【摘要】：脂肪酸不僅僅是人體的能量來源,同時(shí)也參加一系列的生理活動(dòng),比如免疫反應(yīng)和胰島素分泌。2003年,三個(gè)獨(dú)立的研究小組發(fā)現(xiàn)一系列的中長鏈脂肪酸能夠激活孤兒G蛋白偶聯(lián)受體GPR40。緊接著GPR40被命名為游離脂肪酸受體1 (FFAR1). GPR40僅在高濃度葡萄糖的存在下能夠促進(jìn)胰島β細(xì)胞葡糖依賴性的胰島素分泌,從而降低了低血糖的風(fēng)險(xiǎn),因此成為非常重要的治療2型糖尿病的靶標(biāo)。了解調(diào)控GPR40的信號(hào)通路為GPR40生理功能的闡述及糖尿病的藥物設(shè)計(jì)提供理論的基礎(chǔ)。因此我們的研究著力于研究GPR40受體激活后內(nèi)吞的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。我們構(gòu)建了融合GFP的表達(dá)載體,并篩選得到穩(wěn)定表達(dá)GPR40-EGFP受體的單克隆HEK293穩(wěn)定細(xì)胞株。熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),GPR40-EGFP主要分布在細(xì)胞膜上,也有很大部分位于胞內(nèi)。在配體100μM LA的刺激下,受體分布發(fā)生改變,集中到細(xì)胞核周圍,成點(diǎn)狀聚集分布。后期研究發(fā)現(xiàn)GPR40的內(nèi)吞主要通過clathrin依賴型的途徑并受arrestin-3的調(diào)控。有趣的是,我們發(fā)現(xiàn)GPR40受體的本底細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平很高,而clathrin和arrestin-3的knockdown并不影響GPR40受體的本底性內(nèi)吞,暗示GPR40受體配體依賴性和不依賴性的內(nèi)吞機(jī)制并不相同。 所有的G蛋白偶聯(lián)受體都能夠促進(jìn)MAPK的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng),參與調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡。促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAP激酶,MAPK)鏈?zhǔn)钦婧松镄盘?hào)傳遞網(wǎng)絡(luò)中的重要途徑之一,其中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein, ERK)為MAPK家族重要成員。ERK1/2信號(hào)途徑對(duì)細(xì)胞的分裂、遷移和細(xì)胞凋亡等起到調(diào)控作用,如GLP-1受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)能夠通過ERK1/2途徑抑制胰島β細(xì)胞的凋亡。糖尿病產(chǎn)生的重要原因之一是胰島素β細(xì)胞的損傷,因此,研究GPR40如何調(diào)控ERK1/2途徑以及ERK1/2途徑是否參與胰島β細(xì)胞的增殖和凋亡過程具有重要的生理意義。第三章的實(shí)驗(yàn)研究中,我們著力于解決GPR40介導(dǎo)的ERK1/2磷酸化。通過利用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GPR40受體的HEK293細(xì)胞和內(nèi)源性表達(dá)的β-TC-6細(xì)胞,我們發(fā)現(xiàn)在HEK細(xì)胞中,LA能夠通過Ca2+/ PKC和Gi途徑激活ERK1/2�？紤]到脂肪酸受體的同源性,我們的研究也會(huì)給脂肪酸受體家族的其他受體提供參考和依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2489014