【摘要】：腸道病毒71型(EV71)是引起嬰幼兒手足口病的主要病原體之一,其感染可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,約90%的手足口重癥病例均由EV71引起。目前EV71的致病機(jī)制尚不完全清楚,研究表明其感染后引起免疫系統(tǒng)的功能障礙與其致病機(jī)制相關(guān)。前期研究發(fā)現(xiàn),干擾素可以抑制EV71在小鼠中的復(fù)制,EV71編碼3C蛋白可以抑制干擾素的產(chǎn)生,但其具體機(jī)制尚不完全清楚。本文對(duì)EV713C蛋白對(duì)天然免疫的TLR3 (Toll-like receptor 3)信號(hào)通路的抑制作用和病毒對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用進(jìn)行了研究,并進(jìn)一步闡明了其作用的分子機(jī)制。 結(jié)果顯示,3C蛋白可以切割TLR3信號(hào)通路的效應(yīng)分子p干擾素TIR結(jié)構(gòu)域銜接蛋白(TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β, TRIF)并抑制其誘導(dǎo)的IFNβ和NF-κB啟動(dòng)子的激活。鑒于病毒感染后引起TRIF切割的機(jī)制一方面由病毒蛋白酶活性引起,另一重要原因是病毒感染引起半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)的激活,激活的Caspase引起TRIF切割。進(jìn)而通過(guò)Caspase抑制劑Z-VAD抑制實(shí)驗(yàn)及TRIF中Caspase切割位點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)3C蛋白誘導(dǎo)的TRIF切割并不依賴于Caspase。3C蛋白酶活性位點(diǎn)的突變實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)3C蛋白酶活性是TRIF切割所必需的。最后通過(guò)缺失突變和點(diǎn)突變的方法精確定位了3C蛋白在TRIF上的切割位點(diǎn)為Q312S313。所以EV71感染下調(diào)TLR3信號(hào)通路中的TRIF表達(dá)可能是其抑制Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的原因之一。 病毒感染后,機(jī)體除了通過(guò)產(chǎn)生干擾素來(lái)抑制病毒繁殖復(fù)制,還可以通過(guò)凋亡的方式來(lái)抑制病毒入侵,但是同時(shí)細(xì)胞凋亡也是病毒致病的主要機(jī)制之一。結(jié)果顯示,EV71感染RD細(xì)胞可以明顯的抑制細(xì)胞增殖,而這種抑制作用是由細(xì)胞凋亡引起的,因?yàn)橥ㄟ^(guò)檢測(cè)凋亡相關(guān)的重要蛋白,發(fā)現(xiàn)EV71感染可以引起Caspase3、8的激活,并且Caspase3底物PARP也可以被切割,說(shuō)明EV71感染RD細(xì)胞引起caspase依賴的細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞凋亡過(guò)程中凋亡蛋白Bax起著重要的作用,EV71感染RD細(xì)胞后不僅可以檢測(cè)到Bax蛋白表達(dá)的上調(diào),還可以檢測(cè)到Bax構(gòu)象變化,進(jìn)一步引起凋亡,說(shuō)明Bax在EV71誘導(dǎo)的凋亡中起著重要作用。 綜上所述,EV713C蛋白可通過(guò)切割TRIF來(lái)拮抗TLR3信號(hào)通路中干擾素的產(chǎn)生,有關(guān)結(jié)果揭示了EV71抑制宿主天然免疫的另一機(jī)制。EV71感染RD細(xì)胞可以誘導(dǎo)Caspase和Bax依賴的細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果為闡明EV71的致病機(jī)理提供了線索。
【圖文】：

71型可以誘導(dǎo)Jurket細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞SK一N一SH凋亡I6.’01，在其致病性中起著用。但是有關(guān)EV71在橫紋肌肉瘤細(xì)胞(RD)細(xì)胞中的凋亡機(jī)制研究還未本文通過(guò)凋亡重要特征蛋白的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)EV71感染RD細(xì)胞可以引起Casp細(xì)胞凋亡，并且Bax在其誘導(dǎo)的凋亡中起著重要的作用，為進(jìn)一步闡明其提供理論依據(jù)。EV71的基木特征顆粒結(jié)構(gòu)道病毒71型屬于小RNA病毒科，腸道病毒屬，歸屬于腸道病毒A。EV71病三十面體立體對(duì)稱的球形結(jié)構(gòu)，無(wú)包膜和突出，直徑約24一30nm，核酸為RNA，長(zhǎng)約7o00bp。病毒編碼的結(jié)構(gòu)蛋白VPI，VPZ，VP3和vP4構(gòu)成原聚體聚體再拼裝成亞單位，60個(gè)亞單位通過(guò)各自的結(jié)構(gòu)域相互連接，形成病毒l)。VPI，VPZ和VP3三個(gè)多膚暴露在病毒外殼的表面，而VP4包埋在病內(nèi)側(cè)與病毒核心緊密連接。

EV71病毒的基因組為含有約7000核營(yíng)酸的單股正鏈RNA，RNA中僅有一個(gè)開放閱讀框(ORF)，編碼含 2194個(gè)氨基酸的多聚蛋白，，在其兩側(cè)為5‘和3’非編碼區(qū)(UTRs)，3‘末端有多聚腺營(yíng)酸(polyA)尾(見圖2)，而其sr末端共價(jià)結(jié)合有一個(gè)小分子量的蛋白(VPg)。該病毒的基因組從5’末端至3’末端依次排列著含有746個(gè)核營(yíng)酸的5‘非編碼區(qū) (untranslationregion， UTR)、編碼區(qū)IA(多膚Vp4)、IB(多膚vpZ)、IC(多膚Vp3)、ID(多膚Vpl)、ZA(特異性蛋白酶)、ZB、ZC、3A、vPg(5‘末端結(jié)合蛋白)、3C(特異性蛋白酶)、3D(RNA多聚酶組分)、3‘末端非編碼區(qū)(83個(gè)核普酸)以及多聚腺普酸尾(AAAn)。病毒RNA正鏈和負(fù)鏈的5‘末端和3‘末端非編碼區(qū)中分別含有多膚翻譯的起始信號(hào)以及RNA合成的起始信號(hào)，VPg蛋白通過(guò)其酪氨酸殘基的輕基基團(tuán)與RNAS‘末端的pUpU形成的磷酸二酷鍵與基因組RNA結(jié)尸乙卜5’UTR通常折疊成多個(gè)特異性的空間結(jié)構(gòu)，這些結(jié)構(gòu)通過(guò)與宿主細(xì)胞蛋白因子結(jié)合，進(jìn)而在起始病毒基因組RNA的合成以及病毒蛋白的翻譯過(guò)程中發(fā)揮重要作用，此外，5’UTR結(jié)構(gòu)還涉及病毒的宿主范圍和病毒的毒力等多個(gè)方面的功能。EV71病毒基因組3’UTR區(qū)和多聚腺昔酸尾對(duì)病毒的感染性有重要作用[川。5’UTRPl飛 PZP33叫卜~~~~..~......歸、司卜...-~~~~~卜月卜..............H可可石廳一:}刁刁丁同才才一麗一〕一一。1.州”2，以沁彩助4
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R373

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2540082