【摘要】：樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendritic cells，DCs）是目前已知機(jī)體功能最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞（antigen presenting cells，APC），DCs的功能及免疫效應(yīng)的發(fā)揮與其成熟狀態(tài)密切相關(guān)。尋找DCs分化發(fā)育的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子是免疫學(xué)領(lǐng)域的熱門(mén)課題。目前得到公認(rèn)的在免疫細(xì)胞分化發(fā)育中具有重要作用的轉(zhuǎn)錄因子是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的標(biāo)志性分子Foxp3，它是叉頭盒（Forkhead box，F(xiàn)ox）家族的成員，通過(guò)直接調(diào)控多種基因的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)Treg的活性，該基因突變能引起嚴(yán)重的自身免疫性疾病。本室在前期研究中曾通過(guò)測(cè)序分析了DCs表達(dá)的各種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，其中，DCs表達(dá)的叉頭盒家族的另一個(gè)成員Foxp1引起了我們的關(guān)注。已知Foxp1能參與了抗原提呈細(xì)胞B細(xì)胞、單核細(xì)胞的分化和巨噬細(xì)胞功能的發(fā)揮。單核細(xì)胞分化至巨噬細(xì)胞過(guò)程中伴有Foxp1的表達(dá)下調(diào)，而DCs與巨噬細(xì)胞擁有共同的前體，我們的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示DCs分化成熟過(guò)程中Foxp1的表達(dá)增強(qiáng)，因此，我們推測(cè)DCs的分化發(fā)育可能也與Foxp1有一定關(guān)系。 首先，，本課題通過(guò)蛋白質(zhì)印跡技術(shù)觀察到隨著小鼠骨髓來(lái)源的DCs分化成熟，F(xiàn)oxp1蛋白的表達(dá)量逐漸增加，這提示Foxp1可能在DCs的分化發(fā)育過(guò)程中具有一定的調(diào)節(jié)作用。而阻斷Foxp1在DCs中的表達(dá)有助于深入分析其在DCs分化發(fā)育中的功能，因此本課題合成了3對(duì)針對(duì)Foxp1的干擾小RNA，轉(zhuǎn)染小鼠成纖維細(xì)胞MEFs，在蛋白水平檢測(cè)干擾效率，發(fā)現(xiàn)一對(duì)干擾效率較高的小RNA分子，遂以該片段構(gòu)建重組干擾腺病毒和干擾慢病毒。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示干擾腺病毒有較高的感染效率，并能有效干擾Foxp1的表達(dá)，而干擾慢病毒的效果不佳，因此我們用干擾腺病毒進(jìn)行后續(xù)研究。考慮到腺病毒本身對(duì)DCs的成熟具有促進(jìn)作用，因此我們使用不帶有干擾片段的空載腺病毒Ad-ctrl作為陰性對(duì)照，將重組干擾腺病毒Ad-simFoxp1高效轉(zhuǎn)入未成熟DCs以觀察阻斷Foxp1對(duì)DCs分化發(fā)育及功能的影響。結(jié)果表明阻斷Foxp1表達(dá)的DCs其共刺激分子CD80、CD86、CD40的表達(dá)明顯下調(diào)。與成熟DCs相比，阻斷Foxp1表達(dá)的DCs吞噬能力增強(qiáng)，表現(xiàn)出多種細(xì)胞因子分泌減少，與T細(xì)胞混合培養(yǎng)時(shí)刺激T細(xì)胞增殖能力減弱，促進(jìn)抗原特異性T細(xì)胞增殖的能力也降低，表現(xiàn)為對(duì)DCs功能的調(diào)節(jié)作用。 進(jìn)一步利用建立的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型（EAE），觀察了阻斷Foxp1表達(dá)的DCs對(duì)EAE小鼠發(fā)病的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，阻斷Foxp1表達(dá)的DCs過(guò)繼轉(zhuǎn)移至小鼠腹腔后能明顯推遲小鼠EAE發(fā)病時(shí)間，與對(duì)照組相比，臨床神經(jīng)功能評(píng)分也有所改善，表明阻斷Foxp1表達(dá)的DCs過(guò)繼轉(zhuǎn)移小鼠體內(nèi)能推遲MOG35-55抗原肽誘導(dǎo)的EAE發(fā)病時(shí)間，并降低DCs促進(jìn)EAE發(fā)病的能力。 綜上所述，本課題對(duì)叉頭盒轉(zhuǎn)錄因子Foxp1對(duì)DCs的分化發(fā)育和免疫功能及其機(jī)制進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)Foxp1在DCs的分化發(fā)育過(guò)程中表達(dá)逐漸增強(qiáng)，阻斷其表達(dá)能通過(guò)下調(diào)共刺激分子并廣泛抑制細(xì)胞因子分泌實(shí)現(xiàn)對(duì)DCs功能的調(diào)節(jié)。阻斷Foxp1表達(dá)的DCs過(guò)繼轉(zhuǎn)移機(jī)體能發(fā)揮一定的免疫抑制功能。這為免疫相關(guān)性疾病的治療提供了新的思路。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2452771