本文關(guān)鍵詞：低氧微環(huán)境對(duì)腦星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡及對(duì)BCL-2表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分：星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)低氧微環(huán)境的耐受[目的]原發(fā)性腦損傷常導(dǎo)致腦組織局部甚至全腦的缺血缺氧,神經(jīng)元對(duì)缺血缺氧耐受性較差,易導(dǎo)致神經(jīng)元死亡。其修復(fù)過(guò)程中常伴有膠質(zhì)細(xì)胞的增生,增生的膠質(zhì)細(xì)胞逐漸填充神經(jīng)元死亡后的空缺。通過(guò)比較正常腦膠質(zhì)細(xì)胞常氧和低氧條件下的生長(zhǎng)及凋亡情況,探討星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)低氧微環(huán)境的耐受。[方法]通過(guò)三氣培養(yǎng)箱構(gòu)建低氧微環(huán)境,將腦膠質(zhì)細(xì)胞HAC設(shè)為常氧對(duì)照組(21%O2)和低氧處理組(0.1%O2、0.5%O2、1%O2),分別培養(yǎng)24h、48h、72h后顯微鏡下肉眼觀察各組細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并通過(guò)MTT法及Annexin V-FITC/PI染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖及凋亡情況,利用Western blot方法檢測(cè)HIF-1表達(dá)情況,了解低氧對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)及凋亡的影響,以探討低氧條件下神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的耐受能力。[結(jié)果]無(wú)論常氧對(duì)照組或者低氧處理組細(xì)胞均可存活及增殖,均無(wú)明顯細(xì)胞凋亡(P0.05)；隨著氧濃度遞增,細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯改變(P0.05)；Western blot方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)低氧處理組HIF-1α表達(dá)水平較常氧對(duì)照組明顯增高(P0.05),且隨著氧濃度逐漸降低,HIF-1α表達(dá)水平呈遞增趨勢(shì)(P0.05)；隨著時(shí)間延長(zhǎng),HIF-1α表達(dá)水平遞減(P0.05)。[結(jié)論]無(wú)論常氧對(duì)照組或者低氧處理組細(xì)胞均可存活及增殖,氧濃度低至0.1%,仍不能誘導(dǎo)腦膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生凋亡,但較常氧條件下細(xì)胞增殖減慢。低氧條件下HIF-1α表達(dá)增加。第二部分：低氧微環(huán)境對(duì)無(wú)糖逆境的保護(hù)作用及對(duì)BcI-2表達(dá)的影響[目的]腦組織在缺血缺氧的同時(shí)常常伴隨低糖甚至是無(wú)糖環(huán)境的出現(xiàn)。通過(guò)比較常糖和無(wú)糖條件下星形膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡情況,探討葡萄糖在細(xì)胞生長(zhǎng)中的影響；通過(guò)比較無(wú)糖逆境中常氧組和低氧組的細(xì)胞生長(zhǎng)情況,探討無(wú)糖逆境中低氧微環(huán)境對(duì)腦膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用。[方法]通過(guò)三氣培養(yǎng)箱建立極度低氧微環(huán)境,將正常腦膠質(zhì)細(xì)胞HAC分別設(shè)為常糖組(21%O2-High G)和無(wú)糖組(21%O2-NOG),分別培養(yǎng)24h、48h、72h、96h、120h,通過(guò)MTT法和Annexin V-FITC/PI染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖及凋亡情況�？紤]細(xì)胞在缺血缺氧的同時(shí)伴隨發(fā)生無(wú)糖的狀況,將HAC細(xì)胞分別設(shè)為常氧無(wú)糖組(21%O2-NO G)、低氧無(wú)糖組(0.1%O2-NO G),分別培養(yǎng)24h、48h、72h、96h、120h。通過(guò)相同方法檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡。并通過(guò)Western blot方法分別檢測(cè)常氧組和低氧組BCL-2表達(dá)量,驗(yàn)證Bcl-2的抑制凋亡作用。[結(jié)果]正常腦膠質(zhì)細(xì)胞HAC培養(yǎng)24h、48h、72h后無(wú)糖組(21%O2-NO G)和常糖組(21%02-High G)相比顯微鏡下肉眼觀察和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)均發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡更加明顯(P0.05); MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)兩組細(xì)胞均出現(xiàn)一定增殖,常糖組(21%02-High G)增殖更加明顯。正常腦膠質(zhì)細(xì)胞HAC培養(yǎng)24h、48h、72h后常氧無(wú)糖組(21%O2-No G)和低氧無(wú)糖組(0.1%-NoG)比較,顯微鏡下肉眼觀察及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)均發(fā)現(xiàn)常氧無(wú)糖組(21%02-No G)凋亡更加明顯(P0.05)；MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),低氧無(wú)糖組細(xì)胞較常氧無(wú)糖組細(xì)胞增殖更加明顯(P0.05)。Western blot方法檢測(cè)Bc1-2表達(dá)量發(fā)現(xiàn)：無(wú)糖組(21%02-No G)與常糖組(21%02-High G)比較,無(wú)糖組(21%02-No G) Bcl-2表達(dá)量明顯增加；低氧無(wú)糖組(0.1%02-NoG)與常氧無(wú)糖組(21%02-NoG)比較,低氧無(wú)糖組(0.1%O2-NoG) Bcl-2表達(dá)量明顯增加(P0.05)。[結(jié)論]無(wú)糖條件下可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；低氧微環(huán)境對(duì)無(wú)糖逆境下的正常腦膠質(zhì)細(xì)胞凋亡有抑制作用,可進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。Bel-2有明顯抑制凋亡的作用,即保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：低氧 腦膠質(zhì)細(xì)胞 凋亡 HIF-1α 低氧 細(xì)胞 凋亡 無(wú)糖 Bcl-2
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 常用英文縮寫(xiě)詞索引5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 引言12-15
• 第一部分15-34
• 材料和方法15-26
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-30
• 討論30-34
• 第二部分34-56
• 材料和方法34-44
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-53
• 討論53-56
• 全文總結(jié)56-57
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 綜述63-72
• 參考文獻(xiàn)67-72
• 研究生期間發(fā)表文章情況72-73
• 致謝73

【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：低氧微環(huán)境對(duì)腦星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡及對(duì)BCL-2表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：252139