【摘要】：目的：采用新生1~3天的Sprague-Dawley（SD）大鼠，提取其脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞后，并進(jìn)行培養(yǎng)傳代及鑒定。 方法：取新生1~3天的Sprague-Dawley大鼠2只，提取其脊髓制成懸液后，以107~109個(gè)/L轉(zhuǎn)移至75cm2培養(yǎng)瓶中，放入（37℃、5%CO_2）培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，通過差速貼壁、不同速度的搖床技術(shù)及逐漸傳代純化星形膠質(zhì)細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，并通過免疫熒光染色鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞。 結(jié)果：通過差速貼壁和不同速度的搖床技術(shù)結(jié)合可獲得較高純度的星形膠質(zhì)細(xì)胞，并隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞進(jìn)一步得到純化，形態(tài)逐漸發(fā)生變化；培養(yǎng)的細(xì)胞GFAP染色呈陽性，顯示星形膠質(zhì)細(xì)胞呈多邊形，胞膜光滑，邊界清楚，胞突長且相互連接。 結(jié)論：從乳大鼠的脊髓中可提取原代的星形膠質(zhì)細(xì)胞，并應(yīng)用差速貼壁和不同速度的搖床技術(shù)結(jié)合可獲得較高純度星形膠質(zhì)細(xì)胞。 目的：確定過氧化氫作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞的適當(dāng)濃度，制作理想的大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷模型；觀察17-β雌二醇對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)及生存率的影響。 方法：在成功培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞的基礎(chǔ)上，采用不同質(zhì)量濃度（1mmol/L、800μmol/L、600μmol/L、400μmol/L、200μmol/L、100μmol/L）的過氧化氫處理星形膠質(zhì)細(xì)胞，制作其損傷模型，并運(yùn)用MTT比色法檢測不同質(zhì)量濃度的過氧化氫對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的毒性作用，測定其在490nm處吸光度值（該值可反映星形膠質(zhì)細(xì)胞代謝活性的強(qiáng)弱，間接反映星形膠質(zhì)細(xì)胞的活性）。按下列公式計(jì)算抑制率：抑制率(IR％)=(1一處理組平均吸光度值／對(duì)照組平均吸光度值)×100％，并確定星形膠質(zhì)細(xì)胞半數(shù)致死時(shí)過氧化氫的濃度，，即抑制率為50%時(shí)過氧化氫的濃度。在確定過氧化氫的作用濃度后，按實(shí)驗(yàn)分組處理細(xì)胞，觀察17-β雌二醇對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及其吸光度值的影響。 結(jié)果：結(jié)果顯示，隨著過氧化氫濃度的增加，對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的抑制率越大，星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的越多；過氧化氫的濃度為400μmol/L時(shí)，抑制率約為50%，因此采用400μmol/L的過氧化氫制作星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷模型；過氧化氫處理后細(xì)胞的吸光度值降低，然而，17-β雌二醇預(yù)處理組，其吸光度值增加（F=69.69P=0.0050.01）。 結(jié)論：過氧化氫作用后，星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生變化，并發(fā)生了凋亡；17-β雌二醇能部分抑制過氧化氫對(duì)鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的損害作用，改善星形膠質(zhì)細(xì)胞的活力，即發(fā)揮對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用。 目的：探討17-β雌二醇抑制過氧化氫誘導(dǎo)鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的可能的具體作用機(jī)制，以期為臨床急性脊髓損傷的治療提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)資料。 方法：在成功建立星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷模型后，用20nmol/L17-β雌二醇進(jìn)行干預(yù)。通過光鏡觀察17-β雌二醇對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的影響，MTT方法檢測活力后應(yīng)用蛋白免疫印跡發(fā)檢測其對(duì)鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶與張力蛋白同源物基因(Phosphatase and tensin homologue deleted fromchromosome10PTEN)、磷酸化蛋白激酶B（Phosphorylation of protein kinaseB p-PKB或p-Akt）、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）和B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因（B cell lymphoma/lewkmia-2Bcl-2）蛋白的表達(dá)的影響。 結(jié)果：與對(duì)照組比較，過氧化氫處理后細(xì)胞PTEN、caspase3蛋白表達(dá)增加，Bcl-2、p-Akt蛋白表達(dá)減少，而17-β雌二醇預(yù)處理組與過氧化氫組比較，PTEN蛋白表達(dá)降低(F=290.003P=0.0010.01)、Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)（F=115.916P=0.0010.01）；caspase-3蛋白表達(dá)降低(F=46.158P=0.0230.05)、p-Akt蛋白表達(dá)上調(diào)（F=49.173P=0.0330.05）。 結(jié)論：17-β雌二醇可能通過下調(diào)PTEN蛋白，促進(jìn)p-Akt蛋白的表達(dá)，影響B(tài)cl-2、caspase-3蛋白的表達(dá)，最終抑制過氧化氫誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡，發(fā)揮對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用，從而減輕脊髓損傷，促進(jìn)脊髓神經(jīng)功能的恢復(fù)。因此，脊髓損傷后早期應(yīng)用雌激素配合其它藥物阻止膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡可能有助于減輕脊髓損傷的損害程度，促進(jìn)脊髓神經(jīng)功能的恢復(fù)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 曾琳;李民;劉媛;龍?jiān)谠?李書林;伍亞民;;原漿型和纖維型星形膠質(zhì)細(xì)胞調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的比較研究[J];創(chuàng)傷外科雜志;2007年02期

2 蔡其燕;姚忠祥;;腫瘤抑制因子PTEN蛋白在成年大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達(dá)[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年05期

3 陳義軍,章翔,費(fèi)舟,顧建文,劉衛(wèi)平;人腦膠質(zhì)瘤凋亡的原位研究[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年09期

4 黃月;許予明;張杰文;任秀花;索愛琴;;雌激素對(duì)AD模型大鼠腦內(nèi)P-Tau、ChAT和神經(jīng)生長因子蛋白表達(dá)的影響[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年10期

5 孫文閣;李春鵬;張曄;夏春林;;脊髓半切損傷后髓鞘堿性蛋白及膠質(zhì)纖維酸性蛋白的表達(dá)及意義[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年06期

6 李建軍,周紅俊,洪毅,季京平,劉根林,粟紹強(qiáng),趙超男,董云英,方玉美,譚鵬,周天健,張愛民,鄭櫻,北京市2002年脊髓損傷流行病學(xué)調(diào)查小組;2002年北京市脊髓損傷發(fā)病率調(diào)查[J];中國康復(fù)理論與實(shí)踐;2004年07期

7 韋永瓊;陳力學(xué);周冀英;曾照芳;申崇標(biāo);黃道超;崔智威;;下調(diào)PTEN對(duì)血管性癡呆大鼠海馬神經(jīng)元CREB的調(diào)節(jié)作用[J];中國老年學(xué)雜志;2010年24期

8 陳力學(xué);熊新;桂蓓;周冀英;;下調(diào)PTEN基因?qū)θX缺血大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和CREB表達(dá)的影響[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年06期

本文編號(hào)：2535956