本文關(guān)鍵詞：溪黃草水提液對(duì)膽汁淤積大鼠模型藥效作用機(jī)制及PK-PD研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究溪黃草水提液(XHC)及活性成分迷迭香酸(Rosmarinicacid,RosA)對(duì)α-萘異硫氰酸酯(alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT)誘發(fā)膽汁淤積性肝損傷的保護(hù)作用及對(duì)法尼醇X受體(farnesoid X receptor,FXR)和轉(zhuǎn)運(yùn)體膽鹽輸出泵(Bilesalt export pump,BSEP)、多藥耐藥相關(guān)蛋白2(Multidrug resistance protein 2,MRP2)基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)的影響。方法：1.XHC及其RosA的急性毒性實(shí)驗(yàn)研究經(jīng)LD50預(yù)試顯示二者毒性較低,無(wú)法檢測(cè)出LD50，，故測(cè)定XHC及RosA的日內(nèi)最大給藥量,并連續(xù)觀察與記錄14天動(dòng)物一般活動(dòng)狀態(tài)(動(dòng)物外觀、行為),肝臟行病理觀察。2.建立溪黃草中咖啡酸、夏佛塔苷、阿魏酸、牡荊苷、迷迭香酸的HPLC-UV測(cè)定方法并對(duì)其進(jìn)行提取工藝的考察建立簡(jiǎn)單、快速、靈敏的HPLC-UV檢測(cè)方法,對(duì)溪黃草原藥材中主要水溶性成分進(jìn)行含量測(cè)定,比較蒸餾水煎煮法、100%甲醇超聲提取方式、50%、70%、95%乙醇提取方式對(duì)溪黃草成分含量的影響。3.觀察XHC及RosA對(duì)ANIT誘發(fā)的大鼠膽汁淤積模型的影響大鼠一次灌胃ANIT造成急性肝內(nèi)膽汁淤積模型,空白對(duì)照組、模型對(duì)照組(80mg·kg-1ANIT)、XHC氏劑量組(25g生藥kg-1)、XHC中劑量組(40g生藥·kg-1)、XHC高劑量組(80g生藥kg-1)、RosA低劑量組(25mg·kg-1)、RosA中劑量組(50mg·kg-1)、RosA高劑量組(100mg·kg-1),陽(yáng)性對(duì)照組(100mg·kg-1雄去氧膽酸),按灌胃體積10mL·kg-1連續(xù)給藥7天后測(cè)定膽汁流量、膽汁成分中總膽紅素(Total bilirubin, TBIL)、總膽汁酸(Total bile acid,TBA)、檢測(cè)肝功能血清中天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate transaminase, AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase, ALT)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)、總膽固醇(total cholesterol, TC)、直接膽紅素(Direct bilirubin, DBIL)、總膽紅素(Total bilirubin, TBIL)、總膽汁酸(Total bile acid,TBA)指標(biāo)和丙二醛(Malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)指標(biāo)、肝臟組織抗氧化酶(MDA、SOD GSH)指標(biāo),對(duì)肝臟組織進(jìn)行病理學(xué)檢查、對(duì)肝細(xì)胞進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)檢查,并對(duì)肝臟中膽汁酸核受體FXR、轉(zhuǎn)運(yùn)體MRP2和BSEP的基因轉(zhuǎn)錄水平及其蛋白表達(dá)量的影響。4. RosA在大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)及藥動(dòng)-藥效學(xué)研究建立RosA體內(nèi)HPLC-UV檢測(cè)方法,采用灌胃給藥方式,對(duì)預(yù)定時(shí)間的生物樣品中RosA的含量進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。此外,進(jìn)行預(yù)定時(shí)間的灌胃RosA藥物動(dòng)力學(xué)-藥物效應(yīng)動(dòng)力學(xué)觀察,進(jìn)一步研究藥物的血藥濃度對(duì)藥效的影響。結(jié)果：1.在XHC和RosA最大給藥量試驗(yàn)中,確定XHC最大給藥量是800g生藥/kg, RosA最大給藥量是5g/kg。病理檢查顯示,RosA雄性小鼠組有肝組織細(xì)胞病變(脂肪空泡形成、輕度水腫),其它組均無(wú)肝組織細(xì)胞病變。2.XHC質(zhì)量控制以RosA和咖啡酸的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),同時(shí)測(cè)定XHC中咖啡酸、夏佛塔苷、阿魏酸、牡荊苷、迷迭香酸等5個(gè)水溶性成分的含量分別為4.43%、1.15%、1.14%、0.52%、5.17%。3.