【摘要】：背景：間充質干細胞(mesenchymal stem cells, MSC)是存在于多種組織中的一種具有自我更新和多向分化潛能的多能干細胞。因其具有易于分離擴增、多向分化、造血支持、低免疫原性和免疫調節(jié)等特性,而成為組織工程和再生醫(yī)學中理想的種子細胞。其中人臍帶來源的間充質干細胞(human umbilical cord matrix stem cell, hUC-MSC)具有以下不可比擬的優(yōu)勢：第一,利用胎兒分娩后的廢棄物,組織來源廣泛,無倫理學限制；第二,相比骨髓間充質干細胞具有更強的增殖能力,易于長期培養(yǎng),經體外擴增可獲得豐富的細胞；第三,具有成體干細胞和胚胎干細胞(embryonic stem cell,ESC)的雙重表面標記；第四,連續(xù)多次傳代后仍然維持干細胞特性。因此,人臍帶間充質干細胞作為細胞治療中一種非常有希望的干細胞替代來源,具有無限的潛力和廣泛的臨床應用前景,而其免疫學特性正是細胞治療成功與否的決定性因素。人臍帶間充質干細胞可以抑制T淋巴細胞、B淋巴細胞和樹突狀細胞的增殖及因子分泌,并且在臨床上可以減輕移植后移植物抗宿主病(graft versus host disease, GVHD)的發(fā)生程度[2-4]。關于人臍帶間充質干細胞的免疫調節(jié)機制目前還不明了。但研究顯示,間充質干細胞本身并不具有或具有很低的免疫抑制能力,在受到激活的淋巴細胞或其分泌的炎性因子刺激后間充質干細胞才具有較強的免疫調節(jié)能力。干擾素γ(interferon γ,IFN-γ)炎性因子中重要的一員。它是活化T淋巴細胞和NK細胞分泌的一種主要促炎因子。另外,IFN-γ在臨床上被用來抗病毒,抗腫瘤,調節(jié)免疫反應等。因此,深入了解IFN-γ對人臍帶間充質干細胞的影響,顯得尤為重要。本研究旨在探討IFN-γ刺激后人臍帶間充質干細胞的生物學特性的變化及免疫調節(jié)能力的變化,為臍帶間充質干細胞應用于治療免疫相關疾病及IFN-γ聯合臍帶間充質干細胞應用于臨床治療提供理論和實驗依據。 目的：本文旨在探討IFN-γ對人臍帶間充質干細胞的生物學功能的影響,為人臍帶間充質干細胞的臨床應用提供必要的理論基礎。 方法：(1)應用流式細胞技術檢測IFN-γ刺激前后人臍帶間充質干細胞的免疫表型以及胚胎干細胞的全能標志物。(2)在誘導體系中,定向誘導人臍帶間充質干細胞向脂肪細胞、成骨細胞分化,用油紅○染色、Von Kossa染色觀測脂滴形成、鈣鹽沉積情況以鑒定人臍帶間充質干細胞的多向分化潛能。(3)應用CCK-8試劑盒檢測干擾素丫刺激前后人臍帶間充質干細胞的增殖潛能。(4)體外建立人臍帶間充質干細胞和人外周血單個核細胞的共培養(yǎng)體系。利用ELISA方法(Brdu摻入試驗)檢測人外周血單個核細胞的增殖情況,從而反映人臍帶間充質干細胞對活化后的人外周血單個核細胞的免疫抑制作用。(5)利用酶聯免疫吸附試驗試劑盒檢測干擾素γ刺激前后人臍帶間充質干細胞的PGE-2的分泌量。(6)應用實時定量PCR方法檢測干擾素γ刺激前后人臍帶間充質干細胞中COX-2、IDO-1以及IDO-2的表達。 結果：(1)人臍帶間充質干細胞表面表達一般干細胞的標志。與對照組相比,干擾素γ刺激組人臍帶間充質干細胞表面SSEA-4表達下降(IFN-γ刺激組：8.15±2.94%,control組：16.42±8.5%；p0.05),CD54表達升高(IFN-γ刺激組：96.64±3.29%,control組：84.12±10.73%；p=0.051)。(2)在特定的誘導條件下,人臍帶間充質干細胞具有向脂肪細胞和骨細胞分化的能力。與control組相比,IFN-γ刺激組人臍帶間充質干細胞成脂誘導后脂滴形成減少,成骨誘導后兩組鏡下觀鈣沉積未見有明顯差異。(3)IFN-γ刺激組和control組人臍帶間充質干細胞增殖能力無明顯差異。(4)人臍帶間充質干細胞與人外周血單個核細胞共培養(yǎng)時,具有抑制單個核細胞增殖的能力,且與control組相比,IFN-γ刺激后的人臍帶間充質干細胞具有更強的抑制外周血單個核細胞增殖的能力(p0.05)。當IFN-γ濃度為10ng/ml時即對人臍帶間充質干細胞有明顯的免疫激活作用,且IFN-γ22的免疫激活作用具有濃度依賴性。(5) IFN-γ10ng/ml刺激48小時后,人臍帶間充質干細胞分泌PGE-2增多(p0.01)。(6) IFN-γ10ng/ml刺激24小時后,IFN-γ刺激組與control組相比,人臍帶間充質干細胞COX-2表達水平無明顯的統計學差異,但具有表達升高的趨勢,IDO-1表達水平明顯升高(p0.01),IDO-2的表達水平無差異。 結論：IFN-γ刺激影響人臍帶間充質干細胞表面SSEA-4和CD54的表達,并通過上調IDO-1的表達水平來增強人臍帶間充質干細胞的免疫調節(jié)功能。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：北京協和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R329

