【摘要】：第一部分激光捕獲顯微切割技術(shù)診斷石蠟切片中早期胚胎成份與親權(quán)關(guān)系的研究 目的：法醫(yī)生物物證的發(fā)現(xiàn)和提取是犯罪現(xiàn)場勘驗中非常重要的一項任務(wù)，而實驗室檢驗過程中混合檢材的分離處理以及微量物證的檢出也是十分關(guān)鍵的技術(shù)問題。本研究正是為解決實際檢案中這樣一些困難，以獲取一種新的技術(shù)方法為目的，從而為擴大犯罪現(xiàn)場檢材的檢測范圍、充分挖掘各類案件檢材的證據(jù)價值發(fā)揮重要作用。如在法庭科學(xué)實驗室解決性侵犯案件和親子鑒定案件中，經(jīng)常會遇到早期胚胎流產(chǎn)的情況，在被害人懷孕3個月內(nèi)進行流產(chǎn)手術(shù)，母體成份與胎兒成份難以有效分離，微量的母親成份會導(dǎo)致混合譜帶或分型失敗，此類樣品是性侵犯案件或懷孕婦女自殺案件中經(jīng)常遇到的檢材，往往只能給出模糊結(jié)論，不能成為直接認定的證據(jù)，這樣就不能充分發(fā)揮生物檢材的證據(jù)價值。本研究針對法醫(yī)物證鑒定和親子關(guān)系確認中，對早期流產(chǎn)組織中母體與胚胎成份混合導(dǎo)致的母體與胚胎混合分型困難的問題，通過激光捕獲顯微切割技術(shù)捕獲石蠟切片中胚胎絨毛細胞,進行低體積擴增，實現(xiàn)胚胎個體分型,證實親子關(guān)系。 方法：新鮮流產(chǎn)組織通過福爾馬林固定、石蠟包埋制成石蠟切片通過激光捕獲顯微切割技術(shù)捕獲石蠟切片上胚胎絨毛細胞，設(shè)置 20,30,40個細胞數(shù)目組。將捕獲的不同數(shù)目絨毛細胞，PK蛋白酶裂解，利用低體積擴增儀進行1.5μL體系PCR擴增，通過3130遺傳分析儀得出胚胎個體分型圖譜，，并比較各細胞數(shù)目組胚胎個體識別的檢出率、等位基因丟失率和非特異性擴增情況，最后進行實際案例應(yīng)用。 結(jié)果：最少捕獲石蠟切片上20個胚胎絨毛細胞即可獲得胚胎個體分型。40個細胞數(shù)目組的胚胎個體分型檢出率高，等位基因丟失率和 非特異性擴增率低。20個細胞數(shù)目組的胚胎個體分型檢出率低，等位基因丟失率和非特異性擴增率高。 結(jié)論：激光捕獲顯微切割技術(shù)結(jié)合低體積擴增技術(shù)可應(yīng)用于石蠟 切片，實現(xiàn)胚胎與母體成份的精確分離并確證親權(quán)關(guān)系。 第二部分應(yīng)用LCM技術(shù)對早期流產(chǎn)組織冰凍切片中胚胎成份的分離檢驗 目的：冰凍切片、石蠟切片皆可用于激光捕獲顯微切割技術(shù)，但石蠟組織切片因前期的處理可能使核酸的結(jié)構(gòu)受到一些破壞，通過捕獲較少的細胞通常難以獲得大片段等位基因，而冰凍組織切片能夠較好的保存核酸的完整性。本研究旨在通過激光捕獲顯微切割技術(shù)結(jié)合低體積擴增技術(shù)捕獲冰凍切片上較少的絨毛細胞來實現(xiàn)胚胎與母體成份的精確分離并確證親權(quán)關(guān)系，從而尋找一種新的技術(shù)方法。 方法：制備早期流產(chǎn)組織冰凍切片，通過激光捕獲顯微切割技術(shù)捕獲胚胎絨毛細胞，設(shè)置10,20,30個細胞數(shù)目梯度。將捕獲的不同數(shù)目絨毛細胞，PK蛋白酶裂解，利用低體積擴增儀進行1.5μL體系PCR擴增，通過3130遺傳分析儀得出胚胎個體分型圖譜，并比較各細胞數(shù)目組胚胎個體識別的檢出率、等位基因丟失率和非特異性擴增情況，最后進行模擬案例檢驗。 結(jié)果：最少捕獲10個胚胎絨毛細胞即可獲得完整的胚胎STR-DNA分型。冰凍切片捕獲30個細胞數(shù)目組的胚胎分型檢出率高，等位基因丟失率和非特異性擴增率低，捕獲10個細胞數(shù)目組的胚胎分型檢出率低，等位基因丟失率和非特異性擴增率高。 結(jié)論：激光捕獲顯微切割技術(shù)聯(lián)用低體積擴增技術(shù)可應(yīng)用于胚胎與母體成分DNA的精確分離和檢驗，最少捕獲10個胚胎絨毛細胞即可獲得完整的胚胎STR-DNA分型，確證親權(quán)關(guān)系。
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R321

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號：2465935