Ucn3及其受體CRFR2在腸易激綜合征大鼠模型腸神經(jīng)系統(tǒng)中的表達

發(fā)布時間：2019-07-30 22:03

【摘要】：研究背景與目的：腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome, IBS)是一種以腹痛或腹部不適同時伴有排便習慣改變?yōu)樘卣鞯墓δ苄阅c道疾病，須經(jīng)檢查排除可引起這些癥狀的器質性疾病。因其發(fā)病率升高，且治療困難而逐漸引起重視，但其病因和發(fā)病機制仍未完全明了。目前認為，腸易激綜合征(IBS)的病理生理學基礎主要是胃腸動力學異常以及內臟高敏感性，其中應激能夠引起內臟高敏感性的形成。腸易激綜合征(IBS)作為最常見的功能性疾病，與應激有著極為密切的關系，促腎上腺皮質激素釋放因子(Corticotrophin Releasing Factor, CRF)家族作為應激反應中的關鍵調節(jié)因子，主要是通過控制下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA軸）發(fā)揮作用，調動機體各系統(tǒng)以應答應激刺激，調節(jié)內分泌、自主神經(jīng)、免疫和行為反應。尿皮質素3（urocortin3, Ucn3）是最新發(fā)現(xiàn)的CRF家族成員，對促腎上腺皮質釋放因子受體2(corticotrophin-releasing factor receptor, CRFR2)具有高親和性，因而被認為是CRFR2的內源配體。Ucn3及其受體CRFR2是否參與對腸易激綜合征(IBS)腸道應激的調節(jié)，以及在腸易激綜合癥患者腸道的表達是否有改變還不清楚。本實驗旨在建立腸易激綜合征(IBS)模型，并通過免疫熒光法和Real-time PCR法檢測Ucn3、CRFR2在結腸的表達情況，進一步探討其表達變化與腸易激綜合征發(fā)病機制的聯(lián)系，為進一步闡明Ucn3、CRFR2在腸易激綜合征發(fā)病中的作用提供新的證據(jù)。方法：將30只160~180g的雄性wistar大鼠隨機分為模型組（在慢性應激基礎上給予急性束縛）和正常對照組兩組建模。采用體重變化、排便粒數(shù)、敞箱行為評分、蔗糖水偏嗜度和直腸擴張腹壁收縮最小閾值（threshold value ofabdominal construction, TVAC）評價動物模型，并通過結腸蘇木素-伊紅染色（HE染色）觀察兩組大鼠結腸組織形態(tài)學改變。動物模型建成后留取大鼠結腸組織，采用免疫熒光法檢測Ucn3及其受體CRFR2的定位表達，Real-time PCR法檢測各組大鼠結腸中Ucn3及其受體CRFR2的表達量的變化。結果：建模后，模型組大鼠體重較正常對照組減輕(P0.05)。給予應激刺激后，模型組大鼠排便粒數(shù)明顯增加，應激后7d、14d、21d、35d時，模型組與對照組比較差異明顯(P0.05)。給予應激刺激后的早期(9d和18d)，模型組大鼠敞箱行為評分比對照組略有降低，，但二者間沒有統(tǒng)計學差異，至應激27d時，模型組大鼠敞箱行為評分顯著低于對照組(P0.05)。給予大鼠應激刺激，其興趣逐漸缺失，其蔗糖水偏嗜度降低，造模28d時，模型組與正常對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)，造模35d時給予急性應激后，模型組與正常對照組相比差異有顯著性（P0.01）。應激后，發(fā)現(xiàn)模型組大鼠直腸擴張腹壁收縮最小閾值（TVAC）明顯小于對照組，有統(tǒng)計學差異(P0.05)，在0.8、1.2、1.6ml容量擴張時，模型組大鼠腹部收縮次數(shù)明顯多于對照組(P0.05)。光鏡下應激后模型組大鼠結腸組織形態(tài)與對照組比較無明顯變化。 Ucn3及其受體CRFR2在粘膜下神經(jīng)叢、肌間神經(jīng)叢均有表達，主要表達于神經(jīng)細胞細胞質中，熒光顯微鏡下Ucn3及其受體CRFR2在粘膜下神經(jīng)叢的表達呈顆粒狀，在肌間神經(jīng)叢表達呈網(wǎng)格狀。Ucn3在兩組大鼠結腸中的表達：正常對照組1.11±0.29，模型組3.99±1.59，應激組Ucn3的表達高于對照組(P0.05)。CRFR2在各組大鼠結腸中的表達：正常對照組1.04±0.22，模型組2.39±0.84，應激組CRFR2的表達高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論：Ucn3及其受體CRFR2在腸易激綜合征大鼠結腸中均有表達，且表達量較正常對照組明顯升高，說明他們可能在腸易激綜合征發(fā)病中發(fā)揮一定的作用。
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