【摘要】：肺纖維化(pulmonary fibrosis, PF)是由多種原因引起的彌漫性肺部炎性疾病。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)：近年來(lái)，肺纖維化的發(fā)病率、死亡率不斷上升，而且隨著年齡的增長(zhǎng)，其發(fā)病率和死亡率也逐漸升高。研究發(fā)現(xiàn)，PF發(fā)病機(jī)制可能涉及氧化應(yīng)激導(dǎo)致肺上皮損傷、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及隨后細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)平衡被打破，最終導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)重塑和膠原的大量堆積。但目前肺纖維化確切的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，沒(méi)有令人滿(mǎn)意的治療方法。深入探討肺纖維化發(fā)病機(jī)理和尋找行之有效的治療藥物仍是目前醫(yī)學(xué)界迫切需要解決的問(wèn)題。 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic reticulum stress, ERS)是近年來(lái)人們認(rèn)識(shí)到的除線(xiàn)粒體凋亡通路和死亡受體通路兩大經(jīng)典細(xì)胞凋亡途徑之外的又一重要細(xì)胞凋亡途徑。研究發(fā)現(xiàn)，由它引起的細(xì)胞凋亡在心血管、神經(jīng)、肝臟等疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，但肺纖維化是否存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在肺纖維化中的作用，僅有較少文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)建立平陽(yáng)霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化模型以及體外采用毒胡蘿卜素(Thapsigargin, TG)誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞凋亡的方法，在體與離體觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志性蛋白：葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白(glucose regulatedprotein, GRP)和CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancerbinding proteinhomologous protein, CHOP/GADD153)表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，初步探討ERS在肺纖維化中的作用。主要研究?jī)?nèi)容概括如下： 1.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白在平陽(yáng)霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化模型中的動(dòng)態(tài)變化 目的：觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白在平陽(yáng)霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維模型中的動(dòng)態(tài)變化。方法：將48只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分成正常組(C組)和模型組(M組)，每組24只。M組氣管內(nèi)一次性滴注鹽酸平陽(yáng)霉素(5mg/Kg)，C組則滴注等量0.9%生理鹽水，進(jìn)行造模。兩組動(dòng)物均于造模后的第7天、第14天和第28天分別隨機(jī)處死8只，各組取動(dòng)物肺組織行病理切片，采用蘇木精-伊紅染色(HE染色)、Masson三聯(lián)染色和原位末端標(biāo)記(TUNEL)法觀察肺組織病理形態(tài)和細(xì)胞凋亡情況，并評(píng)價(jià)成模效果。采用RT-PCR、Western blot檢測(cè)組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)志性蛋白：葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白(glucose regulated protein78, GRP78)、CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP/GADD153)的表達(dá)變化。結(jié)果及結(jié)論：HE染色和Masson染色結(jié)果表明平陽(yáng)霉素成功誘導(dǎo)了大鼠的肺纖維化，TUNEL法發(fā)現(xiàn)，與正常組比較，模型組細(xì)胞凋亡較多，，且隨時(shí)間延長(zhǎng)而增多，28天時(shí)尤為明顯。RT-PCR、Western blot結(jié)果顯示：模型組中GRP78、CHOP均有表達(dá)，并高于正常組。以上結(jié)果提示在平陽(yáng)霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化過(guò)程中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達(dá)發(fā)生了變化表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能參與了平陽(yáng)霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化過(guò)程。 2.毒胡蘿卜素對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞凋亡影響的初步探討 目的：研究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic reticulum stress, ERS)標(biāo)識(shí)物葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白(glucose regulated protein, GRP)和CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP/GADD153)在人胚肺成纖維細(xì)胞凋亡過(guò)程中的表達(dá)變化，初步探討毒胡蘿卜素對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞凋亡的作用及部分機(jī)制。方法：體外用毒胡蘿卜素(Thapsigargin, TG)誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5)后，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡變化，RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中GRP78,CHOP mRNA的表達(dá)變化，Western blot檢測(cè)GRP, CHOP及Caspase-3蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果及結(jié)論：MRC-5細(xì)胞經(jīng)毒胡蘿卜素TG(4μmol/L)作用24小時(shí)后，熒光顯微鏡觀察到細(xì)胞呈典型的凋亡形態(tài)變化，早期凋亡細(xì)胞核染色質(zhì)呈固縮狀、圓珠狀或斑塊狀；晚期凋亡細(xì)胞核染色質(zhì)呈固縮狀或斑塊狀。細(xì)胞經(jīng)1、2、4、8、10μmol· L~(-1)TG作用24h后，凋亡率分別為4.39%,6.66%,13.08%,22.58%,55.34%高于正常組，TG組中GRP, CHOP表達(dá)均高于對(duì)照組；同時(shí)不同刺激組中Caspase-3的表達(dá)高于對(duì)照組，提示毒胡蘿卜素可誘導(dǎo)了人胚肺成纖維細(xì)胞發(fā)生凋亡，該凋亡可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R363

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4 楊s

本文編號(hào)：2476567