【摘要】：制備嵌合HCV多中和表位及HCV包膜蛋白E2的HBV S抗原病毒樣顆粒(virus-like particle,VLP),并進(jìn)行鑒定、純化和濃縮。HEK293T細(xì)胞用DMEM培養(yǎng)至90%密度時(shí),將構(gòu)建的重組真核表達(dá)載體pCI-MEpS、pCI-E2S用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,48h后在培養(yǎng)上清中得到自我裝配的嵌合HCV多中和表位及包膜蛋白E2的HBV病毒樣顆粒(VLP-MEpS,VLP-M2S)。蔗糖密度梯度離心,透析濃縮后,電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行HBsAg定量測(cè)定、電鏡分析和Western blotting鑒定。制備出的嵌合病毒樣顆粒VLP-MEpS和VLP-E2S經(jīng)濃縮后其HBsAg定量最高達(dá)到3×10~4 ng/mL。實(shí)驗(yàn)表明我們成功制備出嵌合有HCV多中和抗原表位的HBV VLP,為進(jìn)一步分析誘導(dǎo)的中和抗體研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:HBV S antigen virus like particles (virus-like particle,VLP) of chimeric HCV neutralizing epitopes and HCV envelope protein E2 were prepared and identified, purified and concentrated. HEK293T cells were cultured to 90% density by DMEM. The constructed recombinant eukaryotic expression vector pCI-MEpS,pCI-E2S was transfected into HEK293T cells by lipid method. 48 hours later, the self-assembled chimeric HCV polyneutralizing epitopes and envelope protein E2 HBV virus-like particles (VLP-MEpS,VLP-M2S) were obtained in the culture medium. After sucrose density gradient centrifugation, dialysis and concentration, HBsAg quantitative determination, electron microscopic analysis and Western blotting identification were carried out by electrochemiluminescence method. The maximum HBsAg quantity of chimeric virus-like particles VLP-MEpS and VLP-E2S was up to 3 脳 10 脳 4 ng/mL. after concentration. The results showed that we successfully prepared HBV VLP, with multiple neutralizing epitopes of HCV, which laid a foundation for further analysis of induced neutralizing antibodies.
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)科 第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部微生物學(xué)教研室
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81072500;31370924)
【分類號(hào)】：R373.21

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2476471