本文關鍵詞：溪黃草水提液對膽汁淤積大鼠模型藥效作用機制及PK-PD研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究溪黃草水提液(XHC)及活性成分迷迭香酸(Rosmarinicacid,RosA)對α-萘異硫氰酸酯(alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT)誘發(fā)膽汁淤積性肝損傷的保護作用及對法尼醇X受體(farnesoid X receptor,FXR)和轉運體膽鹽輸出泵(Bilesalt export pump,BSEP)、多藥耐藥相關蛋白2(Multidrug resistance protein 2,MRP2)基因轉錄水平和蛋白表達的影響。方法：1.XHC及其RosA的急性毒性實驗研究經(jīng)LD50預試顯示二者毒性較低,無法檢測出LD50，，故測定XHC及RosA的日內最大給藥量,并連續(xù)觀察與記錄14天動物一般活動狀態(tài)(動物外觀、行為),肝臟行病理觀察。2.建立溪黃草中咖啡酸、夏佛塔苷、阿魏酸、牡荊苷、迷迭香酸的HPLC-UV測定方法并對其進行提取工藝的考察建立簡單、快速、靈敏的HPLC-UV檢測方法,對溪黃草原藥材中主要水溶性成分進行含量測定,比較蒸餾水煎煮法、100%甲醇超聲提取方式、50%、70%、95%乙醇提取方式對溪黃草成分含量的影響。3.觀察XHC及RosA對ANIT誘發(fā)的大鼠膽汁淤積模型的影響大鼠一次灌胃ANIT造成急性肝內膽汁淤積模型,空白對照組、模型對照組(80mg·kg-1ANIT)、XHC氏劑量組(25g生藥kg-1)、XHC中劑量組(40g生藥·kg-1)、XHC高劑量組(80g生藥kg-1)、RosA低劑量組(25mg·kg-1)、RosA中劑量組(50mg·kg-1)、RosA高劑量組(100mg·kg-1),陽性對照組(100mg·kg-1雄去氧膽酸),按灌胃體積10mL·kg-1連續(xù)給藥7天后測定膽汁流量、膽汁成分中總膽紅素(Total bilirubin, TBIL)、總膽汁酸(Total bile acid,TBA)、檢測肝功能血清中天門冬氨酸氨基轉移酶(Aspartate transaminase, AST)、丙氨酸氨基轉移酶(Alanine aminotransferase, ALT)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)、總膽固醇(total cholesterol, TC)、直接膽紅素(Direct bilirubin, DBIL)、總膽紅素(Total bilirubin, TBIL)、總膽汁酸(Total bile acid,TBA)指標和丙二醛(Malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)指標、肝臟組織抗氧化酶(MDA、SOD GSH)指標,對肝臟組織進行病理學檢查、對肝細胞進行超微結構檢查,并對肝臟中膽汁酸核受體FXR、轉運體MRP2和BSEP的基因轉錄水平及其蛋白表達量的影響。4. RosA在大鼠體內藥物動力學及藥動-藥效學研究建立RosA體內HPLC-UV檢測方法,采用灌胃給藥方式,對預定時間的生物樣品中RosA的含量進行測定,計算藥物動力學參數(shù)。此外,進行預定時間的灌胃RosA藥物動力學-藥物效應動力學觀察,進一步研究藥物的血藥濃度對藥效的影響。結果：1.在XHC和RosA最大給藥量試驗中,確定XHC最大給藥量是800g生藥/kg, RosA最大給藥量是5g/kg。病理檢查顯示,RosA雄性小鼠組有肝組織細胞病變(脂肪空泡形成、輕度水腫),其它組均無肝組織細胞病變。2.XHC質量控制以RosA和咖啡酸的含量為評價指標,同時測定XHC中咖啡酸、夏佛塔苷、阿魏酸、牡荊苷、迷迭香酸等5個水溶性成分的含量分別為4.43%、1.15%、1.14%、0.52%、5.17%。3.在XHC和RosA對ANIT誘發(fā)的膽汁淤積模型的影響實驗中,病理檢查結果顯示,與模型對照組比較,XHC中、高劑量組、陽性對照組、RosA低、中、高劑量組可使肝小葉結構逐漸趨于正常,肝細胞排列逐漸趨于整齊,未見明顯變性、壞死,匯管區(qū)也未見明顯炎癥細胞浸潤。電鏡結果顯示XHC、RosA各劑量組及陽性對照組均能較大幅度降低肝細胞內脂滴數(shù)量,使線粒體形態(tài)及核膜有明顯的改善。另一方面,在肝血清及組織生化指標血清酶(ALT、AST、ALP、TC、 DBIL、TBIL、TBA)、血清中抗氧化酶(MDA、SOD、GSH)、肝組織中抗氧化酶(MDA、SOD、GSH)、膽汁流量、膽汁成分(TBIL、TBA)等方面,XHC中、高劑量,RosA低、中、高劑量、陽性對照組等各組均具有對肝臟保護及促進膽汁分泌的顯著作用(P0.05),具有統(tǒng)計學意義。XHC低劑量組對膽汁流及血清中總膽紅素,直接膽紅素、膽汁酸有改善作用(P0.05),具有統(tǒng)計學意義。從基因轉錄和蛋白表達上看,與模型對照組相比,除XHC低劑量組外XHC各劑量組均能顯著上調肝核受體FXR和細胞膜轉運體BESP、MRP2基因轉錄與蛋白的表達(P0.05),差異具有統(tǒng)計學意義；RosA各劑量組及陽性對照組也能顯著上調肝細胞膜轉運體FXR和轉運體BESP、MRP2基因轉錄與蛋白的表達,有利于恢復膽汁酸的正常代謝。