在XHC和RosA對(duì)ANIT誘發(fā)的膽汁淤積模型的影響實(shí)驗(yàn)中,病理檢查結(jié)果顯示,與模型對(duì)照組比較,XHC中、高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組、RosA低、中、高劑量組可使肝小葉結(jié)構(gòu)逐漸趨于正常,肝細(xì)胞排列逐漸趨于整齊,未見(jiàn)明顯變性、壞死,匯管區(qū)也未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。電鏡結(jié)果顯示XHC、RosA各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組均能較大幅度降低肝細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量,使線粒體形態(tài)及核膜有明顯的改善。另一方面,在肝血清及組織生化指標(biāo)血清酶(ALT、AST、ALP、TC、 DBIL、TBIL、TBA)、血清中抗氧化酶(MDA、SOD、GSH)、肝組織中抗氧化酶(MDA、SOD、GSH)、膽汁流量、膽汁成分(TBIL、TBA)等方面,XHC中、高劑量,RosA低、中、高劑量、陽(yáng)性對(duì)照組等各組均具有對(duì)肝臟保護(hù)及促進(jìn)膽汁分泌的顯著作用(P0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。XHC低劑量組對(duì)膽汁流及血清中總膽紅素,直接膽紅素、膽汁酸有改善作用(P0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)上看,與模型對(duì)照組相比,除XHC低劑量組外XHC各劑量組均能顯著上調(diào)肝核受體FXR和細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)體BESP、MRP2基因轉(zhuǎn)錄與蛋白的表達(dá)(P0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；RosA各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組也能顯著上調(diào)肝細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)體FXR和轉(zhuǎn)運(yùn)體BESP、MRP2基因轉(zhuǎn)錄與蛋白的表達(dá),有利于恢復(fù)膽汁酸的正常代謝。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明XHC和RosA對(duì)ANIT誘發(fā)的實(shí)驗(yàn)性大鼠肝內(nèi)膽汁淤積有保護(hù)肝臟及提高膽汁分泌排泄的作用。4.RosA在大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)及藥動(dòng)-藥效學(xué)研究中,灌服RosA后采用PK-solution2.0軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。從藥動(dòng)學(xué)參數(shù)表中可以得出灌胃100mg/kg。 RosA在正常對(duì)照組大鼠體內(nèi)的AUC(0-∞)=17.29mg·h/mL。ANIT誘發(fā)大鼠膽汁淤積模型后,RosA在大鼠體內(nèi)的AUC明顯增加,AUC(0-∞)= 23.11 mg·h/mL。其原因可能是膽汁淤積導(dǎo)致肝組織損傷,膽汁排泌明顯下降,從而導(dǎo)致藥物的蓄積,容易引起肝毒性。膽汁中TBIL、TBA與肝功能血清酶AST、ALT在灌胃后1.5h左右改善最為明顯,TBIL、TBA的E-C曲線呈明顯的逆時(shí)針環(huán),TBIL、TBA效應(yīng)變化明顯滯后于血藥濃度。AST、ALT的E-C曲線呈明顯的順時(shí)針環(huán),與隨著時(shí)間增加,RosA逐漸發(fā)揮最大藥理活性,抑制AST、ALT的上升,藥物發(fā)揮藥理作用需要一定的時(shí)間。結(jié)論：對(duì)ANIT誘發(fā)大鼠膽汁淤積急性肝損傷模型的實(shí)驗(yàn),XHC及其主要活性成分RosA能較明顯改善血清中肝功能生化指標(biāo)(ALT、AST、ALP、TC、DBIL、 TBIL、TBA)、抗氧化酶指標(biāo)(MDA、SOD、GSH),改善肝組織中抗氧化酶指標(biāo)(MDA、SOD、GSH),改善膽汁中成分(TBIL、TBA)的含量,膽汁的分泌、同時(shí)抑制肝細(xì)胞炎癥狀態(tài),保護(hù)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)(如線粒體等重要細(xì)胞器),因而具有顯著保肝利膽作用。其作用機(jī)制之一是通過(guò)上調(diào)膽汁排泄核受體FXR基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá),然后進(jìn)一步調(diào)控BSEP和MRP2的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)的上調(diào)來(lái)發(fā)揮其保肝利膽、抗膽汁淤積的作用。
【關(guān)鍵詞】：膽汁淤積 溪黃草 迷迭香酸
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 引言12-14
