【摘要】：目的 研究維甲酸和葉酸對神經(jīng)干細胞增殖、凋亡的影響,研究維甲酸和葉酸通過影響Notch信號通路對神經(jīng)干細胞分化的影響,為研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、神經(jīng)元軸突重塑、神經(jīng)再生及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療打下基礎。 方法 用不同濃度維甲酸刺激神經(jīng)干細胞,在干預過程中加入葉酸,運用細胞免疫熒光和增殖實驗來觀察維甲酸和葉酸對神經(jīng)干細胞增殖的影響;運用DNA ladder、流式細胞術和TUNEL實驗技術來觀察維甲酸和葉酸對神經(jīng)干細胞凋亡的影響;運用細胞免疫熒光、激光共聚焦、RT-PCR、實時熒光定量PCR技術來研究維甲酸和葉酸對神經(jīng)干細胞Notch信號通路的影響,并通過這條通路誘導神經(jīng)干細胞畸形分化。 結果 1、適量維甲酸對神經(jīng)干細胞的增殖沒有明顯作用,和葉酸共用能夠促進NSC增殖,且比單純使用葉酸增殖效果明顯。 2、過量全反式維甲酸能夠引起NSC凋亡,但是較高濃度葉酸能夠拮抗維甲酸的這種作用,使凋亡率下降。 3、1μM維甲酸能夠抑制Notch信號通路相關分子表達,引起NSC定向分化為神經(jīng)元和星型膠質細胞,但是不能分化為少突膠質細胞 4、維甲酸通過Notch通路引發(fā)的促分化作用可以被葉酸抑制或者減輕。
【圖文】：

傳代后神經(jīng)干細胞很快再次增殖并聚集形成大小不等的神經(jīng)球，表現(xiàn)出良好的活性和增殖能力（圖1-1B、C、D）。A：孕 15 天小鼠胚胎（18×）,B-D：培養(yǎng)中的 NSC（×40、×100、×200）圖 1-1 神經(jīng)干細胞的提取和培養(yǎng)Figure 1-1 The extraction and culture of NSC3.2 神經(jīng)干細胞具備自我更新能力免疫熒光激光共聚焦圖片顯示新增殖的細胞因為培養(yǎng)基中事先加入 Brdu，它可以代替正常 DNA 中的堿基 T，，結合在新生細胞的細胞核的 DNA 中。在使用 HCl打開 DNA 結構后可與 Brdu 抗體特異性結合，在免疫熒光實驗中表示新生的神經(jīng)干細胞，Brdu 陽性（綠色）的細胞都表達 Nestin 陽性（紅色），隨機在熒光顯微鏡下選擇 6 個 200 倍視野分別計數(shù)紅色和綠色的數(shù)目，Brdu 陽性細胞占所有 Nestin陽性細胞數(shù)量的 62%以上（圖 1-3），說明新生的細胞全部為神經(jīng)干細胞，該細胞具有很強的自我更新能力，符合神經(jīng)干細胞的特征（圖 1-2）。5

圖 1-2 神經(jīng)干細胞的 Nestin 和 Brdu 雙染激光共聚焦圖Figure1-2 The confocal lase of NSC of Nestin and Brdu double staining圖 1-3 平均每個視野 Nestin 陽性與 Brdu 陽性細胞數(shù)量對比圖（n=6）
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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本文編號：2535771