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王景昌,白海,吳濤,路繼紅,歐劍峰;造血干細胞移植預處理對人骨髓間充質干細胞的影響及機制研究[J];西北國防醫(yī)學雜志;2005年04期

2 馮立新,許倩,王棟,肖桂芝;兔骨髓間充質干細胞的分離方法[J];承德醫(yī)學院學報;2005年03期

3 陸曉茜;劉霆;;骨髓間充質干細胞的生物學特性及其臨床應用[J];四川醫(yī)學;2005年12期

4 甘鳳英;葉德富;;間充質干細胞向軟骨方向分化的研究[J];醫(yī)學綜述;2006年11期

5 李府;馬麗霞;張樂玲;鄭立波;陳穎杰;吳鎮(zhèn);王世富;;細胞因子聯合紋狀體條件培養(yǎng)液定向誘導間充質干細胞體外分化為多巴胺能神經元的研究(英文)[J];實用兒科臨床雜志;2009年24期

6 譚艷芳;殷小成;熊玉娟;王艷;;黃芪甲甙對骨髓間充質干細胞分泌干細胞因子的影響[J];中國當代兒科雜志;2010年04期

7 林滬;陳黎明;王福生;;間充質干細胞在肝臟的分化機制研究進展[J];實用肝臟病雜志;2010年03期

8 卓本慧,李廷玉;間充質干細胞與神經細胞移植[J];國外醫(yī)學.腦血管疾病分冊;2002年04期

9 郭希民 ,王常勇 ,王永紅 ,段翠密 ,趙強 ,孫大銘;人骨髓間充質干細胞分離培養(yǎng)及向軟骨細胞定向分化的實驗研究[J];中華口腔醫(yī)學雜志;2003年01期

10 楊自權,衛(wèi)小春,郝一勇,焦強,丁娟,李鵬翠,陳崇偉;兔骨髓間充質干細胞的分離培養(yǎng)及其生物學性狀的研究[J];中國骨傷;2004年05期

相關會議論文 前10條

1 王巧稚;韓藝;趙宏賢;余鴻;劉廣益;;當歸誘導人脂肪間充質干細胞向神經細胞分化和毒性檢測的研究[A];中國解剖學會第十一屆全國組織學與胚胎學青年學術研討會論文匯編[C];2009年

2 王玉紅;陳光輝;;地黃低聚糖對人脂肪組織源性間充質干細胞分泌肝細胞生長因子的影響[A];2010全國中西醫(yī)結合危重病、急救醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2010年

3 杜鳳移;王皓;楊樹龍;趙繪存;楊英;楊軍;;納米纖維支架對大鼠間充質干細胞向肝細胞分化的影響[A];天津市生物醫(yī)學工程學會第29屆學術年會暨首屆生物醫(yī)學工程前沿科學研討會論文集[C];2009年

4 郭勇;張西正;郭春;魏嚴;李瑞欣;徐曉瑩;張永紅;;脂肪間充質干細胞向心肌細胞分化中心肌發(fā)育相關基因的表達[A];天津市生物醫(yī)學工程學會2008年年會暨首屆生物醫(yī)學工程與臨床論壇論文集[C];2008年

5 朱恒;江小霞;劉元林;張毅;毛寧;;間充質干細胞選擇性調節(jié)破骨細胞發(fā)育和功能[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

6 張顥;陶艷玲;邱林;張伯龍;馬軍;陳志哲;劉擁軍;韓忠朝;;一種具有免疫負調節(jié)功能的人臍帶源間充質干細胞[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

7 楊少光;池穎;戎麗娟;邢文;盧士紅;趙欽軍;馬鳳霞;韓忠朝;;不同來源間充質干細胞誘導分化成血管內皮細胞的比較[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

8 李杰平;孔佩艷;李佳麗;朱麗丹;孔祥敬;曾東風;劉紅;王慶余;彭賢貴;陳幸華;張曦;;純化的自體CD34+細胞聯合間充質干細胞治療難治性克隆恩病一例并文獻復習[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

