【摘要】：本研究根據(jù)Ct Ahpc基因序列設(shè)計(jì)特異性引物,以Ct DNA為模版PCR擴(kuò)增Ahpc基因到大小為585 bp,將其連接到p ET28a獲得重組質(zhì)粒p ET28a-Ahpc,將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)獲得重組菌BL/p ET28a-Ahpc,利用IPTG誘導(dǎo)重組Ahpc蛋白表達(dá),目的蛋白分子量大小約為26 k D。利用Ni-NAT親和層析法純化得到的重組Ahpc蛋白。氧化鐵二甲酚橙法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Ahpc蛋白能夠分解雙氧水和叔丁基過(guò)氧化氫,具有分解過(guò)氧化合物的活性。測(cè)定重組大腸桿菌在百草枯所致氧化脅迫下的生長(zhǎng)曲線,發(fā)現(xiàn)表達(dá)Ahpc蛋白的重組菌的生長(zhǎng)情況比對(duì)照好。本研究成功表達(dá)和純化得到沙眼衣原體Ahpc蛋白并測(cè)定其活性,為解析沙眼衣原體的抗氧化機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
[Abstract]:In this study, specific primers were designed according to the sequence of Ct Ahpc gene. Ahpc gene was amplified with Ct DNA as template PCR and ligated to p ET28a to obtain recombinant plasmid p ET28a-Ahpc,. The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) and the recombinant strain BL/p ET28a-Ahpc, was used to induce the expression of recombinant Ahpc protein. The molecular weight of the target protein was about 26kD. The recombinant Ahpc protein was purified by Ni-NAT affinity chromatography. Iron oxide xylenol orange assay showed that Ahpc protein could decompose hydrogen peroxide and tert-Ding Ji hydrogen peroxide and had the activity of decomposing peroxy compounds. The growth curve of recombinant Escherichia coli under oxidative stress induced by paraquat was determined. It was found that the growth of recombinant Escherichia coli expressing Ahpc protein was better than that of control. In this study, chlamydia trachomatis Ahpc protein was successfully expressed and purified, and its activity was determined, which provided experimental evidence for elucidating the antioxidation mechanism of chlamydia trachomatis.
【作者單位】： 南華大學(xué)病原生物學(xué)研究所;湖南省分子靶標(biāo)新藥研究協(xié)同創(chuàng)新中心;邵陽(yáng)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81102230;31470277) 特殊病原體防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室資助項(xiàng)目(湘科計(jì)字[2014]5號(hào)) 湖南省高校創(chuàng)新平臺(tái)開放基金(No.13K081) 湖南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015JC3087) 衡陽(yáng)市科技局項(xiàng)目(2015KS11)共同資助
【分類號(hào)】：R374.1

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本文編號(hào)：2429900