【摘要】：目的 1.構(gòu)建血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)表達(dá)質(zhì)粒并分析其在細(xì)胞中的生物學(xué)活性； 2.建立組織特異性過表達(dá)TM的小鼠模型并分析其在動(dòng)物體內(nèi)的生物學(xué)活性。 方法 1. RT-PCR獲取野生型小鼠肺組織中TM基因片段； 2. TOPO表達(dá)載體連接TM基因片段,相應(yīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SVEC細(xì)胞后,檢測(cè)細(xì)胞增殖和凋亡,以及蛋白C活化試驗(yàn)； 3. PCCALL2表達(dá)載體連接TM基因片段,相應(yīng)質(zhì)粒PTMHL與Cre質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染SVEC細(xì)胞后,檢測(cè)TM的表達(dá),以及蛋白C活化試驗(yàn)； 4.顯微注射法將構(gòu)建成功的PTMHL質(zhì)粒注入供體C57BL/6小鼠受精卵細(xì)胞后,采用轉(zhuǎn)基因小鼠的個(gè)體組織(鼠尾)中提取基因組DNA進(jìn)行PCR分析,鑒定基因型： 5.新生PTMHL轉(zhuǎn)基因小鼠與Tie2-Cre小鼠雜交,采用轉(zhuǎn)基因小鼠的個(gè)體組織(鼠尾)中提取基因組DNA進(jìn)行PCR分析,對(duì)其TM基因型和Cre基因型鑒定,Western blot和免疫組化法檢測(cè)組織中TM抗體的表達(dá),用蛋白C活性分析法檢測(cè)TM轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)蛋白C活化的影響。 結(jié)果 1.成功構(gòu)建真核表達(dá)TM的質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染SVEC細(xì)胞后,細(xì)胞的增殖和凋亡得到抑制,細(xì)胞中的TM生物活性增強(qiáng)； 2.成功構(gòu)建組織特異性表達(dá)TM的質(zhì)粒PTMHL,用此質(zhì)粒和表達(dá)Cre質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染SVEC細(xì)胞后只有在表達(dá)Cre的情況下TM才會(huì)過表達(dá),此外細(xì)胞中的TM生物活性增強(qiáng)； 3.成功構(gòu)建組織特異性過表達(dá)TM的小鼠模型,同Tie2-Cre小鼠雜交后,新生小鼠的心臟,腎臟,肝臟,肺等組織中內(nèi)皮細(xì)胞的TM表達(dá)明顯增強(qiáng),轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)TM的生物活性增加。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R-332

【共引文獻(xiàn)】

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7 彭s，

本文編號(hào)：2517028