發(fā)布時間：2019-05-24 16:07

【摘要】：目的 觀察不同濃度糖皮質(zhì)激素刺激下，骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone mesenchymalstem cells，，BMSCs)中DKK1基因表達的變化，及其對BMSCs增殖及分化能力的影響。 方法 1、取年青患者的骨髓間充質(zhì)干細胞通過貼壁法進行體外培養(yǎng)及純化。通過流式細胞技術(shù)檢測BMSCs表面分子、成骨誘導(dǎo)、成脂誘導(dǎo)及克隆形成實驗鑒定BMSCs。 2、分別用含0M、10-8M、10-6M Dex的培養(yǎng)液刺激BMSCs,通過Real-timePCR檢測DKK1基因的表達量；并通過克隆形成實驗檢測其對BMSCs增殖能力的影響。 3、分別用含0M、10-8M、10-6M Dex的成骨及成脂誘導(dǎo)液刺激BMSCs，于3天后提取RNA,通過Real-time PCR檢測DKK1基因、成骨基因（Runx2、OCN）及成脂基因（C/EBP、PPARγ）的表達量；并于3周后通過茜素紅染色及油紅O染色檢測其對成骨、成脂分化能力的影響。 結(jié)果 1、本實驗通過貼壁細胞分離法得到的細胞狀態(tài)良好，具有強的增殖能力及成骨、成脂分化潛能，表面分子標(biāo)志CD29、CD90、CD105陽性率較高，CD14、CD34表達陰性率也較高。 2、不同濃度糖皮質(zhì)激素刺激下，BMSCs的增殖能力與DKK1基因表達量呈負相關(guān)。高濃度糖皮質(zhì)激素刺激下DKK1基因表達最高，而對應(yīng)的克隆形成能力最低。 3、不同濃度糖皮質(zhì)激素刺激下，BMSCs的成骨、成脂能力呈相反關(guān)系并與DKK1的表達量相關(guān)。成骨誘導(dǎo)環(huán)境下Dex8組Runx2、OCN的表達最高而DKK1的表達最低，茜素紅染色只有Dex8組出現(xiàn)鈣化結(jié)節(jié)。成脂誘導(dǎo)環(huán)境下Dex6組C/EBP、PPARγ的表達最高而DKK1表達也最高，油紅O染色Dex6組出現(xiàn)大量的脂滴。 結(jié)論 1、高濃度糖皮質(zhì)激素刺激下，DKK1的表達上調(diào),抑制BMSCs的增殖。 2、DKK1對BMSCs的骨向分化具有抑制作用，而對其脂向分化具有促進作用。 3、糖皮質(zhì)激素導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的原因可能是由于糖皮質(zhì)激素調(diào)控DKK1基因的表達，影響B(tài)MSCs的增殖與分化引起的。
[Abstract]:Objective to observe the changes of DKK1 gene expression in bone marrow mesenchymal stem cells (Bone mesenchymalstem cells,BMSCs) stimulated by different concentrations of glucocorticoids and its effect on the proliferation and differentiation of BMSCs. Methods 1. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) from young patients were cultured and purified in vitro by adherent method. Identification of BMSCs surface molecules, osteogenic induction, adipogenic induction and clone formation by flow cytometry 2. The expression of DKK1 gene was detected by Real-timePCR in the culture medium containing 0m, 10 鈮

本文編號：2484995