發(fā)布時間：2019-02-24 20:25

【摘要】：本研究根據(jù)Ct Ahpc基因序列設計特異性引物,以Ct DNA為模版PCR擴增Ahpc基因到大小為585 bp,將其連接到p ET28a獲得重組質粒p ET28a-Ahpc,將該質粒轉化到大腸桿菌BL21(DE3)獲得重組菌BL/p ET28a-Ahpc,利用IPTG誘導重組Ahpc蛋白表達,目的蛋白分子量大小約為26 k D。利用Ni-NAT親和層析法純化得到的重組Ahpc蛋白。氧化鐵二甲酚橙法檢測發(fā)現(xiàn)Ahpc蛋白能夠分解雙氧水和叔丁基過氧化氫,具有分解過氧化合物的活性。測定重組大腸桿菌在百草枯所致氧化脅迫下的生長曲線,發(fā)現(xiàn)表達Ahpc蛋白的重組菌的生長情況比對照好。本研究成功表達和純化得到沙眼衣原體Ahpc蛋白并測定其活性,為解析沙眼衣原體的抗氧化機制提供實驗證據(jù)。
[Abstract]:In this study, specific primers were designed according to the sequence of Ct Ahpc gene. Ahpc gene was amplified with Ct DNA as template PCR and ligated to p ET28a to obtain recombinant plasmid p ET28a-Ahpc,. The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) and the recombinant strain BL/p ET28a-Ahpc, was used to induce the expression of recombinant Ahpc protein. The molecular weight of the target protein was about 26kD. The recombinant Ahpc protein was purified by Ni-NAT affinity chromatography. Iron oxide xylenol orange assay showed that Ahpc protein could decompose hydrogen peroxide and tert-Ding Ji hydrogen peroxide and had the activity of decomposing peroxy compounds. The growth curve of recombinant Escherichia coli under oxidative stress induced by paraquat was determined. It was found that the growth of recombinant Escherichia coli expressing Ahpc protein was better than that of control. In this study, chlamydia trachomatis Ahpc protein was successfully expressed and purified, and its activity was determined, which provided experimental evidence for elucidating the antioxidation mechanism of chlamydia trachomatis.
【作者單位】： 南華大學病原生物學研究所;湖南省分子靶標新藥研究協(xié)同創(chuàng)新中心;邵陽學院附屬醫(yī)院檢驗科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81102230;31470277) 特殊病原體防控湖南省重點實驗室資助項目(湘科計字[2014]5號) 湖南省高校創(chuàng)新平臺開放基金(No.13K081) 湖南省科技計劃項目(No.2015JC3087) 衡陽市科技局項目(2015KS11)共同資助
【分類號】：R374.1

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本文編號：2429900