【摘要】：皮膚移植已經(jīng)成為幫助皮膚損傷超過一定范圍及深度患者進行修復(fù)，并重建其功能的必要治療方法。由于主要組織相容性抗原的差異性，必然導(dǎo)致免疫排斥反應(yīng)的發(fā)生。受者往往需要長期接受免疫抑制劑的治療來維持移植物在其體內(nèi)的存活。由于免疫抑制劑的非特異性及多種毒副作用，長期應(yīng)用該類藥物會導(dǎo)致受者免疫系統(tǒng)處于低下狀態(tài)而出現(xiàn)易感染、癌癥等副作用。因此，誘導(dǎo)受者對供者移植抗原產(chǎn)生特異性地“移植免疫耐受”才是解決該問題的關(guān)鍵。大量研究結(jié)果顯示，CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細胞(Foxp3~+Treg)能特異性地抑制免疫排斥反應(yīng)，對調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答與誘導(dǎo)、維持外周免疫耐受具有重要作用。 由于同種異體皮膚移植相對于其他器官移植而言具有特殊性，可以說本課題即是在應(yīng)用一種生物敷料（活性同種異體移植皮片）的反應(yīng)體系中——同種異體小鼠皮膚移植實驗動物模型，通過一定的實驗方法——應(yīng)用新型免疫抑制劑（苯并噻吩類似物，BP）于移植前對受者小鼠進行預(yù)處理，以移植成活率為指標(biāo)而進行的研究。 本論文的研究工作主要包含了兩個部分：體外細胞實驗與體內(nèi)動物實驗。 （1）體外細胞實驗部分：首先，通過對Foxp3~+Treg細胞的檢測實驗，說明BP可誘導(dǎo)產(chǎn)生CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細胞；其次，通過細胞增殖實驗，顯示了BP對細胞增殖具有抑制作用；最后，通過細胞凋亡實驗，分析出BP可通過促進細胞凋亡進而抑制細胞增殖，同時也具有一定的毒副作用。即整個體外細胞實驗可證明：BP能在體外一定條件下誘導(dǎo)產(chǎn)生CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細胞；這群誘導(dǎo)型Foxp3~+Treg細胞具有免疫抑制功能，可通過促進淋巴細胞的凋亡進而抑制細胞增殖。 (2)體內(nèi)動物實驗部分：在移植前應(yīng)用BP對受者進行一定的預(yù)處理，然后進行同種異體小鼠皮膚移植，結(jié)果進一步證明了BP具有免疫抑制作用，可以延長皮膚移植物及受者小鼠的存活時間；實驗組同種異體皮膚移植物的平均存活時間從9.364天延長至了21.55天，受者小鼠存活超過100天的成活率從0提高至27%，即皮膚移植成活率得以提高。 綜上所述，整個實驗結(jié)果顯示：在同種異體小鼠皮膚移植實驗動物模型中（供體：雄性BALB/C(H-2d)小鼠，受者：雌性C57BL/6(H-b)小鼠），移植前，，通過應(yīng)用新型免疫抑制劑——苯并噻吩類似物（BP）對受者小鼠進行預(yù)處理，可提高同種異體皮膚移植的成活率。
【圖文】：

圖 2.1 GFP 小鼠脾淋巴細胞的細胞數(shù)統(tǒng)計結(jié)果�；罴毎嫈�(shù)結(jié)果（A）和細胞總計數(shù)結(jié)果(B)Fig 2.1 Tatistical results of spleen cell numbers from GFP mice. The left one is the statistical resultsof alive cell numbers (A) and the right one is the statistical results of alive cell numbers (B)②Treg 細胞的流式檢測結(jié)果將鋪好板的 GFP 小鼠脾淋巴細胞放置于 37℃，5%CO2恒溫孵箱中培養(yǎng)，72h 后，取出轉(zhuǎn)移至流式管中，分別用熒光素標(biāo)記抗體（CD4-PE 和 CD8-APC-cy7）進行細胞表面熒光染色，上機，應(yīng)用流式細胞儀檢測 CD4+Foxp3+調(diào)節(jié)性 T 細胞（Treg）亞群的比例，結(jié)果見圖 2.2。如圖所示，流式細胞儀檢測到的第二象限的雙陽性細胞亞群 CD4+Foxp3+即是識別調(diào)節(jié)性 T 細胞(Treg)的特異性表面標(biāo)志。A-F 各組檢測到的 CD4+Foxp3+T 細胞亞群占 GFP 小鼠總脾淋巴細胞的比例分別為：0.1%，0.48%，0.64%，0.87%，0.95%，0.51%�？梢钥闯觯�(lián)用高濃度 IL-2 和可溶性抗 CD3、CD28 單克隆抗體可刺激 GFP 小鼠脾CD4+Foxp3+T 淋巴細胞的活化與增殖。而 TGF-β可以促進這種作用[124]。免疫抑制劑BP 的加入，則進一步促進 CD4+Foxp3+T 細胞的生成,且其生成的比例隨著 BP 刺激濃

Treg細胞亞群的流式檢測結(jié)果
【學(xué)位授予單位】：重慶理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：2517187