本文關鍵詞：沙眼衣原體Ahpc基因克隆表達及過氧化物酶活性分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究沙眼衣原體(C.trachomatis,Ct)感染是否引起巨噬細胞氧化損傷,分析Ct0866(烷基氫過氧化物還原酶,Ahpc)基因在感染過程中的表達及其在Ct抗氧化脅迫中起作用,為了解Ct的抗氧化機制提供實驗基礎。方法:將Ct感染巨噬細胞,并在0h、3h、6h、9h和12h收集細胞,熒光法檢測細胞內(nèi)ROS的水平,Realtime-PCR檢測Ahpc基因在感染不同時間的變化情況。以Ct DNA為模板,PCR法擴增Ahpc基因,將其克隆到pET28a載體。經(jīng)鑒定后將其轉化至表達菌E.coli BL21,利用IPTG誘導目的蛋白的表達。采用SDS-PAGE對表達產(chǎn)物進行分析并純化重組Ahpc蛋白;采用氧化鐵二甲酚橙法檢測Ahpc蛋白的氫過氧化物酶活性。測定Ahpc蛋白表達的轉基因菌和對照菌在百草枯脅迫下的生長曲線。結果:(1)熒光結果顯示Ct感染能夠誘導巨噬細胞產(chǎn)生ROS,發(fā)現(xiàn)在3h時候其熒光值為1980±310,6h的熒光值為4260±350并且達到高峰,在9h時為2900±245,12h時為2100±250。(2)Ct感染過程中,Ahpc基因的表達上調,在3h時為初始的7.3倍,6h為初始的8.2倍,達到了高峰,然后開始下降,9h時為初始的5.2倍,12h為4.5倍。(3)成功擴增獲得大小為588 bp的Ahpc基因,所構建的原核重組質粒pET28a-Ahpc經(jīng)PCR和測序鑒定與預期目的基因相符。(4)利用IPTG成功誘導Ahpc蛋白的表達,SDS結果發(fā)現(xiàn)重組菌能夠表達分子約為26kDa的蛋白質,并通過Ni2+親和層析法純化獲得純度較高的重組Ahpc蛋白。(5)Ahpc蛋白能夠降解叔丁基過氧化氫(tert-butyl hydroperoxide,t-BHP)和H2O2。(6)在百草枯引起的氧化應激條件下,轉化pET28a-Ahpc表達載體的大腸桿菌生長要強于對照菌(轉化了空載體pET28a)。結論:Ct感染會導致巨噬細胞產(chǎn)生氧化應激;Ahpc在Ct感染過程中表達上調;Ahpc蛋白具有氫過氧化物酶活性和能夠賦予大腸桿菌抵抗氧化脅迫的能力。
【關鍵詞】：沙眼衣原體 烷基氫過氧化物還原酶 活性氧 叔丁基過氧化氫
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R374.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要英文縮略語索引9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料和方法12-24
• 第3章 結果24-30
• 第4章 討論30-34
• 結論34-36
• 參考文獻36-40
• 文獻綜述40-52
• 參考文獻47-52
• 附錄52-54
• 攻讀學位期間發(fā)表論文54-56
• 本研究受以下基金資助56-58
• 致謝58

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 沐桂藩,呂華,徐如良,顧方舟;分泌抗沙眼衣原體單克隆抗體雜交瘤細胞株的建立[J];中國免疫學雜志;1989年04期

2 羅迪青,陳志和,翁智勝,彭潔雯,梁燕燕;1996～1997年305例淋病患者合并感染交原體及沙眼衣原體分析[J];臨床皮膚科雜志;1998年06期

3 董植喜;沙眼衣原體入侵生殖道[J];家庭醫(yī)學;2001年02期

4 陳繼英;謹防沙眼衣原體“性騷擾”[J];醫(yī)藥世界;2000年04期

5 吳年浪,張惠成;熒光定量聚合酶鏈反應檢測沙眼衣原體[J];眼科研究;2003年01期

6 陸金春,衛(wèi)紅英,尹興昌;沙眼衣原體與沙眼的研究進展[J];臨床眼科雜志;2003年06期

7 靳穎,王增田,董雪梅;沙眼衣原體的研究進展與優(yōu)生[J];武警醫(yī)學院學報;2004年03期

8 吳尚輝,陳明雄;723例健康體檢者生殖道沙眼衣原體感染的調查[J];實用預防醫(yī)學;2004年03期

9 高省,陳祥生;沙眼衣原體分子流行病學研究進展[J];國外醫(yī)學.皮膚性病學分冊;2004年06期

10 侯淑萍;劉全忠;;關于沙眼衣原體耐藥及耐藥機制的探討(英文)[J];Chinese Journal of Sexually Transmitted Infections;2004年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 江勇;楊麗娜;劉原君;劉全忠;;沙眼衣原體培養(yǎng)過程中耐甲氧西林表皮葡萄球菌污染的防控[A];中華醫(yī)學會第16次全國皮膚性病學術年會摘要集[C];2010年

2 朱慧玲;李紅梅;張勤奮;陳木開;韓建德;;沙眼衣原體持續(xù)感染模型及快速鑒定方法的研究[A];中華醫(yī)學會第十八次全國皮膚性病學術年會論文匯編[C];2012年

