【摘要】：目的 研究維甲酸和葉酸對神經(jīng)干細(xì)胞增殖、凋亡的影響,研究維甲酸和葉酸通過影響Notch信號通路對神經(jīng)干細(xì)胞分化的影響,為研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、神經(jīng)元軸突重塑、神經(jīng)再生及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療打下基礎(chǔ)。 方法 用不同濃度維甲酸刺激神經(jīng)干細(xì)胞,在干預(yù)過程中加入葉酸,運(yùn)用細(xì)胞免疫熒光和增殖實(shí)驗(yàn)來觀察維甲酸和葉酸對神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響;運(yùn)用DNA ladder、流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL實(shí)驗(yàn)技術(shù)來觀察維甲酸和葉酸對神經(jīng)干細(xì)胞凋亡的影響;運(yùn)用細(xì)胞免疫熒光、激光共聚焦、RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)來研究維甲酸和葉酸對神經(jīng)干細(xì)胞Notch信號通路的影響,并通過這條通路誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞畸形分化。 結(jié)果 1、適量維甲酸對神經(jīng)干細(xì)胞的增殖沒有明顯作用,和葉酸共用能夠促進(jìn)NSC增殖,且比單純使用葉酸增殖效果明顯。 2、過量全反式維甲酸能夠引起NSC凋亡,但是較高濃度葉酸能夠拮抗維甲酸的這種作用,使凋亡率下降。 3、1μM維甲酸能夠抑制Notch信號通路相關(guān)分子表達(dá),引起NSC定向分化為神經(jīng)元和星型膠質(zhì)細(xì)胞,但是不能分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞 4、維甲酸通過Notch通路引發(fā)的促分化作用可以被葉酸抑制或者減輕。
【圖文】：

傳代后神經(jīng)干細(xì)胞很快再次增殖并聚集形成大小不等的神經(jīng)球，表現(xiàn)出良好的活性和增殖能力（圖1-1B、C、D）。A：孕 15 天小鼠胚胎（18×）,B-D：培養(yǎng)中的 NSC（×40、×100、×200）圖 1-1 神經(jīng)干細(xì)胞的提取和培養(yǎng)Figure 1-1 The extraction and culture of NSC3.2 神經(jīng)干細(xì)胞具備自我更新能力免疫熒光激光共聚焦圖片顯示新增殖的細(xì)胞因?yàn)榕囵B(yǎng)基中事先加入 Brdu，它可以代替正常 DNA 中的堿基 T，，結(jié)合在新生細(xì)胞的細(xì)胞核的 DNA 中。在使用 HCl打開 DNA 結(jié)構(gòu)后可與 Brdu 抗體特異性結(jié)合，在免疫熒光實(shí)驗(yàn)中表示新生的神經(jīng)干細(xì)胞，Brdu 陽性（綠色）的細(xì)胞都表達(dá) Nestin 陽性（紅色），隨機(jī)在熒光顯微鏡下選擇 6 個(gè) 200 倍視野分別計(jì)數(shù)紅色和綠色的數(shù)目，Brdu 陽性細(xì)胞占所有 Nestin陽性細(xì)胞數(shù)量的 62%以上（圖 1-3），說明新生的細(xì)胞全部為神經(jīng)干細(xì)胞，該細(xì)胞具有很強(qiáng)的自我更新能力，符合神經(jīng)干細(xì)胞的特征（圖 1-2）。5

圖 1-2 神經(jīng)干細(xì)胞的 Nestin 和 Brdu 雙染激光共聚焦圖Figure1-2 The confocal lase of NSC of Nestin and Brdu double staining圖 1-3 平均每個(gè)視野 Nestin 陽性與 Brdu 陽性細(xì)胞數(shù)量對比圖（n=6）
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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本文編號：2535771