【摘要】：腦膠質(zhì)瘤的研究高度依賴于可靠的動(dòng)物模型,可靠的動(dòng)物模型為從不同角度研究腦膠質(zhì)瘤在體內(nèi)發(fā)生及發(fā)展過(guò)程提供了可能。體外研究使我們不能闡明腫瘤和宿主之間復(fù)雜的相互作用。當(dāng)在活體動(dòng)物體內(nèi)建立異種移植的腦膠質(zhì)瘤模型時(shí),為了防止排斥反應(yīng),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須是免疫缺陷動(dòng)物。免疫缺陷鼠,例如裸鼠及NOD/SCID鼠目前廣泛應(yīng)用于腦膠質(zhì)瘤體內(nèi)模型。本研究我們利用表達(dá)EGFP基因的C57BL/6J-EGFP轉(zhuǎn)基因小鼠與nu/nu裸小鼠雜交培育綠色熒光裸鼠,利用綠色熒光裸鼠建立腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型,初步探索腫瘤血管的生成、來(lái)源及3.0T MR在腫瘤動(dòng)物模型中應(yīng)用的可行性。 本課題從兩個(gè)方面對(duì)人腦膠質(zhì)瘤綠色熒光裸鼠模型進(jìn)行研究：①綠色熒光裸鼠的培育②膠質(zhì)瘤綠色熒光裸鼠模型的建立。 第一部分綠色熒光裸鼠的培育 目的培育表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)的轉(zhuǎn)基因裸小鼠,為膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型的建立和臨床治療的實(shí)驗(yàn)性研究提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。 方法將C57BL/6J-EGFP轉(zhuǎn)基因小鼠與nu/nu裸小鼠(遺傳背景為BALB/c)進(jìn)行交配,在繼代時(shí)嚴(yán)格挑選都表達(dá)EGFP基因的無(wú)毛雄鼠(♂)與有毛母鼠(♀)交配,通過(guò)肉眼、熒光顯微鏡和分子生物學(xué)等方法觀察EGFP基因在裸小鼠全身各組織中的表達(dá)情況。 結(jié)果傳至F18代的仔鼠,通過(guò)小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)出生后2天就可鑒別其是否表達(dá)EGFP基因,出生后4周肉眼就可以鑒別是否表達(dá)裸基因；綠色熒光裸鼠大體解剖無(wú)胸腺,器官及組織冰凍切片熒光顯微鏡下觀察均見(jiàn)有綠色熒光；裸鼠EGFP基因PCR結(jié)果表明腦組織、皮下肌肉、鼠尾和腳趾全部表達(dá)EGFP基因。 結(jié)論通過(guò)將C57BL/6J-EGFP轉(zhuǎn)基因小鼠與nu/nu裸小鼠進(jìn)行雜交能培育出表達(dá)EGFP基因的裸小鼠；鼠尾EGFP基因的鑒定,在不處死鼠的情況下提供EGFP基因表達(dá)的分子生物學(xué)證據(jù),既精確可信,又能體現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的人文關(guān)懷；本實(shí)驗(yàn)培育的綠色熒光裸鼠為腫瘤模型的建立提供了一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。 目的建立可重復(fù)性、穩(wěn)定的SHG-44膠質(zhì)瘤綠色熒光裸鼠腦內(nèi)及皮下模型,初步探索腫瘤血管的生成、來(lái)源及3.0T MR在腫瘤動(dòng)物模型中應(yīng)用的可行性。 方法用立體定向儀將人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系SHG-44注射于綠色熒光裸鼠的腦內(nèi)制成腫瘤的原位模型,用1ml注射器將SHG-44注射于綠色熒光裸鼠的前肢腋部皮下制成腫瘤的皮下模型,腦內(nèi)模型經(jīng)常規(guī)HE和免疫組織化學(xué)染色,用普通光鏡和熒光顯微鏡觀察移植瘤的形態(tài)特征、侵襲播散情況及腫瘤血管的來(lái)源；腦內(nèi)模型及皮下模型術(shù)后第25天觀察3.0T MRI掃描特征并與病理學(xué)檢查結(jié)果相比較。 結(jié)果腦內(nèi)模型除去圍手術(shù)期死亡1只裸鼠外,剩余9只術(shù)后第25天處死裸鼠,常規(guī)HE檢查均見(jiàn)有腫瘤生長(zhǎng),成瘤率達(dá)100%；腦內(nèi)模型的瘤細(xì)胞依然具有人腦膠質(zhì)瘤的基本特征,腫瘤血管在熒光顯微鏡下觀察到強(qiáng)烈的綠色熒光；腦內(nèi)模型及皮下模型3.0T MRI掃描均見(jiàn)有腫瘤生長(zhǎng),掃描圖像清晰并與病理檢查結(jié)果相一致。 結(jié)論綠色熒光裸鼠可用于腫瘤移植實(shí)驗(yàn)并可用顏色來(lái)鑒別腫瘤血管,對(duì)腫瘤血管的生成和來(lái)源的研究有重要意義；3.0T MRI可用于觀察人腦膠質(zhì)瘤模型腫瘤的生長(zhǎng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2441011