3 劉全忠;;沙眼衣原體治療現(xiàn)況和噬菌體的研究進展[A];中華醫(yī)學會第16次全國皮膚性病學術年會摘要集[C];2010年

4 肖萌;劉全忠;;沙眼衣原體免疫優(yōu)勢蛋白的研究進展[A];中華醫(yī)學會第十八次全國皮膚性病學術年會論文匯編[C];2012年

5 劉原君;齊蔓莉;紹麗麗;盛彩虹;姚衛(wèi)鋒;侯淑萍;劉全忠;;沙眼衣原體標準株不同型之間的差異性探討[A];中華醫(yī)學會第十五次全國皮膚性病學術會議論文集[C];2009年

6 劉全忠;江勇;侯淑萍;邵麗麗;楊曉靜;楊麗娜;;遷延難愈沙眼衣原體泌尿生殖系感染的臨床與實驗研究[A];中華醫(yī)學會第十五次全國皮膚性病學術會議論文集[C];2009年

7 楊斌;鄭和平;薛耀華;吳興中;江漢寧;黃進梅;;廣州地區(qū)泌尿生殖道沙眼衣原體基因分型研究[A];2010全國中西醫(yī)結合皮膚性病學術會議論文匯編[C];2010年

8 邵麗麗;江勇;楊麗娜;楊曉靜;劉原君;劉全忠;;299例泌尿生殖道沙眼衣原體的檢測及藥物敏感性分析[A];中華醫(yī)學會第十五次全國皮膚性病學術會議論文集[C];2009年

9 吳伊旋;陸平;沈志鴻;劉怡文;;272例泌尿生殖道感染沙眼衣原體或解脲支原體患者臨床分析[A];2001年中國中西醫(yī)結合皮膚性病學術會議論文匯編[C];2001年

10 劉全中;楊士強;傅志宜;王樹椿;繳穩(wěn)玲;田靜群;;遷延難愈沙眼衣原體泌尿生殖道感染——幾種抗生素的療效評定和隨訪[A];2002中國中西醫(yī)結合皮膚性病學術會議論文匯編[C];2002年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓莉;“沙眼衣原體”也會入侵生殖系統(tǒng)[N];中國人口報;2006年

2 汪濤;孕婦感染沙眼衣原體危害大[N];大眾衛(wèi)生報;2007年

3 柯春榮;沙眼衣原體可導致不孕[N];大眾衛(wèi)生報;2003年

4 鄧啟泰;“沙眼衣原體”個頭小危害大[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2006年

5 韓麗;衣原體還能引起泌尿系感染[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

6 季建業(yè);沙眼也可致性病[N];中國消費者報;2001年

7 凹凸;沙眼衣原體可致不孕[N];大眾衛(wèi)生報;2001年

8 江錦琦;女性感染沙眼衣原體可致不孕[N];中國中醫(yī)藥報;2001年

9 林國瑞;女性濫交易染衣原體[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

10 于泓珍;淋球菌與沙眼衣原體引起的感染[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2007年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓燕;泌尿生殖道沙眼衣原體多位點測序分型研究和新型變種流行現(xiàn)狀研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2016年

2 郭媛麗;衣原體噬菌體PhiCPG1衣殼蛋白Vp1對沙眼衣原體作用機制研究[D];天津醫(yī)科大學;2016年

3 王千秋;泌尿生殖道沙眼衣原體感染的某些血清學和分子生物學研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1997年

4 李建紅;沙眼衣原體高分辨率溶解曲線基因分型方法的建立及其在男男性行為者流行病學調查中的應用[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2010年

5 江勇;沙眼衣原體臨床株體外藥物敏感性與耐藥機制的研究[D];天津醫(yī)科大學;2008年

6 粟玉珍;沙眼衣原體熱休克蛋白60與免疫致病[D];中國醫(yī)科大學;2002年

7 高省;女性高危人群生殖道沙眼衣原體感染的分子流行病學研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2007年

8 王蕊;HaCaT細胞培養(yǎng)沙眼衣原體及體外藥敏試驗的探索[D];天津醫(yī)科大學;2012年

9 白光春;沙眼衣原體重組口服活疫苗的構建及其免疫學特性的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學;1999年

10 李元;沙眼衣原體18KDa粘連蛋白的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學;1995年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鮮雨琦;沙眼衣原體質粒在呼吸道感染中的作用及其機制初步研究[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

2 孫長貴;衣原體噬菌體衣殼蛋白Vp1對豚鼠結膜炎衣原體及沙眼衣原體的作用研究[D];天津醫(yī)科大學;2016年

3 張新美;天津市性活躍人群血清沙眼衣原體免疫優(yōu)勢蛋白抗體的檢測[D];天津醫(yī)科大學;2016年

4 楊曉春;沙眼衣原體Ahpc基因克隆表達及過氧化物酶活性分析[D];南華大學;2015年

5 尤聰;沙眼衣原體培養(yǎng)陽性率提高及臨床株熱休克蛋白60的轉錄隨傳代的變化[D];天津醫(yī)科大學;2012年

6 邵麗麗;沙眼衣原體抗菌素耐藥及治療失敗的評估[D];天津醫(yī)科大學;2010年

7 朱輝;大環(huán)內(nèi)酯類藥物次抑菌濃度誘導沙眼衣原體耐藥的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學;2010年

8 侯淑萍;天津市耐藥沙眼衣原體野生株的細胞學及基因學研究[D];天津醫(yī)科大學;2004年

9 姜慧芬;沙眼衣原體主要外膜蛋白重組質粒的構建、表達和活性鑒定[D];浙江大學;2010年

10 陳偉;沙眼衣原體泌尿生殖道感染遷移性臨床研究[D];天津醫(yī)科大學;2007年

  本文關鍵詞：沙眼衣原體Ahpc基因克隆表達及過氧化物酶活性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：251026