【摘要】：第一部分七氟烷預(yù)處理急性期心肌保護機制 目的 觀察七氟烷預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注(I/R)損傷的急性期保護作用(APC);探討核轉(zhuǎn)錄因子-кB(NF-кB)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其介導(dǎo)的凋亡和抗凋亡參與保護作用的機制。 方法 成年雄性SD大鼠143只,建立急性大鼠在體心肌I/R損傷模型(缺血30 min再灌注2 h)。隨機分為空白對照組(CON組)、單純?nèi)毖M(I/R組)、七氟烷預(yù)處理急性保護組(APC組,缺血前吸入2.5%七氟烷30 min,排除15 min)、七氟烷對照組(SEVO組,吸入七氟烷但不缺血)、抑制劑組[NF-κB的特異性抑制劑小白菊內(nèi)酯(PTN),PTN組]、抑制劑溶媒對照組(DMSO組)、PTN+APC組、APC+PTN組。 采用氯化三苯四氮唑(TTC)染色法測定心肌梗死范圍,TUNEL法檢測凋亡心肌細(xì)胞并計算凋亡指數(shù)。于缺血前即刻和再灌注2 h時分別隨機取5只大鼠處死取左心室,采用Western blot法測定NF-кB相關(guān)蛋白(p65、p50)、炎性因子(ICAM-1、TNF-α)以及凋亡和抗凋亡相關(guān)蛋白(Caspase-3、Bcl-2)的表達(dá)水平。 結(jié)果 梗死范圍與凋亡指數(shù):與I/R組相比,APC組心肌梗死范圍縮小,細(xì)胞凋亡指數(shù)降低,且該作用可被NF-κB抑制劑PTN所阻斷(P0.05)。 Western blot結(jié)果:①缺血前即刻,與CON組相比,APC組與SEVO組NF-кB(p65、p50)以及Bcl-2的蛋白表達(dá)上調(diào)(P0.05)。②再灌注2 h時,與CON組相比,I/R組和APC組NF-кB(p65、p50)、ICAM-1、TNF-α蛋白表達(dá)上調(diào),I/R組Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào),Caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào)(P0.05);與I/R組相比,APC組NF-кB(p65、p50)、ICAM-1、TNF-α、Caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào)的幅度降低,Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)(P0.05)。 結(jié)論 七氟烷預(yù)處理對大鼠在體心肌I/R損傷具有急性期保護作用。NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路不僅作為觸發(fā)因子而且作為調(diào)控因子參與了七氟烷預(yù)處理的急性期心肌保護機制,通過七氟烷預(yù)處理在缺血前上調(diào)NF-κB(p65、p50)和Bcl-2的表達(dá),下調(diào)再灌注后其下游ICAM-1、TNF-α的表達(dá),降低由I/R損傷引起Caspase-3蛋白表達(dá)的上調(diào),減輕心肌細(xì)胞凋亡,縮小心肌梗死范圍,發(fā)揮急性期的心肌保護作用。 第二部分七氟烷預(yù)處理延遲期心肌保護機制 目的 觀察七氟烷預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注(I/R)損傷的延遲期保護作用(SWOP);探討核轉(zhuǎn)錄因子-кB(NF-кB)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其介導(dǎo)的自噬和凋亡參與保護作用的機制。 方法 成年雄性SD大鼠140只,建立延遲性大鼠在體心肌I/R損傷模型(缺血30 min再灌注2 h)。隨機分為單純?nèi)毖M(I/R組,缺血前1 d吸入33%氧氣2 h)、七氟烷預(yù)處理延遲保護組(SWOP組,缺血前1 d吸入2.5%七氟烷2 h)、空白對照組(CON組)、七氟烷對照組(SEVO組)、抑制劑組[NF-κB的特異性抑制劑小白菊內(nèi)酯(PTN),PTN組]、PTN+SWOP組、抑制劑溶媒對照組(DMSO組)。 采用氯化三苯四氮唑(TTC)染色法測定心肌梗死范圍;光鏡觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化,透射電鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)自噬體的變化;采用單光子發(fā)射計算機斷層成像術(shù)(SPECT)觀察再灌注后大鼠在體凋亡心肌細(xì)胞放射性核素顯像的變化。于缺血前即刻和再灌注2 h時分別隨機取5只大鼠處死取左心室,采用Western blot法測定NF-кB相關(guān)蛋白(p65、p50、p-IκBα)、炎性因子(TNF-α、IL-1β)、自噬相關(guān)蛋白(LC3-Ⅱ、Cathepsin B)和凋亡相關(guān)蛋白(Caspase-3)的表達(dá)水平。 結(jié)果 梗死范圍與凋亡指數(shù):與I/R組相比,SWOP組心肌梗死范圍縮小,心肌組織形態(tài)損傷減輕,該作用可被NF-κB抑制劑PTN所阻斷(P0.05);透射電鏡結(jié)果顯示缺血前,SWOP組心肌細(xì)胞有自噬適度激活;SPECT結(jié)果顯示SWOP組心肌異常高放射性區(qū)/本底(T/B)比值較I/R組降低(P0.05)。 Western blot結(jié)果:①缺血前即刻:與CON組相比,SWOP組與SEVO組NF-кB(p65、p50、p-IκBα)、炎性因子(TNF-α、IL-1β)、自噬相關(guān)蛋白(LC3-Ⅱ和CathepsinB)的蛋白表達(dá)上調(diào)(P0.05)。②再灌注2 h時:與CON組相比,I/R組和SWOP組NF-кB蛋白(p65、p50、p-IκBα)、炎性因子(TNF-α、IL-1β)、自噬相關(guān)蛋白(LC3-Ⅱ、Cathepsin B)以及凋亡相關(guān)蛋白(Caspase-3)的蛋白表達(dá)上調(diào)(P0.05)。與I/R組相比,SWOP組除Cathepsin B外,其余各因子表達(dá)上調(diào)的幅度均降低(P0.05)。 結(jié)論 七氟烷預(yù)處理對大鼠在體心肌I/R損傷具有延遲期保護作用。NF-кB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能作為觸發(fā)因子通過其負(fù)反饋機制參與了七氟烷預(yù)處理的延遲期心肌保護機制。七氟烷預(yù)處理在缺血前上調(diào)NF-кB(p65、p50、p-IκBα)的表達(dá),隨后上調(diào)其下游炎性因子(TNF-α、IL-1β),適度激活自噬,形成負(fù)反饋抑制,降低再灌注后NF-кB(p65、p50、p-IκBα)、TNF-α、IL-1β、LC3-Ⅱ、Caspase-3的蛋白表達(dá)上調(diào)的幅度,抑制自噬和凋亡,縮小心肌梗死范圍,發(fā)揮延遲期的心肌保護作用。
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【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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2 劉小軍;易善永;廖斌;鄧明彬;陳圣杰;王峰;;肢體缺血預(yù)處理對心臟瓣膜置換術(shù)心肌保護作用的研究[J];心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2007年04期

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本文編號：2448289