發(fā)布時間：2019-04-02 10:34

【摘要】：目的 慢性高糖會對機體的組織和器官造成損害，，包括胰島β細胞。近年來“糖毒性學說”收到廣泛關注，認為：長期暴露在高濃度的葡萄糖條件下胰島β細胞的胰島素分泌功能下降，胰島β細胞減少，且呈不可逆性改變。研究表明其機制是高糖誘導胰島細胞胞內(nèi)氧化應激而造成胰島β細胞氧化損傷。PEDF是一種內(nèi)源性抗氧化應激分子。近年來國內(nèi)外多項研究顯其與氧化應激相關的疾病如：代謝綜合癥，腹型肥胖，糖尿病腎病等關系密切，一些基礎研究也表明PEDF可在多種細胞中通過不同途徑發(fā)揮其抗氧化應激性能，對細胞產(chǎn)生保護作用。然而在胰島細胞中的研究未見報道，本研究旨在明確、探討：1）不同糖濃度孵育，對INS-1E細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生、細胞活性、細胞凋亡率及糖刺激的胰島素分泌功能的影響；2）PEDF是否能夠改善高糖誘導的INS-1E細胞氧化損傷。 材料與方法 1）INS-1E細胞種盤次日，以無糖PRMI1640培養(yǎng)基饑餓細胞2h，按葡萄糖濃度分為5.6mmol/l組（對照組），16.7mmol/l組，30mmol/l組，并以甘露醇（mannitol）調(diào)節(jié)滲透壓，即5.6mmol/l glucose+24.4mmol/l mannitol、16.7mmol/lglucose+13.3mmol/l mannitol、30mmol/l glucose，分別用5.6G、16.7G、30G表示。三個梯度糖濃度培養(yǎng)基處理細胞48h后，DCFH-DA探針檢測細胞內(nèi)ROS含量；MTT法檢測細胞活性；PI/Hoechst法檢測細胞凋亡率；GSIS（去培養(yǎng)基→清洗細胞→2.5mmol/l glucose的KRBH平衡30min→清洗→16.7mmol/l glucose的KRBH刺激30min）處理、收集上清，ELISA檢測葡萄糖刺激的胰島素分泌。比較不同濃度高糖處理對以上指標的影響。 2）RT-PCR檢測大鼠腎、胰島、腺泡及INS-1E細胞內(nèi)PEDF mRNA水平。 3）構建PEDF質(zhì)粒，在INS-1E細胞內(nèi)脂質(zhì)體轉染PEDF質(zhì)粒并檢測其蛋白表達，確定轉染是否成功。 4）細胞種盤次日轉染，分組為：5.6G、16.7G、30G三組，同一糖濃度根據(jù)轉染質(zhì)粒的不同分為GS(glucose+scramble)，GP（glucose+PEDF）兩組，即5.6GS，5.6GP，16.7GS，16.7GP，30GS，30GP六組。轉染后24h（PEDF蛋白表達高峰）對細胞進行2h饑餓處理，其后分別用三種糖濃度培養(yǎng)液孵育細胞48h，同上方法檢測，比較同一糖濃度組內(nèi)，GP與GS組細胞內(nèi)ROS含量、細胞活性、凋亡率及GSIS差異。（scramble以空質(zhì)粒載體替代） 結果 1）高糖（16.7G、30G）培養(yǎng)基處理48h后INS-1E細胞胞內(nèi)ROS含量、細胞凋亡率顯著增加，細胞活性、胰島素分泌功能顯著降低，并呈濃度依賴性。 2）在大鼠腎、胰島、腺泡及INS-1E細胞內(nèi)，PEDF的mRNA水平差異顯著，其中INS-1E細胞內(nèi)其mRNA微乎其微。 3）以2ug PEDF質(zhì)粒轉染INS-1E細胞，其24、48、72h蛋白過表達均較顯著，過表達有效。 4）較之16.7GS、30GS組，對應的16.7GP、30GP組細胞內(nèi)ROS含量、細胞凋亡率顯著降低，細胞活性、 GSIS顯著改善，均具統(tǒng)計學意義。5.6mM糖濃度組，PEDF轉染對上述指標無顯著影響。 結論 本研究初步揭示了高糖可致INS-1E細胞內(nèi)ROS含量增加，并伴隨著細胞凋亡增加、細胞活性及胰島素分泌功能逐漸降低，并具有濃度依賴性特征；高糖狀態(tài)下（16.7G、30G），過表達PEDF可顯著降低INS-1E細胞內(nèi)ROS的生成及細胞凋亡率，增加細胞活性及其胰島素分泌功能，PEDF可改善高糖狀態(tài)下細胞的氧化應激損傷。
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【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363

【共引文獻】

相關碩士學位論文 前2條

1 毛剛;2型糖尿病患者血清色素上皮衍生因子水平與尿白蛋白排泄率的相關性研究[D];泰山醫(yī)學院;2010年

2 孫叢;2型糖尿病腎病患者血清PEDF表達及纈沙坦聯(lián)合阿魏酸鈉干預研究[D];泰山醫(yī)學院;2012年

本文編號：2452488