本文關(guān)鍵詞：人源脂聯(lián)素及其受體的表達(dá)純化和兩者間相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：脂肪細(xì)胞分泌表達(dá)的脂聯(lián)素能夠識別、結(jié)合肝臟或骨骼肌中的脂聯(lián)素受體,通過下游AMPK、PPARα等途徑刺激葡糖糖攝取和脂肪酸氧化,維持體內(nèi)能量穩(wěn)態(tài),發(fā)揮胰島素增敏作用。脂聯(lián)素及其受體代謝或功能異常導(dǎo)致機(jī)體多種疾病的發(fā)生,如胰島素耐受、肥胖、動脈粥樣硬化等等,恢復(fù)其含量或功能能夠有效緩解各類疾病。因此,脂聯(lián)素及其受體成為治療胰島素耐受等疾病的全新重要靶點(diǎn)。在體內(nèi),脂聯(lián)素球形結(jié)構(gòu)域部分能夠結(jié)合肝中Adip R1,形成配體-受體復(fù)合物,但兩者間相互作用機(jī)制尚不清楚。本文構(gòu)建了脂聯(lián)素(104-244)原核及昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng),鑒定及篩選了表達(dá)純化克隆,通過親和純化得到帶有GST或MBP融合蛋白的脂聯(lián)素蛋白及經(jīng)PPase和TEV水解去除融合蛋白后單獨(dú)的脂聯(lián)素蛋白,并對蛋白蛋白行為進(jìn)行分子篩分析。結(jié)果顯示,試驗(yàn)純化的到的脂聯(lián)素蛋白在自然條件下能形成二聚體。構(gòu)建了脂聯(lián)素受體1三種截短體(22-375、72-37、89-375)蛋白昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng),優(yōu)化蛋白表達(dá)及純化條件,純化得到三種截短體蛋白。結(jié)果顯示,部分脂聯(lián)素受體1蛋白能夠通過二硫鍵形成二聚體。在得到蛋白的基礎(chǔ)上,通過分子篩層析及GST-Pull down、Ni-Pull down進(jìn)行了兩種蛋白相互作用的研究,結(jié)果表明,原核及昆蟲表達(dá)系統(tǒng)得到的脂聯(lián)素蛋白與昆蟲表達(dá)系統(tǒng)得到的脂聯(lián)素受體1蛋白無明顯的相互作用。
【關(guān)鍵詞】：脂聯(lián)素 脂聯(lián)素受體 蛋白純化 相互作用
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R3411
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第1章 緒論7-21
• 1.1 課題研究的目的和意義7-8
• 1.2 脂聯(lián)素蛋白結(jié)構(gòu)與功能8-11
• 1.2.1 脂聯(lián)素蛋白8
• 1.2.2 脂聯(lián)素蛋白結(jié)構(gòu)8-9
• 1.2.3 脂聯(lián)素蛋白功能9-11
• 1.3 脂聯(lián)素受體蛋白結(jié)構(gòu)與功能11-13
• 1.3.1 脂聯(lián)素受體蛋白11
• 1.3.2 脂聯(lián)素受體蛋白結(jié)構(gòu)11-12
• 1.3.3 脂聯(lián)素受體蛋白功能12-13
• 1.4 脂聯(lián)素功能信號機(jī)制13-17
• 1.4.1 脂聯(lián)素功能的研究13-14
• 1.4.2 脂聯(lián)素信號傳導(dǎo)的三條途徑14-17
• 1.4.3 脂聯(lián)素基因多態(tài)性對脂聯(lián)素功能的影響17
• 1.5 針對脂聯(lián)素-脂聯(lián)素受體進(jìn)行的治療研究17-18
• 1.5.1 脂聯(lián)素假說17
• 1.5.2 脂聯(lián)素及其受體類似物的研究17-18
• 1.6 去垢劑的種類、功能及作用機(jī)制18-19
• 1.7 最新研究變革及研究方向19
• 1.8 本文主要研究內(nèi)容19-21
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與方法21-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料21
• 2.1.1 真核表達(dá)系統(tǒng)21
• 2.1.2 原核表達(dá)系統(tǒng)21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑21-22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)原理及方法22-29
• 2.3.1 分子克隆22-24
• 2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)24-25
• 2.3.3 轉(zhuǎn)染25
• 2.3.4 蛋白表達(dá)25-26
• 2.3.5 蛋白純化26-28
• 2.3.6 Western Blotting28
• 2.3.7 Adiponectin與Adip R1 的相互作用檢測28-29
• 第3章 脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)及純化29-36
• 3.1 引言29
• 3.2 脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)檢測29-30
• 3.2.1 脂聯(lián)素在原核表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)檢測29
• 3.2.2 脂聯(lián)素在真核表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)檢測29-30
• 3.3 脂聯(lián)素蛋白的純化30-35
• 3.3.1 原核表達(dá)系統(tǒng)中脂聯(lián)素蛋白的純化30-32
• 3.3.2 真核表達(dá)系統(tǒng)中脂聯(lián)素蛋白的純化32-35
• 3.4 討論35
• 3.5 本章小結(jié)35-36
• 第4章 Adip R1的表達(dá)純化及蛋白相互作用研究36-47
• 4.1 引言36
• 4.2 Adip R1 的表達(dá)及純化36-43
• 4.2.1 Adip R1 的表達(dá)檢測36-38
• 4.2.2 Adip R1 最優(yōu)表達(dá)條件的篩選38-39
• 4.2.3 Adip R1 最優(yōu)純化條件的篩選39-42
• 4.2.4 其余兩種脂聯(lián)素受體截短體蛋白的表達(dá)42-43
• 4.3 Adiponectin與Adip R1 相互作用的研究43-45
• 4.3.1 分子篩層析研究兩種蛋白的相互作用43-44
• 4.3.2 Pull-down實(shí)驗(yàn)研究兩種蛋白的相互作用44-45
• 4.4 討論45-46
• 4.5 本章小結(jié)46-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-58
• 致謝58

