本文關(guān)鍵詞：SOS應(yīng)答對(duì)大腸桿菌抗藥性與毒力的調(diào)控機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：SOS應(yīng)答系統(tǒng)普遍存在于細(xì)菌,是受到RecA-LexA調(diào)控的一種低保真度DNA修復(fù)方式。在正常狀態(tài)下,阻遏蛋白LexA二聚體結(jié)合在細(xì)菌SOS應(yīng)答基因的啟動(dòng)子區(qū)域,抑制基因表達(dá)；當(dāng)細(xì)菌處于應(yīng)激狀態(tài),形成的單鏈DNA激活啟動(dòng)蛋白R(shí)ecA,解除LexA的阻遏,SOS應(yīng)答系統(tǒng)控制的許多關(guān)鍵基因得以表達(dá),產(chǎn)生一系列可能適應(yīng)環(huán)境壓力的突變和適應(yīng)反應(yīng)�？股仡l繁使用造成了新的生境,病原菌同時(shí)面臨抗生素和宿主免疫系統(tǒng)的雙重抑制作用,必然需要協(xié)調(diào)和控制其抗藥性和毒力。因此,本文構(gòu)建SOS應(yīng)答抑制模型,探索抗藥性、耐藥性與毒力在進(jìn)化通路上的相關(guān)性。一、recA缺失使菌株對(duì)恩諾沙星的抗藥性和抗藥率均明顯降低。本文以大腸桿菌ATCC 25922和0157：H7為野生型菌株,通過Red重組系統(tǒng),敲除兩個(gè)菌株的recA基因,成功構(gòu)建了recA缺失菌株ATCC 25922/△recA和0157:H7/△recA,利用熒光定量PCR測(cè)定SOS應(yīng)答系統(tǒng)相關(guān)基因recA和umuC在恩諾沙星壓力下表達(dá)量的變化,結(jié)果顯示recA基因缺失抑制umuC表達(dá),關(guān)閉了SOS應(yīng)答。微量肉湯稀釋法藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明,recA缺失菌株對(duì)恩諾沙星的MIC值比野生型菌株降低至1/8；梯度平板檢測(cè)表明,藥物誘導(dǎo)ATCC 25922/△recA較野生型菌株不易產(chǎn)生抗藥性變異。二、recA缺失對(duì)菌株毒力的影響。利用real-time PCR方法研究不同條件下0157：H7的主要毒力基因stx2和eaeA表達(dá)量的變化,恩諾沙星作用能夠提高stx2和eaeA的表達(dá),敲除recA后,stx2表達(dá)量下調(diào),但eaeA表達(dá)量上調(diào)；體外細(xì)胞試驗(yàn)確定recA缺失能夠降低stx2的表達(dá),但卻提高eaeA的表達(dá)量。三、通過0157：H7及其recA缺失菌株的轉(zhuǎn)錄組分析,探討SOS應(yīng)答系統(tǒng)對(duì)0157：H7抗藥性和毒力的調(diào)控作用。共發(fā)現(xiàn)20個(gè)可能受SOS調(diào)控系統(tǒng)的主要基因,在恩諾沙星處理下表現(xiàn)為表達(dá)顯著地上調(diào)或下調(diào),推測(cè)有6個(gè)轉(zhuǎn)錄子與細(xì)菌的耐藥性、抗藥性有關(guān),2個(gè)轉(zhuǎn)錄子與與毒力調(diào)控相關(guān),3個(gè)與核苷酸代謝有關(guān),3個(gè)在信號(hào)通路的上游。其中粘附素基因eaeA,在轉(zhuǎn)錄組分析、熒光定量驗(yàn)證和體外細(xì)胞驗(yàn)證中,同時(shí)得到印證：此基因由SOS應(yīng)答系統(tǒng)調(diào)控,SOS系統(tǒng)啟動(dòng)導(dǎo)致O157：H7中粘附素基因的下調(diào)表達(dá),使細(xì)菌對(duì)細(xì)胞的粘附力減弱。四、SOS應(yīng)答抑制劑在以上研究基礎(chǔ)上,合成了RecA蛋白抑制劑,它與恩諾沙星聯(lián)合使用對(duì)E. coli生長(zhǎng)具有相加抑制作用,熒光定量PCR檢測(cè)表明RecA抑制劑能夠一定程度上抑制恩諾沙星誘導(dǎo)的recA、umuC、edeA、stx2的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：E.coli SOS應(yīng)答系統(tǒng) recA基因 抗藥性 毒力 RecA抑制劑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R378.21
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 符號(hào)說明11-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-24
• 1.1 細(xì)菌抗藥性毒力及其相關(guān)性12-16
• 1.1.1 細(xì)菌抗藥性12-13
• 1.1.2 細(xì)菌毒力13-14
