【摘要】：目的:動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是威脅人類健康的主要疾病之一,對(duì)于AS發(fā)病機(jī)制一直是心血管疾病研究的熱點(diǎn)。其中血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)由中膜層向內(nèi)膜下間隙遷移并導(dǎo)致異常增生是動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病發(fā)生發(fā)展的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。PDGF作為一種強(qiáng)有力的體外趨化劑,可以誘導(dǎo)VSMC增殖和遷移。ROCK是Rho下游靶效應(yīng)分子,分ROCKⅠ和ROCKⅡ兩種亞型,參與細(xì)胞遷移、細(xì)胞增殖、細(xì)胞粘附、細(xì)胞骨架重組等多種細(xì)胞行為,而這些功能又參與許多心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展,而ROCK參與細(xì)胞遷移的分子機(jī)制尚不十分清楚。有文獻(xiàn)報(bào)道,MAPK家族成員參與細(xì)胞的增殖和遷移,如p38 MAPK,ERK(胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶)。此外在細(xì)胞遷移過程中,基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)可以廣泛降解ECM,為VSMC的遷移掃清道路,促進(jìn)VSMC的遷移。本實(shí)驗(yàn)研究目的在于通過PDGF介導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞遷移的模型,闡述ROCKⅠ亞型調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞研究的分子機(jī)制,為闡明動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生機(jī)理提供理論依據(jù)。 方法:(1)利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法過表達(dá)ROCKⅠ,通過RNA和蛋白水平檢測(cè)ROCKⅠ的表達(dá)情況;(2)利用Boyden chamber和劃痕方法,檢測(cè)ROCKⅠ過表達(dá)后,細(xì)胞的遷移情況;(3)利用Western blot方法,在10ng/ml PDGF刺激下,檢測(cè)p-ERK和p-p38在不同時(shí)間的表達(dá)情況;(4)利用Western blot方法,在不同濃度U0126(ERK抑制劑)和SB203580(p38抑制劑)處理下,檢測(cè)p-ERK和p-p38表達(dá)情況;(5)利用Boyden chamber法,在不同濃度U0126和SB203580處理下,檢測(cè)對(duì)細(xì)胞遷移的影響;(6)利用Western blot和明膠酶譜法,檢測(cè)U0126和SB203580對(duì)MMP2蛋白表達(dá)和活性的影響;(7)利用免疫熒光方法,在不同濃度U0126和SB203580處理下,檢測(cè)抑制劑對(duì)細(xì)胞偽足形成的影響。 結(jié)果:(1)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染ROCKⅠ過表達(dá)后,細(xì)胞遷移明顯增加;(2) PDGF (10ng/ml)刺激下,p-ERK和p-p38表達(dá)水平分別出現(xiàn)峰值;(3)不同濃度U0126和SB203580處理下,p-ERK和p-p38表達(dá)隨濃度依賴性下降;(4)在不同濃度U0126和SB203580處理下,細(xì)胞遷移能力隨濃度依賴性下降;(5)U0126和SB203580均降低MMP2的蛋白表達(dá)和活性; (6)U0126和SB203580減少細(xì)胞偽足的形成。 結(jié)論:(1)進(jìn)一步證實(shí)ROCKⅠ與血管平滑機(jī)細(xì)胞的遷移密切相關(guān); (2) PDGF介導(dǎo)的細(xì)胞遷移,可能是通過Rho/ROCK/MAPK通路實(shí)現(xiàn)的,并通過降解細(xì)胞外基質(zhì),為細(xì)胞遷移提供條件。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R363

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張娜娜;李茂蓮;邊云飛;高奮;楊慧宇;肖傳實(shí);;腎素(前體)受體miRNA干擾質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2011年05期

2 李憲偉;姜維良;張英男;孫占峰;孫慶峰;張?zhí)烊A;馬軍;;microRNA-21對(duì)體外培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞遷移能力的調(diào)控[J];中國(guó)血管外科雜志(電子版);2010年04期

3 劉晶;馬坤嶺;倪杰;黃文瑾;劉必成;陳壓西;阮雄中;;動(dòng)脈粥樣硬化模型小鼠血管平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年04期

4 李巍;陳麗萍;李莉;緒廣林;何書英;;肝素十二糖對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖作用的研究[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2011年08期

5 趙俠;魯永織;張敏;林雪烽;徐建榮;王志榮;王向東;曹希傳;夏勇;李東野;張卓琦;;新型陽離子磷酸膽堿聚合物MPC_(30)-DEA_(70)轉(zhuǎn)染血管平滑肌細(xì)胞的體外研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年08期

6 宋肖靜;王朝霞;徐汪節(jié);崔永萍;喬中東;;尼古丁對(duì)血管平滑肌細(xì)胞NF-κB通路的影響[J];生物物理學(xué)報(bào);2011年08期

7 阮云軍;吳賽珠;邱健;向定成;董鳳英;賴文巖;;過氧化氫對(duì)老年大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響[J];中華保健醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

8 李新榮;高景燕;鄧湘蕾;李艷平;;絲裂原蛋白激酶在糖尿病慢性血管并發(fā)癥中的作用[J];中國(guó)糖尿病雜志;2007年04期

9 韓麗萍;徐長(zhǎng)慶;李鴻珠;龔永生;張卓然;;槲皮素對(duì)大鼠血管平滑肌肌張力的影響[J];浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2011年04期

10 張宏偉;劉宇;楊野;張強(qiáng);;c-Fos基因RNA干擾對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞表型及遷移的影響[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年08期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王芳;馬向華;沈捷;;吡格列酮對(duì)瘦素誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞PCNA及OB—R表達(dá)的影響[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會(huì)暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

2 何輝;樊瑜波;鄒遠(yuǎn)文;宋錦t，

本文編號(hào)：2535599