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1 孫曉玲;楊海瀾;;脂聯(lián)素受體表達(dá)及影響因素研究進(jìn)展[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2007年01期

2 蘇建明;黃琦;倪海祥;;脂聯(lián)素受體的相關(guān)研究與中醫(yī)藥開發(fā)思路探討[J];云南中醫(yī)中藥雜志;2007年07期

3 于洪馗;吳立玲;;脂聯(lián)素受體的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年02期

4 崔曉兵;韓意;李麗;吳立玲;;脂聯(lián)素受體表達(dá)調(diào)控的研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2011年03期

5 高小亞,戈敏娟,馬向華;脂聯(lián)素受體的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2005年11期

6 秦志宏;郭志新;孫英姿;鄭彩虹;郗光霞;;脂聯(lián)素受體1基因-102T/G多態(tài)位點(diǎn)與山西省漢族人2型糖尿病的關(guān)系[J];中國藥物與臨床;2009年04期

7 趙宏宇;鄭強(qiáng);張錦;;球狀脂聯(lián)素上調(diào)脂聯(lián)素受體1抑制晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的初步研究[J];中國病理生理雜志;2010年04期

8 雷虹;李麗;張智國;吳立玲;;血管緊張素Ⅱ?qū)π募≈?lián)素受體表達(dá)的作用及機(jī)制研究[J];中國病理生理雜志;2012年11期

9 袁國躍,陳名道;脂聯(lián)素受體及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊;2004年S1期

10 葛倩,鄧華聰;脂聯(lián)素受體及其信號傳遞通路和糖尿病[J];中華糖尿病雜志;2004年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 張爍;劉瑜;吳東海;胡仁明;李益明;;人脂聯(lián)素受體1和2基因的克隆與真核表達(dá)[A];2006年中華醫(yī)學(xué)會糖尿病分會第十次全國糖尿病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

2 吉鴻飛;秦貴軍;張偉偉;吳麗娜;馬曉君;;白藜蘆醇對波動性高糖培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞脂聯(lián)素受體表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十一次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

3 潘孝貴;李蕾;;運(yùn)動對大鼠胰島素抵抗形成中脂聯(lián)素受體基因表達(dá)的影響[A];第九屆全國體育科學(xué)大會論文摘要匯編(3)[C];2011年

4 崔曉兵;王程;李麗;吳立玲;;胰島素抑制大鼠心肌細(xì)胞脂聯(lián)素受體1表達(dá)的機(jī)制研究[A];中國病理生理學(xué)會第九屆全國代表大會及學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2010年

5 李維新;李云;張凌齊;田磊磊;周杰;;重組脂聯(lián)素對小鼠脂肪組織脂聯(lián)素受體表達(dá)的影響[A];全國動物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2012年

6 張智國;李麗;王程;凡棟;符鳳英;吳立玲;;血管緊張素Ⅱ通過AT_1受體下調(diào)大鼠心肌細(xì)胞脂聯(lián)素受體1 mRNA表達(dá)[A];第六屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會論文摘要集[C];2007年

7 龔燕平;李春霖;母義明;田慧;陸菊明;潘長玉;;高脂培養(yǎng)對HepG2細(xì)胞脂聯(lián)素受體R1和R2 mRNA表達(dá)的影響[A];2006年中華醫(yī)學(xué)會糖尿病分會第十次全國糖尿病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

8 張凌齊;李云;田磊磊;李維新;劉力源;張淑靜;周杰;;皖南花豬垂體中脂聯(lián)素受體與GnRHR、FSH-β和LH-β基因表達(dá)的時序變化及相關(guān)性研究[A];全國動物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2012年

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1 錢錚;增加脂聯(lián)素受體可減輕糖尿病癥狀[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2007年

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1 郗光霞;糖耐量受損期脂聯(lián)素、脂聯(lián)素受體表達(dá)變化及羅格列酮干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

2 戴夢紅;豬抵抗素、脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體基因的克隆和分子特征[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

3 應(yīng)志強(qiáng);脂聯(lián)素對內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖分化的影響及其機(jī)制探討[D];浙江大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳云;人源脂聯(lián)素及其受體的表達(dá)純化和兩者間相互作用的研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

2 王育斌;血清脂聯(lián)素及肝臟脂聯(lián)素受體-2在非酒精性脂肪性肝病發(fā)病中的意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

3 李芳;脂聯(lián)素受體2、中介素在大鼠非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

4 李芳;脂聯(lián)素受體基因多態(tài)性與2型糖尿病及其大血管病變的關(guān)系[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

5 朱敏鋒;家蠶脂聯(lián)素受體鑒定、亞細(xì)胞定位以及組織表達(dá)分析[D];江蘇大學(xué);2008年

6 張建良;脂聯(lián)素受體的表達(dá)與大腸癌分期和分級的關(guān)系[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

7 宗曉娜;脂聯(lián)素及脂聯(lián)素受體1與糖尿病心肌病的關(guān)系[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

8 鞏麗;多囊卵巢綜合征痰濕證與脂聯(lián)素及脂聯(lián)素受體mRNA表達(dá)的相關(guān)研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2013年

9 余凡;超排卵周期人脂聯(lián)素及脂聯(lián)素受體的表達(dá)與體外受精結(jié)局的相關(guān)研究[D];華中科技大學(xué);2008年

10 魏萍;脂聯(lián)素受體1在2型糖尿病大鼠腎組織中的表達(dá)及替米沙坦的干預(yù)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：人源脂聯(lián)素及其受體的表達(dá)純化和兩者間相互作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：251199