本文關鍵詞：剛地弓形蟲WH3-GRA15-GFP核酸疫苗免疫保護作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種專性細胞內寄生的原蟲,可寄生于人和許多動物的有核細胞內,引起機會性人獸共患性弓形蟲病,大多數感染者無臨床癥狀,但對于具有免疫缺陷的人則可引起嚴重的臨床癥狀甚至導致患者死亡。弓形蟲病至今尚無有效的防治藥物,疫苗防治是發(fā)展方向。但由于弓形蟲有著復雜的生活史以及多種入侵宿主途徑,蟲體具有多種高度多態(tài)性的特異性抗原并能逃避宿主免疫系統的攻擊,從而導致弓形蟲疫苗的研制與其它細菌和病毒性傳染病疫苗相比更加復雜。目前對弓形蟲疫苗的研究越來越深入,隨著分子生物學研究和基因工程的不斷發(fā)展,使弓形蟲疫苗的研發(fā)有了很大突破。有研究報告,GRA15疫苗用于昆明小鼠的免疫可產生抗弓形蟲感染的保護性免疫,基于文獻報道GRA15的疫苗的免疫原性效果,本研究將制備的WH3-GRA15-GFP核酸疫苗直接肌注免疫小鼠,通過觀察和檢測弓形蟲WH3-GRA15-GFP核酸疫苗的免疫原性和免疫保護性,篩選WH3-GRA15-GFP核酸疫苗能否作為抗擊弓形蟲感染的候選疫苗,以期用于弓形蟲病的預防和治療。目的：利用GRA15基因真核表達重組質粒免疫BALB/c小鼠,檢測小鼠體液免疫和細胞免疫,觀察WH3-GRA15-GFP核酸疫苗對BALB/c小鼠的免疫保護作用。方法：克隆Chinese 1型弓形蟲Wh3株GRA15編碼序列將其插入真核表達載體pEGFP-C2中構建重組質粒WH3-GRA15-GFP,脂質體法轉染T293細胞并觀察體外表達,Western blotting分析鑒定。54只BALB/c小鼠隨機分為PBS對照組、空質粒對照組、實驗組,每組18只,均通過股四頭肌注射方式免疫小鼠,其中實驗組每鼠注射WH3-GRA15-GFP重組質粒1001μg,空質粒對照組注射pEGFP-C2質粒1001μg,PBS對照組注射無菌PBS緩沖液100μL。共免疫3次,每次間隔2周。分別于每次注射前和末次注射后第2周檢測小鼠血清特異性IgG、IgGl、IgG2a抗體和IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ等細胞因子。末次注射后2周,各組隨機挑選13只小鼠腹腔攻擊感染弱毒株弓形蟲速殖子1000個/只,觀察其存活時間,評價免疫效果,5只實驗組小鼠檢測重組質粒在免疫小鼠體內表達情況。結果：WH3-GRA15-GFP核酸疫苗小鼠體內有表達但不能誘發(fā)小鼠產生細胞免疫和體液免疫反應,實驗組小鼠血清特異IgG、IgG1、IgG2a隨著免疫次數的增加沒有顯著變化(p0.05),IL-2、IL-4、IL-10、IFN-y和空白對照組小鼠相比均沒有增加(p0.05)。各組小鼠遭弓形蟲攻擊感染后的平均存活時間無統計學差異(p0.05)。結論：WH3-GRA15-GFP核酸疫苗在BALB/c小鼠體內有表達但對鼠弓形蟲感染無免疫保護性,可能不宜作為弓形蟲有效的疫苗候選分子。
【關鍵詞】：剛地弓形蟲 GRA15 核酸疫苗 免疫保護
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392-33
【目錄】：

• 英文縮略詞對照表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1. 前言11-16
• 2. 材料與方法16-38
• 3. 結果38-51
• 4. 討論51-53
• 5. 結論53-54
• 6. 參考文獻54-60
• 附錄一 個人簡歷60-61
• 附錄二 致謝61-62
• 附錄三 綜述62-72
• 參考義獻66-72

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