【摘要】：目的：在前期實(shí)驗(yàn)中，我們通過對不同時(shí)間低氧培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞(BV2細(xì)胞)的功能狀態(tài)研究，發(fā)現(xiàn)BV2細(xì)胞在低氧培養(yǎng)1小時(shí)和12小時(shí)下分別起到神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)損傷的作用。本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步探討B(tài)V2細(xì)胞JNK信號(hào)通路對小膠質(zhì)細(xì)胞功能及腫瘤壞死因子受體(TNFR)表達(dá)的影響。 方法：以小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞瘤(BV2細(xì)胞株)及大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤(PC12細(xì)胞株)為研究對象，，分別用來代表小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元。將BV2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組為：正常對照組(常氧組)、低氧1h組、低氧1h+SP600125組、低氧12h組、低氧12h+SP600125組。應(yīng)用western blot檢測低氧下BV2細(xì)胞JNK信號(hào)通路阻斷劑SP600125最佳阻斷濃度。然后在不同程度低氧及有無SP600125干預(yù)下培養(yǎng)BV2細(xì)胞，用其培養(yǎng)液來培養(yǎng)PC12細(xì)胞，通過CCK-8法測定PC12細(xì)胞存活率并以此來反映BV2細(xì)胞功能，同時(shí)應(yīng)用western blot檢測BV2細(xì)胞TNF-α受體TNFR1與TNFR2表達(dá)情況，應(yīng)用ELISA法檢測在不同功能狀態(tài)下BV2細(xì)胞分泌表達(dá)TNF-α、IL-1β、NGF情況。 結(jié)果： 1.正常對照組和損傷對照組PC12細(xì)胞的存活率分別為：100%和52.37%；BV2細(xì)胞低氧培養(yǎng)1h時(shí)，PC12細(xì)胞的存活率為75.96%，加入SP600125后PC12細(xì)胞存活率增加到81.88%，差異有顯著性(P0.01)；BV2細(xì)胞低氧培養(yǎng)12h時(shí)，PC12細(xì)胞的存活率為36.87%，加入SP600125后PC12細(xì)胞存活率可達(dá)57.61%，差異有顯著性(P0.01)。 2.在正常情況下，BV2細(xì)胞表面無TNFR1表達(dá)，僅有少量TNFR2表達(dá)。在低氧培養(yǎng)1h時(shí)，TNFR2表達(dá)增多，加入SP600125能進(jìn)一步增加TNFR2的表達(dá)(P0.05)；在低氧培養(yǎng)12h時(shí)，TNFR1的表達(dá)增多，加入SP600125能進(jìn)一步減少TNFR1的表達(dá)(P0.05)。 3. BV2細(xì)胞在常氧培養(yǎng)下，其分泌的TNF-α、 IL-1β、 NGF分別為447.77±7.62pg/ml、4.38±0.29pg/ml和122.19±4.94pg/ml；BV2細(xì)胞經(jīng)低氧培養(yǎng)1h，其分泌的TNF-α、IL-1β、NGF均有所增加，分別為612.19±15.06pg/ml、15.22±0.73pg/ml和214.22±5.19pg/ml；當(dāng)?shù)脱跖囵B(yǎng)12h，TNF-α和IL-1β水平增加到1265.24±14.36pg/ml、22.87±1.03pg/ml，而NGF的水平則下降到25.47±1.74pg/ml。加入SP600125后能明顯減少TNF-α和IL-1β的分泌而增加NGF的分泌(P0.01)。 結(jié)論： 1.缺氧條件下，JNK信號(hào)通路介導(dǎo)了BV2細(xì)胞的損傷作用。 2. JNK信號(hào)通路參與調(diào)控NGF、TNF-α、IL-1β的分泌。 3. JNK信號(hào)通路可影響TNFR1與TNFR2的表達(dá)。
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圖片說明： 用 SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)均。率的比較用卡方檢驗(yàn)，兩組間比較用 t 檢驗(yàn)，多組比驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)均取 P<0.05 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié) 果 與 PC12 細(xì)胞密度與吸光度值標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與方程的 BV2 細(xì)胞不同密度所對應(yīng)的平均吸光度值(表 1)，應(yīng)用胞密度與吸光度值標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖 1)，得方程：y=25.00x-2.8，此方程用于計(jì)算下面實(shí)驗(yàn)中 BV2 細(xì)胞密度。密度 BV2 細(xì)胞的吸光度值80 40 20 10 5 2.5 1.25 3.358 1.648 0.854 0.462 0.289 0.223 0.199
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圖片說明： 根據(jù) PC12 細(xì)胞不同密度所對應(yīng)的平均吸光度值(表 2)，建立 PC1度值標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖 2)，并得方程：y=88.62x-12.48 (x:吸光度值，方程用于計(jì)算下面實(shí)驗(yàn)中 PC12 細(xì)胞密度。表 2 不同密度 PC12 細(xì)胞的吸光度度(104/ml) 300 150 75 37.5 18.75 9.375 光度值 3.486 1.883 1.042 0.573 0.324 0.232
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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1 王永生;魏子峰;田清友;張作鳳;周洪霞;張宇新;;JNK通路在亞急性帕金森病模型小鼠黑質(zhì)細(xì)胞炎癥與凋亡過程中的調(diào)控作用[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2007年05期

2 吳飛翔,章衛(wèi)平;JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與細(xì)胞凋亡[J];生命的化學(xué);2002年04期

3 丘創(chuàng)華;侯敢;黃迪南;;TNF-α信號(hào)傳導(dǎo)通路的分子機(jī)理[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2007年06期

4 劉滸;唐四元;;骨形成蛋白-2通過JNK信號(hào)通路促進(jìn)肝癌HepG2細(xì)胞凋亡[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2009年04期

5 鄭剛;駱文靜;張雪平;趙芳;王基野;陳耀明;陳景元;;JNK通路在MPP~+誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡中的作用[J];衛(wèi)生研究;2011年01期

6 鄧鈺蕾,徐瑋,湯薈冬,陳生弟;NF-κB在NGF和TNF-α對Aβ_(25～35)海馬神經(jīng)細(xì)胞毒的保護(hù)作用中的機(jī)制研究[J];現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志;2003年06期

7 趙翠娟;王承黨;;c-Jun氨基末端激酶選擇性抑制劑對葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎的影響[J];世界華人消化雜志;2011年05期

8 黃春;吳文偉;徐春平;竇萍;;JNK信號(hào)介導(dǎo)TNF-α對內(nèi)皮細(xì)胞VCAM-1的誘導(dǎo)表達(dá)[J];中國老年學(xué)雜志;2009年14期

9 李方明;郭毅;孫圣剛;唐冰杉;姜昕;李勁頻;王啟章;王玲;;JNK信號(hào)通路在游離膽固醇誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡中的作用[J];卒中與神經(jīng)疾病;2008年02期

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3 于嵩;姜黃素對帕金森病及阿爾茨海默病神經(jīng)元保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2515751