• 第一章 文獻(xiàn)研究14-22
• 第一節(jié) 溪黃草研究現(xiàn)狀14-15
• 一、溪黃草概述14
• 二、溪黃草的有效成分及生物活性14
• 三、藥理作用14-15
• 第二節(jié) 膽汁淤積研究現(xiàn)狀15-21
• 一、中醫(yī)對(duì)膽汁淤積的認(rèn)識(shí)15
• 二、膽汁的分泌及膽汁酸合成15-16
• 三、膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)及膽汁酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體的分子特征16-17
• 四、膽汁淤積的發(fā)病機(jī)制17-18
• 五、法尼醇X受體(FXR)18
• 六、FXR在膽汁酸代謝中的地位以及膽汁酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體18-19
• 七、線粒體功能與膽汁酸代謝19-20
• 八、實(shí)驗(yàn)性肝內(nèi)膽汁淤積病理模型的建立20
• 九、熊去氧膽酸治療膽汁淤積性肝病20
• 十、藥效-藥動(dòng)學(xué)(PK-PD)模型20-21
• 第三節(jié) 小結(jié)21-22
• 第二章 實(shí)驗(yàn)研究22-71
• 第一節(jié) XHC水提液與迷迭香酸急性毒性試驗(yàn)22-27
• 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>22
• 二、實(shí)驗(yàn)材料22
• 三、實(shí)驗(yàn)方法22-24
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-25
• 五、討論25-27
• 第二節(jié) HPLC法測(cè)定XHC中5種主要有效成分及XHC提取工藝考察27-34
• 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>27
• 二、實(shí)驗(yàn)材料27
• 三、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果27-33
• 四、討論33-34
• 第三節(jié) XHC及RosA對(duì)ANIT誘發(fā)大鼠膽汁淤積模型的影響34-46
• 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>34
• 二、實(shí)驗(yàn)材料34
• 三、實(shí)驗(yàn)方法34-36
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-43
• 五、討論43-46
• 第四節(jié) 溪黃草主要有效成分迷迭香酸藥物動(dòng)力學(xué)46-52
• 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>46
• 二、實(shí)驗(yàn)材料46
• 三、實(shí)驗(yàn)方法46-49
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-50
• 五、討論50-52
• 第五節(jié) 溪黃草主要有效成分RosA PK-PD藥動(dòng)-藥效學(xué)模型研究52-63
• 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>52
• 二、實(shí)驗(yàn)材料52
• 三、實(shí)驗(yàn)方法52-53
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果53-60
• 五、討論60-63
• 第六節(jié) XHC及RosA對(duì)ANIT誘發(fā)大鼠膽汁淤積模型肝組織FXR、BSEP、MRP2蛋白表達(dá)的影響63-67
• 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>63
• 二、實(shí)驗(yàn)材料63
• 三、實(shí)驗(yàn)方法63-64
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果64-66
• 五、討論66-67
• 第七節(jié) RT-PCR法檢測(cè)XHC及RosA對(duì)大鼠肝臟組織FXR、BSEP、MRP2 MRNA表達(dá)的影響67-71
• 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>67
• 二、實(shí)驗(yàn)材料67
• 三、實(shí)驗(yàn)方法67-68
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果68-70
• 五、討論70-71
• 結(jié)語(yǔ)71-73
• 參考文獻(xiàn)73-77
• 附錄77-79
• 在校期間發(fā)表論文情況79-80
• 致謝80-81
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)審核證明81

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