著抑制PTX3到一致的低蛋白水平。
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：2548812