【摘要】：高爾基體磷酸蛋白2(GOLPH2, GP73)是的一個(gè)功能未知的高爾基體二型跨膜蛋白,定位在高爾基體順面,并能夠通過細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)分泌到細(xì)胞外基質(zhì)。臨床和病理研究表明,GOLPH2與疾病關(guān)系密切,尤其在肝炎肝癌和肝炎患者中發(fā)現(xiàn)有GOLPH2異常高表達(dá),并且能夠分泌到血液,從而可能作為臨床診斷肝癌的血清學(xué)標(biāo)志物。 目前關(guān)于GOLPH2異常表達(dá)的研究主要集中在臨床研究方面,而針對GOLPH2在肝炎和肝損傷中異常表達(dá)的細(xì)胞和分子機(jī)制研究較少,這限制了GOLPH2在臨床上的應(yīng)用和價(jià)值。本研究主要應(yīng)用動物和細(xì)胞模型,研究GOLPH2在肝炎和肝損傷過程中異常表達(dá)的過程和部分機(jī)制,并初步探討了GOLPH2異常表達(dá)的意義。 應(yīng)用肝炎動物模型和肝損傷動物模型,可以跟蹤肝炎和肝損傷的發(fā)生和進(jìn)展過程。研究發(fā)現(xiàn)GOLPH2對肝炎和肝損傷的反應(yīng)非常迅速和靈敏,肝臟受到LPS或者CCl4刺激后24h內(nèi),GOLPH2表達(dá)水平就迅速升高,并在損傷后48h,達(dá)到高峰;同時(shí)肝炎以及肝損傷修復(fù)進(jìn)入尾聲時(shí),GOLPH2水平緩慢下降,GOLPH2水平的下降可能還與愈后相關(guān)。 GOLPH2在肝臟炎癥反應(yīng)中的異常表達(dá)可能是炎癥因子(細(xì)胞因子)的調(diào)節(jié)結(jié)果,使用細(xì)胞因子體外刺激小鼠原代肝細(xì)胞以及肝癌細(xì)胞系Hep3B細(xì)胞,檢測GOLPH2表達(dá)。結(jié)果顯示IL-1b以及IL-6有上調(diào)GOLPH2的作用,而TGF-b能夠顯著下調(diào)肝細(xì)胞GOLPH2表達(dá)水平;沒有檢測到TNF-a以及IFN-r對GOLPH2的調(diào)節(jié)效果。這部分研究結(jié)果表明GOLPH2可能與肝炎過程中免疫細(xì)胞分泌的IL-1b、IL-6表達(dá)水平升高相關(guān)。 為了進(jìn)一步研究GOLPH2在肝炎中表達(dá)是否存在生理意義,我們第一次構(gòu)建和使用了GOLPH2基因敲除鼠模型,使用Cre-Loxp系統(tǒng)敲除GOLPH2基因外顯子5,結(jié)果顯示GOLPH2存在一種尚未發(fā)現(xiàn)的新的可變剪接方式,外顯子6的5’端存在2個(gè)剪接位點(diǎn),使得GOLPH2可以選擇兩個(gè)不同的位置連接外顯子6,屬于可變剪接中的可變3’端剪接方式。由于事先未知的可變剪接的存在,使得GOLPH2敲除鼠變成了外顯子5缺失的突變鼠,本研究初步研究了外顯子5缺失突變對個(gè)體生殖發(fā)育有影響,并可能降低了肝臟應(yīng)激能力。 綜合研究結(jié)果顯示,肝臟GOLPH2異常表達(dá)可能是肝臟的一種應(yīng)激形式,并與損傷修復(fù)過程密切聯(lián)系,可能參與了這個(gè)過程,同時(shí)GOLPH2有較強(qiáng)的應(yīng)對突變的能力,我們發(fā)現(xiàn)了GOLPH2新的可變剪接模式。
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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2 張劍;楊曉梅;高建剛;;小鼠基因敲除的研究進(jìn)展[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版);2011年10期

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1 劉建忠;轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺表達(dá)人瘦蛋白的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2000年

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2 劉莊;Prestin基因相關(guān)人耳聾疾病動物模型的建立[D];山東大學(xué);2011年

3 孫達(dá)權(quán);山羊乳腺特異性載體的構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

4 劉科科;新型釀酒酵母整合載體的構(gòu)建及構(gòu)建方法研究[D];天津大學(xué);2009年

5 呂帥帥;多巴胺能神經(jīng)元特異性Cu14b基因敲除小鼠模型的建立和表型分析[D];山東大學(xué);2014年

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本文編號：2517347