• 1.1.3 細(xì)菌抗藥性與毒力的相關(guān)性14-16
• 1.2 細(xì)菌中的SOS應(yīng)答系統(tǒng)16-20
• 1.2.1 SOS應(yīng)答的發(fā)現(xiàn)16
• 1.2.2 SOS應(yīng)答的誘導(dǎo)信號(hào)及啟動(dòng)的一般途徑16-18
• 1.2.3 SOS應(yīng)答關(guān)鍵基因及其表達(dá)產(chǎn)物的功能18-20
• 1.3 SOS應(yīng)答系統(tǒng)對(duì)抗藥性與毒力的調(diào)控作用20-22
• 1.3.1 SOS應(yīng)答對(duì)細(xì)菌抗藥性表型的影響20-21
• 1.3.2 SOS應(yīng)答對(duì)細(xì)菌毒力的影響21-22
• 1.4 抑制SOS應(yīng)答在治療感染中的應(yīng)用潛力22-23
• 1.5 問題與展望23-24
• 第二章 recA缺失菌株的構(gòu)建24-35
• 2.1 材料與方法24-29
• 2.2 結(jié)果與分析29-33
• 2.2.1 顯色培養(yǎng)基的鑒定結(jié)果29
• 2.2.2 生理生化鑒定結(jié)果29
• 2.2.3 16S rDNA分析29-31
• 2.2.4 recA基因敲除的鑒定31-33
• 2.2.5 Escherichia coli生長(zhǎng)曲線測(cè)定結(jié)果33
• 2.3 討論與結(jié)論33-35
• 2.3.1 討論33-34
• 2.3.2 結(jié)論34-35
• 第三章 recA缺失對(duì)Escherichia coli抗藥性的影響35-44
• 3.1 材料與方法35-39
• 3.2 結(jié)果與分析39-42
• 3.2.1 ATCC 25922/△recA和O157：H7/△recA對(duì)恩諾沙星等抗生素的MIC的測(cè)定39-40
• 3.2.2 recA缺失對(duì)抗藥性變異的影響40
• 3.2.3 SOS應(yīng)答系統(tǒng)基因recA和umuC表達(dá)量測(cè)定40-42
• 3.3 討論與結(jié)論42-44
• 3.3.1 討論42-43
• 3.3.2 結(jié)論43-44
• 第四章 recA缺失對(duì)Escherichia coli毒力的影響44-53
• 4.1 材料與方法45-49
• 4.2 結(jié)果與分析49-52
• 4.2.1 毒力基因測(cè)定49
• 4.2.2 毒力基因表達(dá)量測(cè)定49-50
• 4.2.3 細(xì)胞粘附試驗(yàn)50
• 4.2.4 細(xì)胞毒試驗(yàn)50-52
• 4.3 討論與結(jié)論52-53
• 4.3.1 討論52
• 4.3.2 結(jié)論52-53
• 第五章 RecA抑制劑對(duì)SOS應(yīng)答的影響53-61
• 5.1 材料與方法53-55
• 5.2 結(jié)果與分析55-59
• 5.2.1 RecA抑制劑N~6-(1-Naphthyl)-ADP的核磁共振鑒定55-56
• 5.2.2 恩諾沙星與抑制劑聯(lián)合抑菌作用56-57
• 5.2.3 SOS相關(guān)基因表達(dá)量變化57-59
• 5.3 討論與結(jié)論59-61
• 5.3.1 討論59-60
• 5.3.2 結(jié)論60-61
• 第六章 SOS應(yīng)答對(duì)O157：H7抗藥性和毒力的調(diào)控作用61-75
• 6.1 材料與方法61-63
• 6.2 結(jié)果與分析63-72
• 6.2.1 測(cè)序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)63-67
• 6.2.2 正常生長(zhǎng)條件下O157：H7中recA基因的功能67-68
• 6.2.3 SOS應(yīng)答系統(tǒng)對(duì)O157：H7抗藥性耐藥性和毒力的調(diào)控68-72
• 6.3 討論與結(jié)論72-75
• 6.3.1 討論72-73
• 6.3.2 結(jié)論73-75
• 全文總結(jié)75-77
• 參考文獻(xiàn)77-83
• 致謝83-84
• 主要發(fā)表論文84-85
• 附件85

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉麗;;淺析細(xì)菌耐藥機(jī)理與抗生素的合理應(yīng)用[J];中國(guó)傷殘醫(yī)學(xué);2007年04期

2 張小林,汪復(fù),朱德妹;多重耐藥大腸桿菌外膜屏障機(jī)制的研究[J];中華傳染病雜志;1998年04期

  本文關(guān)鍵詞：SOS應(yīng)答對(duì)大腸桿菌抗藥性與毒力的調(diào)控機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：251894