發(fā)布時(shí)間：2017-03-15 22:07

  本文關(guān)鍵詞：剛地弓形蟲(chóng)WH3-GRA15-GFP核酸疫苗免疫保護(hù)作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)是一種專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)寄生的原蟲(chóng),可寄生于人和許多動(dòng)物的有核細(xì)胞內(nèi),引起機(jī)會(huì)性人獸共患性弓形蟲(chóng)病,大多數(shù)感染者無(wú)臨床癥狀,但對(duì)于具有免疫缺陷的人則可引起嚴(yán)重的臨床癥狀甚至導(dǎo)致患者死亡。弓形蟲(chóng)病至今尚無(wú)有效的防治藥物,疫苗防治是發(fā)展方向。但由于弓形蟲(chóng)有著復(fù)雜的生活史以及多種入侵宿主途徑,蟲(chóng)體具有多種高度多態(tài)性的特異性抗原并能逃避宿主免疫系統(tǒng)的攻擊,從而導(dǎo)致弓形蟲(chóng)疫苗的研制與其它細(xì)菌和病毒性傳染病疫苗相比更加復(fù)雜。目前對(duì)弓形蟲(chóng)疫苗的研究越來(lái)越深入,隨著分子生物學(xué)研究和基因工程的不斷發(fā)展,使弓形蟲(chóng)疫苗的研發(fā)有了很大突破。有研究報(bào)告,GRA15疫苗用于昆明小鼠的免疫可產(chǎn)生抗弓形蟲(chóng)感染的保護(hù)性免疫,基于文獻(xiàn)報(bào)道GRA15的疫苗的免疫原性效果,本研究將制備的WH3-GRA15-GFP核酸疫苗直接肌注免疫小鼠,通過(guò)觀(guān)察和檢測(cè)弓形蟲(chóng)WH3-GRA15-GFP核酸疫苗的免疫原性和免疫保護(hù)性,篩選WH3-GRA15-GFP核酸疫苗能否作為抗擊弓形蟲(chóng)感染的候選疫苗,以期用于弓形蟲(chóng)病的預(yù)防和治療。目的：利用GRA15基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒免疫BALB/c小鼠,檢測(cè)小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫,觀(guān)察WH3-GRA15-GFP核酸疫苗對(duì)BALB/c小鼠的免疫保護(hù)作用。方法：克隆Chinese 1型弓形蟲(chóng)Wh3株GRA15編碼序列將其插入真核表達(dá)載體pEGFP-C2中構(gòu)建重組質(zhì)粒WH3-GRA15-GFP,脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染T293細(xì)胞并觀(guān)察體外表達(dá),Western blotting分析鑒定。54只BALB/c小鼠隨機(jī)分為PBS對(duì)照組、空質(zhì)粒對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組,每組18只,均通過(guò)股四頭肌注射方式免疫小鼠,其中實(shí)驗(yàn)組每鼠注射WH3-GRA15-GFP重組質(zhì)粒1001μg,空質(zhì)粒對(duì)照組注射pEGFP-C2質(zhì)粒1001μg,PBS對(duì)照組注射無(wú)菌PBS緩沖液100μL。共免疫3次,每次間隔2周。分別于每次注射前和末次注射后第2周檢測(cè)小鼠血清特異性IgG、IgGl、IgG2a抗體和IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ等細(xì)胞因子。末次注射后2周,各組隨機(jī)挑選13只小鼠腹腔攻擊感染弱毒株弓形蟲(chóng)速殖子1000個(gè)/只,觀(guān)察其存活時(shí)間,評(píng)價(jià)免疫效果,5只實(shí)驗(yàn)組小鼠檢測(cè)重組質(zhì)粒在免疫小鼠體內(nèi)表達(dá)情況。結(jié)果：WH3-GRA15-GFP核酸疫苗小鼠體內(nèi)有表達(dá)但不能誘發(fā)小鼠產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng),實(shí)驗(yàn)組小鼠血清特異IgG、IgG1、IgG2a隨著免疫次數(shù)的增加沒(méi)有顯著變化(p0.05),IL-2、IL-4、IL-10、IFN-y和空白對(duì)照組小鼠相比均沒(méi)有增加(p0.05)。各組小鼠遭弓形蟲(chóng)攻擊感染后的平均存活時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。結(jié)論：WH3-GRA15-GFP核酸疫苗在BALB/c小鼠體內(nèi)有表達(dá)但對(duì)鼠弓形蟲(chóng)感染無(wú)免疫保護(hù)性,可能不宜作為弓形蟲(chóng)有效的疫苗候選分子。
【關(guān)鍵詞】：剛地弓形蟲(chóng) GRA15 核酸疫苗 免疫保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R392-33
【目錄】：

• 英文縮略詞對(duì)照表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1. 前言11-16
• 2. 材料與方法16-38
• 3. 結(jié)果38-51
• 4. 討論51-53
• 5. 結(jié)論53-54
• 6. 參考文獻(xiàn)54-60
• 附錄一 個(gè)人簡(jiǎn)歷60-61
• 附錄二 致謝61-62
• 附錄三 綜述62-72
• 參考義獻(xiàn)66-72

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