【摘要】：目的：探討白細(xì)胞介素-15(Interleukin15,IL.15)及骨髓來源樹突細(xì)胞(Dendritic Cell,DC)對(duì)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(Cytokone-Induced Kilker,CIK)細(xì)胞增殖能力,免疫表型,以及殺傷肝癌細(xì)胞的作用。 方法：體外培養(yǎng)小鼠骨髓源性DC,通過流式細(xì)胞術(shù)(Floweytometry,FCM)檢測(cè)鑒定DC細(xì)胞CD80、CD86.MHC Ⅱ、CDllc表達(dá)情況。分為IL-15處理和未處理?xiàng)l件下培養(yǎng)CIK、DC-CIK細(xì)胞,通過FCM鑒定CIK細(xì)胞中CD3+、CD3+CD8+、 CD3+NK1.1+表達(dá)情況。培養(yǎng)分組：CIK,CIK+IL-15,CIK+DC,CIK+IL-15+DC觀察IL-15及DC對(duì)CIK細(xì)胞增殖能力的影響,通過FCM用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其免疫表型的變化。將CIK細(xì)胞及IL-15刺激后的CIK分別與DC以5：1效靶比進(jìn)行培養(yǎng),用臺(tái)盼藍(lán)活細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)算細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù),FCM檢測(cè)其表型變化,同時(shí)通過測(cè)定乳酸脫氫酶(LDH)檢驗(yàn)殺傷活性。數(shù)據(jù)通過用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。 結(jié)果：每只小鼠骨髓細(xì)胞可培養(yǎng)出(5.5±0.5)×106個(gè)DC,且FCM檢測(cè)顯示DC高表達(dá)CD80(95.0＋1.2%).CD86(88.5±1.4%).MHC-Ⅱ(89.2±1.2%)及CDllc(83.3±1.7%).每只小鼠脾臟可獲得約(4.5±0.5)×106個(gè)CIK細(xì)胞,在第14天時(shí)35.0±2.7%的細(xì)胞為CD3+、18.8±2.4%的細(xì)胞為CD3+CD8+、17.1±2.5%的細(xì)胞為CD3+NK1.1+。.骨髓源樹突細(xì)胞刺激及培養(yǎng)體系中加入IL-15后的CIK細(xì)胞增殖能力高于常規(guī)對(duì)照組,CD3+和CD3+CD8+、CD3+NK1.1+雙陽性細(xì)胞比率均高于常規(guī)對(duì)照組(P0.05)。培養(yǎng)后小鼠脾源CIK細(xì)胞總數(shù)在第10、15天分別為(2.1±0.1)×107,(2.4±0.2)×107,與對(duì)照組(0.5×107)相比具有顯著性差異(P0.05)。在2.5：1～20：1的效靶比范圍內(nèi),IL-15刺激的CIK及DC-CIK細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷率顯著高于CIK細(xì)胞(P0.05),且殺傷率與效靶比呈正相關(guān)。在效靶比20：1時(shí),共IL-15刺激的DC-CIK細(xì)胞對(duì)Hepal-6肝癌細(xì)胞殺傷率為(58.75±4.34)%。 結(jié)論：培養(yǎng)基細(xì)胞因子選擇法培養(yǎng)可收獲大量的骨髓源DC,在多種細(xì)胞因子作用下可培養(yǎng)大量脾臟來源的CIK。IL-15和骨髓源性DC均可增加CIK細(xì)胞的增殖能力及膜表面抗原的表達(dá)率,且二者具有疊加效應(yīng)。DC刺激增加CIK細(xì)胞抗腫瘤細(xì)胞的活性,IL-15作用下DC-CIK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性進(jìn)一步增強(qiáng)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

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10 陳，

本文編號(hào)：2514310