【摘要】：背景 博爾納病病毒（Borna disease virus，BDV）是單股負(fù)鏈非節(jié)段性有包膜的RNA病毒，有高度嗜神經(jīng)性，BDV感染后在細(xì)胞內(nèi)呈低拷貝復(fù)制，呈慢性持續(xù)感染狀態(tài)，使細(xì)胞產(chǎn)生非溶解性病變，引起宿主細(xì)胞凋亡及細(xì)胞功能改變。該病毒宿主廣泛，能感染所有的溫血動物，引起博爾納病。近年來大量流行病學(xué)研究提示BDV同人神經(jīng)精神疾病的發(fā)生和發(fā)展存在著密切的關(guān)系。BDV致病機(jī)制尚不明確，目前有多種假說，主要包括免疫反應(yīng)，神經(jīng)遞質(zhì)，神經(jīng)可塑性，神經(jīng)營養(yǎng)因子及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等。對BDV感染后宿主代謝的改變更是知之甚少。PlentikovMV等人的研究顯示BDV感染大鼠后會引起去甲腎上腺素、多巴胺、五羥色胺、5-羥基吲哚乙酸和3,4-二羥乙酸等多種代謝產(chǎn)物的變化，可以推測在病毒感染過程中存在著細(xì)胞代謝異常，明確這些代謝物的具體變化，對于闡明BDV的慢性持續(xù)感染機(jī)制有重要意義。 目的 獲得BDV感染OL細(xì)胞的廣譜代謝物，比較BDV感染與正常OL細(xì)胞之間代謝產(chǎn)物的變化，闡明BDV感染的某些生化機(jī)制，并闡釋造成代謝產(chǎn)物變化的病理生理機(jī)制，最終為BDV致病提供證據(jù)支持。 方法 從BDV持續(xù)感染細(xì)胞中提取BDV病毒液，用所得病毒液重新感染OL細(xì)胞，通過RT-PCR,免疫熒光和WB確定感染成功。生長狀態(tài)良好的OL細(xì)胞傳代培養(yǎng)至28板后分為2組每組14板，，一組用于BDV病毒感染，另外一組作為對照組。在BDV感染第14天分別提取兩組細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)物進(jìn)行核磁共振（1H nuclear magnetic resonance，1H NMR）檢測，數(shù)據(jù)用偏最小二乘判別分析（PLS-DA）處理。 結(jié)果 從病毒感染細(xì)胞中成功提取到了具有感染能力的BDV病毒，并成功地用該病毒重新感染OL細(xì)胞。對BDV感染組和對照組組各14例樣本進(jìn)行1H NMR分析，定量化分析了21種代謝產(chǎn)物，結(jié)果顯示兩組樣本間存在明顯差異，BDV感染組的丙酮酸鹽濃聚物水平顯著低于對照組（p＝0），谷氨酸、谷氨酰胺和天冬氨酸水平明顯高于對照組（p＝0）。 結(jié)論 1H NMR分析是一種簡便實用，成本較低的代謝組學(xué)分析方法，適合用于病毒感染致病機(jī)制研究。實驗結(jié)果顯示BDV感染主要影響氨基酸代謝、脂類代謝和糖酵解途徑。病毒感染后細(xì)胞代謝產(chǎn)物中谷氨酸鹽顯著增加，或許可以解釋BDV感染宿主所引起的精神行為癥狀。
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R373.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 徐鳴明;張英英;展群嶺;何豐;張亮;金戈;宋哲;李亞軍;李雷雷;謝鵬;;博爾納病毒P24轉(zhuǎn)染后不同時期核酸和蛋白的表達(dá)及細(xì)胞定位[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2010年06期

2 鄧婧;李丹;張亮;黃榮忠;李文娟;馬麗華;房亮;謝鵬;;博爾納病病毒對人少突膠質(zhì)細(xì)胞增殖與凋亡的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2012年05期

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4 徐e

本文編號：2489082