本文關(guān)鍵詞：小鼠不同部位前列腺癌骨轉(zhuǎn)移模型的建立及方法改進(jìn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的將穩(wěn)定傳代的鼠前列腺癌細(xì)胞RM-1細(xì)胞懸液注射到小鼠(C57BL/6)的股骨骨髓腔和腰椎內(nèi),建立體內(nèi)前列腺癌股骨轉(zhuǎn)移及脊柱轉(zhuǎn)移的動(dòng)物模型,明確前列腺癌骨轉(zhuǎn)移成瘤進(jìn)程,探討構(gòu)建帶瘤生存期延長的模型方法,以提高模型實(shí)用性、科學(xué)性。為進(jìn)行不同部位的前列腺癌轉(zhuǎn)移骨的骨應(yīng)力改變的研究提供一個(gè)重要工具,也為腫瘤骨轉(zhuǎn)移的防治研究提供更符合臨床進(jìn)程的平臺。方法Ⅰ期實(shí)驗(yàn)取32只小鼠構(gòu)建股骨轉(zhuǎn)移模型,按接種腫瘤細(xì)胞時(shí)間隨機(jī)分為1天組、3天組、7天組和14天組,每組8只;所有小鼠以80mg/kg劑量進(jìn)行腹腔注射麻醉后,經(jīng)小鼠左后肢膝關(guān)節(jié)股骨端穿刺進(jìn)針入股骨骨髓腔,注入20μl RM-1細(xì)胞懸液(約1×106個(gè)/ml)。右股骨骨髓腔采用同樣方法穿刺注入同等體積細(xì)胞培養(yǎng)基作為自身對照。各組到時(shí)間處死小鼠,取雙側(cè)股骨組織,進(jìn)行檢測。另取10只C57BL/6小鼠,構(gòu)建脊柱轉(zhuǎn)移模型。同樣腹腔注射麻醉后,穿刺小鼠第5腰椎并注射20μl RM-1細(xì)胞懸液,2周后將其處死,取脊柱組織檢測。Ⅱ期實(shí)驗(yàn)將32只C57BL/6小鼠隨機(jī)分成GA、GB、GC、GD組,每組8只,分別以4個(gè)濃度梯度的RM-1細(xì)胞(高濃度組為約5×104個(gè)細(xì)胞;中濃度組為約2×104個(gè)細(xì)胞;低濃度組為約0.6×104個(gè)細(xì)胞;極低濃度組為約0.2×104個(gè)細(xì)胞)注射到小鼠左后肢股骨骨髓腔內(nèi),右后肢股骨骨髓腔內(nèi)注射等體積的RPMI-1640完全培養(yǎng)基作為自身對照。另取12只C57BL/6小鼠構(gòu)建脊柱組,分為JC、JD兩組,每組6只,分別以上述低濃度和極低濃度(約0.6×104個(gè)細(xì)胞和約0.2×104個(gè)細(xì)胞)RM-1細(xì)胞穿刺注射到小鼠腰椎內(nèi)。觀察記錄小鼠活動(dòng)變化、成瘤情況,測定瘤體大小及記錄存活時(shí)間。所有存活小鼠于第28天(4周)處死,取雙側(cè)股骨組織,進(jìn)行影像學(xué)檢查后測算灰度值(骨密度),并行組織病理學(xué)檢查,確定建模是否成功以及成瘤類型。結(jié)果 (1)Ⅰ期實(shí)驗(yàn)在廣州進(jìn)行(海拔0-5米,室溫18-24℃),1天組、3天組肉眼未見腫瘤生長,7天組和14天組在接種腫瘤細(xì)胞6~7天開始發(fā)現(xiàn)腫瘤生長,后腫瘤逐漸長大,生長迅速。因儀器緣故,所取標(biāo)本暫未進(jìn)行后續(xù)檢測。(2)Ⅱ期實(shí)驗(yàn)在昆明進(jìn)行(海拔1850-1900米,室溫6-12℃),在Ⅱ期1次實(shí)驗(yàn)中,出現(xiàn)大量(36只,股骨組23只,脊柱組13只)小鼠死亡;在改善了實(shí)驗(yàn)條件和操作后(保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的供氧和保暖,調(diào)整麻醉劑量為60mg/kg)進(jìn)行了Ⅱ期2次實(shí)驗(yàn),未再出現(xiàn)小鼠死亡現(xiàn)象。各濃度梯度小鼠均成瘤,接種腫瘤細(xì)胞后,飼養(yǎng)7天左右在小鼠穿刺部位觸及米粒大小結(jié)節(jié),接種兩周后腫瘤明顯可見,接種3周后腫瘤呈團(tuán)塊狀隆起,所有股骨轉(zhuǎn)移模型存活均超過28天。脊柱組接種小鼠前列腺癌細(xì)胞RM-1后4天出現(xiàn)小鼠雙下肢活動(dòng)受影響、跛行,7天可見腰部皮下包塊生長,且生長迅速,小鼠逐漸出現(xiàn)食欲減退,體重減輕,活動(dòng)減少,反應(yīng)遲緩,10天后出現(xiàn)弓背,16~18天明顯出現(xiàn)雙下肢活動(dòng)障礙、衰弱死亡。所有股骨轉(zhuǎn)移模型的腫瘤發(fā)生時(shí)間、生長速度,同組各小鼠間腫瘤大小無明顯差別。