9 羅高興;程文廣;黃正根;賀偉峰;袁順宗;陳希煒;吳軍;;應用人臍帶血間充質干細胞修復小鼠皮膚缺損創(chuàng)面的實驗研究[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會論文匯編[C];2009年

10 郭振興;鄭翠玲;陳振萍;董文川;楊仁池;;胚胎骨髓來源的間充質干細胞對人Th17細胞免疫調節(jié)作用的研究[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

相關重要報紙文章 前10條

1 王秋月　王琳;空軍總醫(yī)院采用間充質干細胞救治小腦萎縮[N];科技日報;2009年

2 記者 李素鋒;我市首例間充質干細胞移植手術取得成功[N];臨汾日報;2009年

3 記者 王丹　通訊員 艾素;異染性腦白質營養(yǎng)不良治療獲突破[N];健康報;2010年

4 記者 白毅;間充質干細胞可促進成熟樹突狀細胞增殖分化[N];中國醫(yī)藥報;2009年

5 張泓;生物醫(yī)藥,2008新突破[N];北方經濟時報;2008年

6 徐機玲;姜躍進;我國骨髓干細胞移植技術獲突破[N];中國醫(yī)藥報;2003年

7 時報記者 楊曉帆;韓忠朝:中國干細胞研究領軍者[N];濱海時報;2010年

8 本報記者 楊陽騰;北科生物：讓干細胞創(chuàng)造醫(yī)學奇跡[N];經濟日報;2011年

9 張獻懷 王志紅;抗排異反應有了新辦法[N];保健時報;2009年

10 徐機玲 姜躍進;骨髓干細胞移植我國實現新突破[N];新華每日電訊;2003年

相關博士學位論文 前10條

1 彭飛;620nm非相干紅光對大鼠骨髓間充質干細胞的光生物調節(jié)作用[D];華中科技大學;2011年

2 于美嬌;系統歸巢的間充質干細胞在牙周組織修復再生過程中的作用研究[D];山東大學;2011年

3 李東杰;人臍帶間充質干細胞促進創(chuàng)面愈合及體外誘導分化為表皮樣細胞的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2011年

4 李寶軍;脂肪間充質干細胞體外誘導及復合PLGA體內異位成軟骨的實驗研究[D];中南大學;2007年

5 朱雅姝;Flk-1~+間充質干細胞對腫瘤細胞增殖的抑制作用及其分子機制研究[D];中國協和醫(yī)科大學;2008年

6 吳桂珠;脂肪間充質干細胞治療壓力性尿失禁的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2010年

7 熊卉;轉化生長因子β1基因體外轉染兔顳下頜關節(jié)滑膜間充質干細胞向纖維軟骨轉化實驗研究[D];武漢大學;2010年

8 苗宗寧;胎盤間充質干細胞與絲素蛋白/羥基磷灰石材料在骨創(chuàng)傷修復中的實驗研究[D];蘇州大學;2010年

9 梁偉;人骨髓Flk-1~+間充質干細胞抗DNA損傷物質影響作用研究[D];中國協和醫(yī)科大學;2008年

10 趙迎澤;BMP9通過MAPKs通路調控間充質干細胞成骨分化及其機制的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

相關碩士學位論文 前10條

1 章守琴;人羊膜間充質干細胞支持造血的體外研究[D];昆明醫(yī)學院;2010年

2 陳芳;臍帶間充質干細胞修復化療所致卵巢顆粒細胞損傷的體外實驗[D];暨南大學;2010年

3 張茜真;人臍帶間充質干細胞的分離、鑒定以及干細胞特異性轉錄因子誘導其重編程的研究[D];浙江理工大學;2010年

4 陳義;臍帶間充質干細胞培養(yǎng)及體外重建角膜后板層的初步研究[D];暨南大學;2010年

5 唐子濱;納米級膠原基骨材料復合自體脂肪間充質干細胞用于兔后外側脊柱融合的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2010年

6 齊凱;人臍帶來源間充質干細胞分離培養(yǎng)方法的優(yōu)化初探[D];山西醫(yī)科大學;2011年

7 馬蘭蘭;不同胎齡人臍帶血間充質干細胞的研究[D];中國醫(yī)科大學;2010年

8 李成華;口腔黏膜間充質干細胞存在及在口腔扁平苔蘚中變化的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

9 田毅;人臍帶Wharton's jelly間充質干細胞的生物學特性以及其與腦腫瘤干細胞共培養(yǎng)的實驗研究[D];鄭州大學;2010年

10 張福麗;間充質干細胞治療肺動脈高壓研究進展（附肺動脈高壓發(fā)病機制進展）[D];山西醫(yī)科大學;2011年

，

本文編號：2489665