【摘要】：牛結(jié)核病(Bovine Tuberculosis,bTB)是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)牛業(yè)的、人畜共患的慢性消耗性傳染病,主要由牛分枝桿菌(Mycobacterium bovis,M. bovis)感染所致。牛結(jié)核病的流行不僅嚴(yán)重影響到了畜牧業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展,而且對(duì)人類的健康和人類結(jié)核病的防控也造成了巨大的障礙。卡介苗(BCG)是強(qiáng)毒性牛分枝桿菌經(jīng)歷230代傳代后的減毒株,作為疫苗應(yīng)用已有多年的歷史,但仍有不足之處。 先天免疫和特異性的細(xì)胞免疫是機(jī)體抵抗結(jié)核感染的主要機(jī)制。從個(gè)體發(fā)育來(lái)看,當(dāng)抗原物質(zhì)入侵機(jī)體以后,首先發(fā)揮作用的是先天免疫,而后產(chǎn)生特異性免疫。因此,先天免疫是一切免疫防護(hù)能力的基礎(chǔ)。 樹突狀細(xì)胞(DCs)是體內(nèi)最強(qiáng)大的專職抗原遞呈細(xì)胞(APC),是唯一能夠激活幼稚T細(xì)胞的APC,也是結(jié)核分枝桿菌在體內(nèi)的宿主細(xì)胞,在抗感染和免疫中具有重要意義。 IFN-γ是控制結(jié)核感染的關(guān)鍵性Th1型細(xì)胞因子,可以誘導(dǎo)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化,活化更多對(duì)殺死或抑制結(jié)核分枝桿菌有非常重要作用的細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)和效應(yīng)細(xì)胞,增加巨噬細(xì)胞清除結(jié)核分枝桿菌的能力。IFN-γ被認(rèn)為是最主要的能激活巨噬細(xì)胞抵抗細(xì)胞內(nèi)病原體的先天免疫因子。 PTX3是先天體液免疫很重要的一個(gè)成分,在炎癥反應(yīng)和防御某些肺部病原體感染中發(fā)揮著重要作用。多種微生物成分能通過(guò)相關(guān)的Toll樣受體被識(shí)別并激活樹突狀細(xì)胞,經(jīng)由相應(yīng)的信號(hào)傳導(dǎo)通路誘導(dǎo)PTX3的產(chǎn)生。 本研究試圖用牛分枝桿菌和BCG作為模式菌,用樹突狀細(xì)胞作為體外感染的模式細(xì)胞,來(lái)探索先天免疫分子IFN-γ和PTX3在不同毒力株牛分枝桿菌差異誘導(dǎo)DCs免疫學(xué)效應(yīng)的影響,以期闡釋毒力株牛分枝桿菌持續(xù)感染、逃避免疫和BCG疫苗保護(hù)作用或保護(hù)力不夠的原因。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下： (1) IFN-γ對(duì)不同毒力株M. bovis感染DCs分泌細(xì)胞因子的影響 通過(guò)ELISA檢測(cè)IL-4發(fā)現(xiàn),BCG感染組中IFN-γ對(duì)IL-4的分泌沒有什么影響。在M.bovis感染組,IFN-γ在12小時(shí)對(duì)IL-4的分泌起顯著抑制作用。對(duì)IL-10檢測(cè)發(fā)現(xiàn),BCG感染組的三個(gè)時(shí)間點(diǎn),IFN-γ均能顯著抑制IL-10的分泌,而在M.bovis感染組,IFN-γ對(duì)IL-10的分泌幾乎沒有影響。檢測(cè)IL-12發(fā)現(xiàn),在BCG感染組,IFN-γ能降低IL-12的分泌,其中,12小時(shí)和24小時(shí)時(shí)差異顯著,而在M.bovis感染組中,三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的IFN-γ均能顯著提高IL-12的分泌。ELISA檢測(cè)TNF-α發(fā)現(xiàn),IFN-γ在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的兩個(gè)感染組中均能顯著促進(jìn)TNF-α的分泌。 (2)不同毒力株M. bovis差異誘導(dǎo)DCs分泌PTX3及信號(hào)通路的探索 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與空白組相比,BCG和M. bovis都能顯著刺激DCs分泌PTX3。可是,M.bovis感染組的PTX3分泌量要顯著少于BCG感染組。信號(hào)通路研究發(fā)現(xiàn)在BCG感染的DCs中,TLR2、TLR4和NF-κB的阻斷均顯著抑制PTX3的蛋白分泌,而在M. bovis感染的DCs中,TLR2和TLR4的阻斷沒有阻礙PTX3的分泌；NF-κB阻斷對(duì)PTX3的影響與BCG感染組一致。說(shuō)明PTX3的分泌在BCG感染組中是受TLR2和TLR4/NF-кB信號(hào)通路的調(diào)節(jié),在M.bovis感染組,NF-κB的阻斷能顯著下調(diào)PTX3的分泌。研究發(fā)現(xiàn)利用單抗阻斷PTX3后DCs的成熟分化受到一定的抑制,說(shuō)明PTX3有利于DCs的成熟和分化。 (3) IFN-γ、IL-1β、TNF-α、PGE2對(duì)感染不同毒力株M. bovis的DCs分泌PTX3的影響 IFN-γ預(yù)處理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在BCG感染組中,IFN-γ對(duì)PTX3表達(dá)以抑制為主而在M.bovis感染組則發(fā)現(xiàn)IFN-γ對(duì)PTX3 mRNA轉(zhuǎn)錄水平截然不同的影響,在12小時(shí)和24小時(shí),IFN-γ均顯著誘導(dǎo)PTX3 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。IL-1β預(yù)處理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在BCG感染組中,IL-1β能顯著誘導(dǎo)PTX3的分泌,并且具有濃度依賴性,在M. bovis感染組中則顯示低濃度對(duì)PTX3的表達(dá)起促進(jìn)作用,高濃度則為抑制作用。TNF-α預(yù)處理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在BCG感染組中,TNF-α在低濃度時(shí)能濃度依賴性誘導(dǎo)PTX3的分泌,但是過(guò)高的TNF-α則對(duì)PTX3分泌的促進(jìn)作用受到抑制。在M.bovis感染組表現(xiàn)一定的濃度依賴性抑制PTX3的表達(dá)。PGE2預(yù)處理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),當(dāng)PGE2濃度達(dá)到一定水平時(shí)(200ng/mL)對(duì)PTX3的分泌具有濃度依賴性的抑制作用。還發(fā)現(xiàn)PGE2對(duì)DCs作用時(shí)間的長(zhǎng)短也對(duì)PTX3的分泌造成影響,作用24小時(shí)時(shí),PGE2對(duì)PTX3的分泌具有濃度依賴性的抑制作用,但是當(dāng)作用時(shí)間長(zhǎng)達(dá)36小時(shí)時(shí),不同濃度的PGE2能顯著抑制PTX3到一致的低蛋白水平。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 劉平;郭述良;羅永艾;;IL-4調(diào)控DC-SIGN表達(dá)對(duì)樹突狀細(xì)胞免疫學(xué)功能的影響及與結(jié)核病發(fā)生的關(guān)系[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年13期

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本文編號(hào)：2548812