【摘要】：目的:動脈粥樣硬化(AS)是威脅人類健康的主要疾病之一,對于AS發(fā)病機制一直是心血管疾病研究的熱點。其中血管平滑肌細胞(VSMC)由中膜層向內(nèi)膜下間隙遷移并導致異常增生是動脈粥樣硬化等心血管疾病發(fā)生發(fā)展的一個重要環(huán)節(jié)。PDGF作為一種強有力的體外趨化劑,可以誘導VSMC增殖和遷移。ROCK是Rho下游靶效應分子,分ROCKⅠ和ROCKⅡ兩種亞型,參與細胞遷移、細胞增殖、細胞粘附、細胞骨架重組等多種細胞行為,而這些功能又參與許多心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展,而ROCK參與細胞遷移的分子機制尚不十分清楚。有文獻報道,MAPK家族成員參與細胞的增殖和遷移,如p38 MAPK,ERK(胞外信號調(diào)節(jié)激酶)。此外在細胞遷移過程中,基質金屬蛋白酶(MMPs)可以廣泛降解ECM,為VSMC的遷移掃清道路,促進VSMC的遷移。本實驗研究目的在于通過PDGF介導血管平滑肌細胞遷移的模型,闡述ROCKⅠ亞型調(diào)控血管平滑肌細胞研究的分子機制,為闡明動脈粥樣硬化發(fā)生機理提供理論依據(jù)。 方法:(1)利用瞬時轉染和穩(wěn)定轉染方法過表達ROCKⅠ,通過RNA和蛋白水平檢測ROCKⅠ的表達情況;(2)利用Boyden chamber和劃痕方法,檢測ROCKⅠ過表達后,細胞的遷移情況;(3)利用Western blot方法,在10ng/ml PDGF刺激下,檢測p-ERK和p-p38在不同時間的表達情況;(4)利用Western blot方法,在不同濃度U0126(ERK抑制劑)和SB203580(p38抑制劑)處理下,檢測p-ERK和p-p38表達情況;(5)利用Boyden chamber法,在不同濃度U0126和SB203580處理下,檢測對細胞遷移的影響;(6)利用Western blot和明膠酶譜法,檢測U0126和SB203580對MMP2蛋白表達和活性的影響;(7)利用免疫熒光方法,在不同濃度U0126和SB203580處理下,檢測抑制劑對細胞偽足形成的影響。 結果:(1)瞬時轉染ROCKⅠ過表達后,細胞遷移明顯增加;(2) PDGF (10ng/ml)刺激下,p-ERK和p-p38表達水平分別出現(xiàn)峰值;(3)不同濃度U0126和SB203580處理下,p-ERK和p-p38表達隨濃度依賴性下降;(4)在不同濃度U0126和SB203580處理下,細胞遷移能力隨濃度依賴性下降;(5)U0126和SB203580均降低MMP2的蛋白表達和活性; (6)U0126和SB203580減少細胞偽足的形成。 結論:(1)進一步證實ROCKⅠ與血管平滑機細胞的遷移密切相關; (2) PDGF介導的細胞遷移,可能是通過Rho/ROCK/MAPK通路實現(xiàn)的,并通過降解細胞外基質,為細胞遷移提供條件。
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R363

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張娜娜;李茂蓮;邊云飛;高奮;楊慧宇;肖傳實;;腎素(前體)受體miRNA干擾質粒的構建及鑒定[J];中國動脈硬化雜志;2011年05期

2 李憲偉;姜維良;張英男;孫占峰;孫慶峰;張?zhí)烊A;馬軍;;microRNA-21對體外培養(yǎng)血管平滑肌細胞遷移能力的調(diào)控[J];中國血管外科雜志(電子版);2010年04期

3 劉晶;馬坤嶺;倪杰;黃文瑾;劉必成;陳壓西;阮雄中;;動脈粥樣硬化模型小鼠血管平滑肌細胞原代培養(yǎng)及鑒定[J];東南大學學報(醫(yī)學版);2011年04期

4 李巍;陳麗萍;李莉;緒廣林;何書英;;肝素十二糖對血管平滑肌細胞增殖作用的研究[J];中國臨床藥理學與治療學;2011年08期

5 趙俠;魯永織;張敏;林雪烽;徐建榮;王志榮;王向東;曹希傳;夏勇;李東野;張卓琦;;新型陽離子磷酸膽堿聚合物MPC_(30)-DEA_(70)轉染血管平滑肌細胞的體外研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學院學報;2011年08期

6 宋肖靜;王朝霞;徐汪節(jié);崔永萍;喬中東;;尼古丁對血管平滑肌細胞NF-κB通路的影響[J];生物物理學報;2011年08期

7 阮云軍;吳賽珠;邱健;向定成;董鳳英;賴文巖;;過氧化氫對老年大鼠血管平滑肌細胞增殖的影響[J];中華保健醫(yī)學雜志;2011年04期

8 李新榮;高景燕;鄧湘蕾;李艷平;;絲裂原蛋白激酶在糖尿病慢性血管并發(fā)癥中的作用[J];中國糖尿病雜志;2007年04期

9 韓麗萍;徐長慶;李鴻珠;龔永生;張卓然;;槲皮素對大鼠血管平滑肌肌張力的影響[J];浙江中醫(yī)藥大學學報;2011年04期

10 張宏偉;劉宇;楊野;張強;;c-Fos基因RNA干擾對大鼠血管平滑肌細胞表型及遷移的影響[J];中國醫(yī)科大學學報;2011年08期

相關會議論文 前10條

1 王芳;馬向華;沈捷;;吡格列酮對瘦素誘導的血管平滑肌細胞PCNA及OB—R表達的影響[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

2 何輝;樊瑜波;鄒遠文;宋錦t，

本文編號：2535599