實驗結果說明XHC和RosA對ANIT誘發(fā)的實驗性大鼠肝內膽汁淤積有保護肝臟及提高膽汁分泌排泄的作用。4.RosA在大鼠體內藥物動力學及藥動-藥效學研究中,灌服RosA后采用PK-solution2.0軟件計算藥動學參數(shù)。從藥動學參數(shù)表中可以得出灌胃100mg/kg。 RosA在正常對照組大鼠體內的AUC(0-∞)=17.29mg·h/mL。ANIT誘發(fā)大鼠膽汁淤積模型后,RosA在大鼠體內的AUC明顯增加,AUC(0-∞)= 23.11 mg·h/mL。其原因可能是膽汁淤積導致肝組織損傷,膽汁排泌明顯下降,從而導致藥物的蓄積,容易引起肝毒性。膽汁中TBIL、TBA與肝功能血清酶AST、ALT在灌胃后1.5h左右改善最為明顯,TBIL、TBA的E-C曲線呈明顯的逆時針環(huán),TBIL、TBA效應變化明顯滯后于血藥濃度。AST、ALT的E-C曲線呈明顯的順時針環(huán),與隨著時間增加,RosA逐漸發(fā)揮最大藥理活性,抑制AST、ALT的上升,藥物發(fā)揮藥理作用需要一定的時間。結論：對ANIT誘發(fā)大鼠膽汁淤積急性肝損傷模型的實驗,XHC及其主要活性成分RosA能較明顯改善血清中肝功能生化指標(ALT、AST、ALP、TC、DBIL、 TBIL、TBA)、抗氧化酶指標(MDA、SOD、GSH),改善肝組織中抗氧化酶指標(MDA、SOD、GSH),改善膽汁中成分(TBIL、TBA)的含量,膽汁的分泌、同時抑制肝細胞炎癥狀態(tài),保護肝細胞結構(如線粒體等重要細胞器),因而具有顯著保肝利膽作用。其作用機制之一是通過上調膽汁排泄核受體FXR基因轉錄和蛋白表達,然后進一步調控BSEP和MRP2的基因轉錄和蛋白表達的上調來發(fā)揮其保肝利膽、抗膽汁淤積的作用。
【關鍵詞】：膽汁淤積 溪黃草 迷迭香酸
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 引言12-14
• 第一章 文獻研究14-22
• 第一節(jié) 溪黃草研究現(xiàn)狀14-15
• 一、溪黃草概述14
• 二、溪黃草的有效成分及生物活性14
• 三、藥理作用14-15
• 第二節(jié) 膽汁淤積研究現(xiàn)狀15-21
• 一、中醫(yī)對膽汁淤積的認識15
• 二、膽汁的分泌及膽汁酸合成15-16
• 三、膽汁酸轉運及膽汁酸鹽轉運體的分子特征16-17
• 四、膽汁淤積的發(fā)病機制17-18
• 五、法尼醇X受體(FXR)18
• 六、FXR在膽汁酸代謝中的地位以及膽汁酸鹽轉運體18-19
• 七、線粒體功能與膽汁酸代謝19-20
• 八、實驗性肝內膽汁淤積病理模型的建立20
• 九、熊去氧膽酸治療膽汁淤積性肝病20
• 十、藥效-藥動學(PK-PD)模型20-21
• 第三節(jié) 小結21-22
• 第二章 實驗研究22-71
• 第一節(jié) XHC水提液與迷迭香酸急性毒性試驗22-27
• 一、實驗目的22
• 二、實驗材料22
• 三、實驗方法22-24
• 四、實驗結果24-25
• 五、討論25-27
• 第二節(jié) HPLC法測定XHC中5種主要有效成分及XHC提取工藝考察27-34
• 一、實驗目的27
• 二、實驗材料27
• 三、實驗方法與結果27-33
• 四、討論33-34
• 第三節(jié) XHC及RosA對ANIT誘發(fā)大鼠膽汁淤積模型的影響34-46
• 一、實驗目的34
• 二、實驗材料34
• 三、實驗方法34-36
• 四、實驗結果36-43
• 五、討論43-46
• 第四節(jié) 溪黃草主要有效成分迷迭香酸藥物動力學46-52
• 一、實驗目的46
• 二、實驗材料46
• 三、實驗方法46-49
• 四、實驗結果49-50
• 五、討論50-52
• 第五節(jié) 溪黃草主要有效成分RosA PK-PD藥動-藥效學模型研究52-63
• 一、實驗目的52
• 二、實驗材料52
• 三、實驗方法52-53
• 四、實驗結果53-60
• 五、討論60-63
• 第六節(jié) XHC及RosA對ANIT誘發(fā)大鼠膽汁淤積模型肝組織FXR、BSEP、MRP2蛋白表達的影響63-67
• 一、實驗目的63
• 二、實驗材料63
• 三、實驗方法63-64
• 四、實驗結果64-66
• 五、討論66-67
• 第七節(jié) RT-PCR法檢測XHC及RosA對大鼠肝臟組織FXR、BSEP、MRP2 MRNA表達的影響67-71
• 一、實驗目的67
• 二、實驗材料67
• 三、實驗方法67-68
• 四、實驗結果68-70
• 五、討論70-71
• 結語71-73
• 參考文獻73-77
• 附錄77-79
• 在校期間發(fā)表論文情況79-80
• 致謝80-81
• 統(tǒng)計學審核證明81

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  本文關鍵詞：溪黃草水提液對膽汁淤積大鼠模型藥效作用機制及PK-PD研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：252065