解剖所有荷瘤小鼠,肉眼大體觀察腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移情況,未發(fā)現(xiàn)明顯肝、腎、肺及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析,股骨轉(zhuǎn)移模型中,不同腫瘤細(xì)胞濃度在模型建立過程中對小鼠腫瘤生長、出現(xiàn)跛行的時(shí)間以及發(fā)生下肢癱瘓的時(shí)間的影響無明顯差別(P0.05);不同接種濃度對小鼠出現(xiàn)食欲下降、消瘦和精神萎靡的時(shí)間的影響也無明顯差別(P0.05)。將各組小鼠雙側(cè)股骨進(jìn)行X射線檢查后,用Photoshop軟件測算其灰度值(骨密度),發(fā)現(xiàn)接種腫瘤細(xì)胞一側(cè)股骨總體灰度較對照側(cè)低者占81.25%,相應(yīng)密度就較對照側(cè)高,說明成骨性轉(zhuǎn)移者占81.25%。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)病理學(xué)檢測結(jié)果:股骨骨髓腔內(nèi)和骨皮質(zhì)外均可見大量分化程度低的前列腺癌上皮細(xì)胞,成群密集分布,片狀排列,排列紊亂,異形性明顯,胞漿紅染,細(xì)胞核增大,大小不一,部分可見核仁。絕大部分為成骨性改變,并且與影像學(xué)檢測結(jié)果一致。骨皮質(zhì)可見明顯破壞、缺損,骨髓腔內(nèi)骨皮質(zhì)邊緣可見大量腫瘤性成骨,部分可見到死骨、壞死等改變。而對照一側(cè)股骨未見明顯骨質(zhì)破壞。脊柱轉(zhuǎn)移瘤標(biāo)本切片中,腫瘤細(xì)胞亦侵犯周圍肌肉組織,在骨膜和周圍肌纖維形成腫瘤性成骨,充分證實(shí)前列腺癌脊柱骨轉(zhuǎn)移模型構(gòu)建成功。結(jié)論1.本研究首次用同一種前列腺癌細(xì)胞株構(gòu)建了四肢骨和中軸骨的前列腺癌骨轉(zhuǎn)移體內(nèi)動(dòng)物模型,且構(gòu)建了生存時(shí)間明顯延長的股骨骨轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型。該前列腺癌骨轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型成瘤率高,腫瘤生長迅速并可穩(wěn)定復(fù)制。本研究還初步明確了PCa骨轉(zhuǎn)移成瘤的進(jìn)程。2.本研究建立的模型為探索前列腺癌不同部位骨轉(zhuǎn)移的發(fā)病機(jī)制及腫瘤骨轉(zhuǎn)移的防治提供了更符合臨床進(jìn)程的平臺。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 骨轉(zhuǎn)移 動(dòng)物模型 四肢 脊柱
【學(xué)位授予單位】：大理學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 1 前言12-15
• 2 材料和方法15-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及所需材料15-17
• 2.2 模型建立方法17-22
• 2.3 C57BL/6 小鼠前列腺癌骨轉(zhuǎn)移模型的觀察與檢測22-25
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理25-26
• 3 結(jié)果26-34
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)26-27
• 3.2 動(dòng)物飼養(yǎng)27
• 3.3 動(dòng)態(tài)觀察各組參數(shù)27-34
• 4 討論34-38
• 5 結(jié)論38-39
• 6 展望39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 附錄Ⅰ 論文相關(guān)圖片44-48
• 附錄Ⅱ 研究生期間發(fā)表論文48-49
• 附錄Ⅲ 英文縮略詞表49-50
• 文獻(xiàn)綜述50-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 個(gè)人簡歷60-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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  本文關(guān)鍵詞：小鼠不同部位前列腺癌骨轉(zhuǎn)移模型的建立及方法改進(jìn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：253604