【摘要】：高爾基體磷酸蛋白2(GOLPH2, GP73)是的一個功能未知的高爾基體二型跨膜蛋白,定位在高爾基體順面,并能夠通過細胞內(nèi)膜系統(tǒng)轉運分泌到細胞外基質。臨床和病理研究表明,GOLPH2與疾病關系密切,尤其在肝炎肝癌和肝炎患者中發(fā)現(xiàn)有GOLPH2異常高表達,并且能夠分泌到血液,從而可能作為臨床診斷肝癌的血清學標志物。 目前關于GOLPH2異常表達的研究主要集中在臨床研究方面,而針對GOLPH2在肝炎和肝損傷中異常表達的細胞和分子機制研究較少,這限制了GOLPH2在臨床上的應用和價值。本研究主要應用動物和細胞模型,研究GOLPH2在肝炎和肝損傷過程中異常表達的過程和部分機制,并初步探討了GOLPH2異常表達的意義。 應用肝炎動物模型和肝損傷動物模型,可以跟蹤肝炎和肝損傷的發(fā)生和進展過程。研究發(fā)現(xiàn)GOLPH2對肝炎和肝損傷的反應非常迅速和靈敏,肝臟受到LPS或者CCl4刺激后24h內(nèi),GOLPH2表達水平就迅速升高,并在損傷后48h,達到高峰;同時肝炎以及肝損傷修復進入尾聲時,GOLPH2水平緩慢下降,GOLPH2水平的下降可能還與愈后相關。 GOLPH2在肝臟炎癥反應中的異常表達可能是炎癥因子(細胞因子)的調節(jié)結果,使用細胞因子體外刺激小鼠原代肝細胞以及肝癌細胞系Hep3B細胞,檢測GOLPH2表達。結果顯示IL-1b以及IL-6有上調GOLPH2的作用,而TGF-b能夠顯著下調肝細胞GOLPH2表達水平;沒有檢測到TNF-a以及IFN-r對GOLPH2的調節(jié)效果。這部分研究結果表明GOLPH2可能與肝炎過程中免疫細胞分泌的IL-1b、IL-6表達水平升高相關。 為了進一步研究GOLPH2在肝炎中表達是否存在生理意義,我們第一次構建和使用了GOLPH2基因敲除鼠模型,使用Cre-Loxp系統(tǒng)敲除GOLPH2基因外顯子5,結果顯示GOLPH2存在一種尚未發(fā)現(xiàn)的新的可變剪接方式,外顯子6的5’端存在2個剪接位點,使得GOLPH2可以選擇兩個不同的位置連接外顯子6,屬于可變剪接中的可變3’端剪接方式。由于事先未知的可變剪接的存在,使得GOLPH2敲除鼠變成了外顯子5缺失的突變鼠,本研究初步研究了外顯子5缺失突變對個體生殖發(fā)育有影響,并可能降低了肝臟應激能力。 綜合研究結果顯示,肝臟GOLPH2異常表達可能是肝臟的一種應激形式,并與損傷修復過程密切聯(lián)系,可能參與了這個過程,同時GOLPH2有較強的應對突變的能力,我們發(fā)現(xiàn)了GOLPH2新的可變剪接模式。
【學位授予單位】：中國科學技術大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R363

【共引文獻】

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本文編號：2517347