本文關(guān)鍵詞：ELMO1對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬作用及炎癥反應(yīng)中相關(guān)因子表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：ELMO1(Engulfment and cell motility protein 1,ELMO1)基因位于人第七號(hào)染色體上,在小鼠細(xì)胞內(nèi)定位在第十三號(hào)染色體,編碼的ELMO1蛋白在細(xì)胞的遷移和吞噬過程中扮演著重要的角色,失控的細(xì)胞遷移和吞噬會(huì)導(dǎo)致炎癥相關(guān)疾病的發(fā)生甚至腫瘤轉(zhuǎn)移。巨噬細(xì)胞由來源于骨髓的單核細(xì)胞分化而來,機(jī)體所有組織中都有這種細(xì)胞的存在,且它還是造血系統(tǒng)中可塑性最強(qiáng)的一種免疫細(xì)胞。巨噬細(xì)胞既是機(jī)體非特異性免疫的重要組成細(xì)胞,也在特異性免疫反應(yīng)中有著呈遞抗原的作用,是體內(nèi)一種具有多種功能和用途的細(xì)胞,這些多樣性功能賦予它在正常發(fā)育、體內(nèi)平衡、組織修復(fù)和對(duì)病原菌的免疫反應(yīng)中有不同作用。在非特異性免疫中,它能通過吞噬作用除去機(jī)體中侵入的病原菌和死細(xì)胞以及碎片;在特異性免疫反應(yīng)中攝取并遞呈外援性異物,通過分泌細(xì)胞因子和趨化因子誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。幾乎每一種人類疾病都涉及到巨噬細(xì)胞,它們也被作為主要的治療目標(biāo),因?yàn)樗鼈兊倪@些多樣性功能可以被定向的加強(qiáng)或抑制,以改變疾病的結(jié)果。LPS刺激巨噬細(xì)胞后,通過TLR4受體激活調(diào)控細(xì)胞內(nèi)炎癥因子相關(guān)基因的表達(dá)。ELMO1基因參與細(xì)胞的遷移和吞噬作用,而巨噬細(xì)胞在機(jī)體的固有免疫和適應(yīng)性免疫中發(fā)揮重要作用,為了探究ELMO1是否可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的吞噬作用和分泌功能,以及涉及到哪些分子機(jī)制。首先,實(shí)驗(yàn)室通過構(gòu)建了ELMO1基因的干涉載體PLVX-sh RNA及其對(duì)照質(zhì)粒,包被慢病毒后感染RAW264.7細(xì)胞系,擴(kuò)大培養(yǎng)后用流式細(xì)胞儀分選出穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系,采用鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),然后用穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的細(xì)胞去吞噬標(biāo)記熒光標(biāo)簽的大腸桿菌顆粒,流式細(xì)胞儀分析吞噬效率。然后,本實(shí)驗(yàn)室成功建立ELMO1基因敲除小鼠,從小鼠腹腔取得原代巨噬細(xì)胞或者由小鼠骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)分化而來的巨噬細(xì)胞先用流式細(xì)胞儀檢測(cè)純度或分化效率,再通過吞噬指數(shù)法去檢測(cè)野生型和敲除型吞噬效率,并從蛋白水平檢測(cè)LPS刺激后炎癥因子的表達(dá)情況。結(jié)果表明:ELMO1基因表達(dá)降低后細(xì)胞的吞噬能力變?nèi)?在小鼠的原代巨噬細(xì)胞中,敲除型細(xì)胞內(nèi)Dock2表達(dá)明顯降低,細(xì)胞的吞噬能力無明顯變化,可能是由于ELMO1敲除后細(xì)胞內(nèi)ELMO蛋白的另一種亞型ELMO2蛋白表達(dá)升高引起的。LPS刺激巨噬細(xì)胞后,炎癥因子TNF-a和IL-6的分泌在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異,但由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知ELMO1敲除后炎癥因子產(chǎn)生的絕對(duì)量相對(duì)增加。ELMO1基因在巨噬細(xì)胞內(nèi)與Dock2結(jié)合形成復(fù)合物行使功能,ELMO對(duì)原代巨噬細(xì)胞的吞噬影響有待進(jìn)一步驗(yàn)證。
【關(guān)鍵詞】：ELMO1 RAW264.7細(xì)胞 原代巨噬細(xì)胞 吞噬作用 炎癥因子
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略詞表8-11
• 第一部分 引言11-21
• 1 研究背景11-18
• 1.1 免疫細(xì)胞與吞噬11
• 1.2 細(xì)胞趨化性研究11-13
• 1.3 細(xì)胞吞噬的研究13-16
• 1.4 吞噬與炎癥16-18
• 2 研究意義和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)18-21
• 2.1 研究目的和意義18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)19-21
• 第二部分 ELMO1對(duì)巨噬細(xì)胞系RAW264.7 的吞噬作用研究21-39
• 1 實(shí)驗(yàn)材料21-24
• 1.1 實(shí)驗(yàn)質(zhì)粒、細(xì)菌及細(xì)胞21
• 1.2 siRNA21-22
• 1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器22-23
• 1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑耗材及配方23-24
• 2 實(shí)驗(yàn)方法24-32
• 2.1 RAW264.7 細(xì)胞系培養(yǎng)24-25
• 2.2 ELMO1 shRNA重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定25-29
• 2.3 Western blot檢測(cè)29
• 2.4 病毒質(zhì)粒的包被及鑒定29-30
• 2.5 穩(wěn)定轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株的篩選30-31
• 2.6 吞噬實(shí)驗(yàn)31
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31-32
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-35
• 3.1 pLVX-shRNA-ELMO1i重組干擾質(zhì)粒的酶切鑒定32-33
• 3.2 Western Blot檢測(cè)重組質(zhì)粒的干擾水平33-34
• 3.3 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系篩選34
• 3.4 ELMO1對(duì)RAW264.7 細(xì)胞吞噬能力的影響34-35
• 4 討論35-39
• 第三部分 ELMO1對(duì)原代巨噬細(xì)胞的吞噬作用研究39-53
• 1 實(shí)驗(yàn)材料39-41
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)小鼠39
• 1.2 引物39
• 1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器39-40
• 1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑40-41
• 2 實(shí)驗(yàn)方法41-45
• 2.1 小鼠基因型鑒定41-42
• 2.2 小鼠ELMO1基因敲除后蛋白表達(dá)鑒定42
• 2.3 巨噬細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及純度檢測(cè)42-43
• 2.4 ELISA檢測(cè)炎癥因子43-44
• 2.5 LPS刺激巨噬細(xì)胞44
• 2.6 Western Blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ELMO1、ELMO2、Dock2蛋白的表達(dá)44
• 2.7 吞噬指數(shù)實(shí)驗(yàn)44-45
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-50
• 3.1 小鼠基因型鑒定結(jié)果45-46
• 3.2 ELMO1敲除小鼠蛋白鑒定結(jié)果46-47
• 3.3 巨噬細(xì)胞分離純度及分化效率47-48
• 3.4 LPS刺激巨噬細(xì)胞后分泌炎癥因子檢測(cè)48
• 3.5 敲除ELMO1基因?qū)υ奘杉?xì)胞吞噬的影響48-50
• 3.6 ELMO1對(duì)巨噬細(xì)胞內(nèi)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響50
• 4 討論50-53
• 結(jié)論53-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 致謝61-63
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄63-64

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：ELMO1對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬作用及炎癥反應(yīng)中相關(guān)因子表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：251059