【摘要】：研究背景與目的：腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome, IBS)是一種以腹痛或腹部不適同時(shí)伴有排便習(xí)慣改變?yōu)樘卣鞯墓δ苄阅c道疾病，須經(jīng)檢查排除可引起這些癥狀的器質(zhì)性疾病。因其發(fā)病率升高，且治療困難而逐漸引起重視，但其病因和發(fā)病機(jī)制仍未完全明了。目前認(rèn)為，腸易激綜合征(IBS)的病理生理學(xué)基礎(chǔ)主要是胃腸動(dòng)力學(xué)異常以及內(nèi)臟高敏感性，其中應(yīng)激能夠引起內(nèi)臟高敏感性的形成。腸易激綜合征(IBS)作為最常見(jiàn)的功能性疾病，與應(yīng)激有著極為密切的關(guān)系，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(Corticotrophin Releasing Factor, CRF)家族作為應(yīng)激反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，主要是通過(guò)控制下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA軸）發(fā)揮作用，調(diào)動(dòng)機(jī)體各系統(tǒng)以應(yīng)答應(yīng)激刺激，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、自主神經(jīng)、免疫和行為反應(yīng)。尿皮質(zhì)素3（urocortin3, Ucn3）是最新發(fā)現(xiàn)的CRF家族成員，對(duì)促腎上腺皮質(zhì)釋放因子受體2(corticotrophin-releasing factor receptor, CRFR2)具有高親和性，因而被認(rèn)為是CRFR2的內(nèi)源配體。Ucn3及其受體CRFR2是否參與對(duì)腸易激綜合征(IBS)腸道應(yīng)激的調(diào)節(jié)，以及在腸易激綜合癥患者腸道的表達(dá)是否有改變還不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在建立腸易激綜合征(IBS)模型，并通過(guò)免疫熒光法和Real-time PCR法檢測(cè)Ucn3、CRFR2在結(jié)腸的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討其表達(dá)變化與腸易激綜合征發(fā)病機(jī)制的聯(lián)系，為進(jìn)一步闡明Ucn3、CRFR2在腸易激綜合征發(fā)病中的作用提供新的證據(jù)。 方法：將30只160~180g的雄性wistar大鼠隨機(jī)分為模型組（在慢性應(yīng)激基礎(chǔ)上給予急性束縛）和正常對(duì)照組兩組建模。采用體重變化、排便粒數(shù)、敞箱行為評(píng)分、蔗糖水偏嗜度和直腸擴(kuò)張腹壁收縮最小閾值（threshold value ofabdominal construction, TVAC）評(píng)價(jià)動(dòng)物模型，并通過(guò)結(jié)腸蘇木素-伊紅染色（HE染色）觀察兩組大鼠結(jié)腸組織形態(tài)學(xué)改變。動(dòng)物模型建成后留取大鼠結(jié)腸組織，采用免疫熒光法檢測(cè)Ucn3及其受體CRFR2的定位表達(dá)，Real-time PCR法檢測(cè)各組大鼠結(jié)腸中Ucn3及其受體CRFR2的表達(dá)量的變化。結(jié)果：建模后，模型組大鼠體重較正常對(duì)照組減輕(P0.05)。給予應(yīng)激刺激后，模型組大鼠排便粒數(shù)明顯增加，應(yīng)激后7d、14d、21d、35d時(shí)，模型組與對(duì)照組比較差異明顯(P0.05)。給予應(yīng)激刺激后的早期(9d和18d)，模型組大鼠敞箱行為評(píng)分比對(duì)照組略有降低，，但二者間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，至應(yīng)激27d時(shí)，模型組大鼠敞箱行為評(píng)分顯著低于對(duì)照組(P0.05)。給予大鼠應(yīng)激刺激，其興趣逐漸缺失，其蔗糖水偏嗜度降低，造模28d時(shí)，模型組與正常對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，造模35d時(shí)給予急性應(yīng)激后，模型組與正常對(duì)照組相比差異有顯著性（P0.01）。應(yīng)激后，發(fā)現(xiàn)模型組大鼠直腸擴(kuò)張腹壁收縮最小閾值（TVAC）明顯小于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)，在0.8、1.2、1.6ml容量擴(kuò)張時(shí)，模型組大鼠腹部收縮次數(shù)明顯多于對(duì)照組(P0.05)。光鏡下應(yīng)激后模型組大鼠結(jié)腸組織形態(tài)與對(duì)照組比較無(wú)明顯變化。 Ucn3及其受體CRFR2在粘膜下神經(jīng)叢、肌間神經(jīng)叢均有表達(dá)，主要表達(dá)于神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中，熒光顯微鏡下Ucn3及其受體CRFR2在粘膜下神經(jīng)叢的表達(dá)呈顆粒狀，在肌間神經(jīng)叢表達(dá)呈網(wǎng)格狀。Ucn3在兩組大鼠結(jié)腸中的表達(dá)：正常對(duì)照組1.11±0.29，模型組3.99±1.59，應(yīng)激組Ucn3的表達(dá)高于對(duì)照組(P0.05)。CRFR2在各組大鼠結(jié)腸中的表達(dá)：正常對(duì)照組1.04±0.22，模型組2.39±0.84，應(yīng)激組CRFR2的表達(dá)高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：Ucn3及其受體CRFR2在腸易激綜合征大鼠結(jié)腸中均有表達(dá)，且表達(dá)量較正常對(duì)照組明顯升高，說(shuō)明他們可能在腸易激綜合征發(fā)病中發(fā)揮一定的作用。
【圖文】：

圖 1 大鼠結(jié)腸組織 HE 染色（×100）A 為正常對(duì)照組； B 為應(yīng)激模型組A B圖 2 Ucn3 在結(jié)腸組織中的表達(dá)(×400): A:在 SMP 的表達(dá); B:在 MP 的表達(dá).

Ucn3在結(jié)腸組織中的表達(dá)(×400):A:在SMP的表達(dá);B:在MP的表達(dá).
【學(xué)位授予單位】：濰坊醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R574;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2521179