【摘要】：盆底功能障礙性疾病(pelvic floor dysfunction, PFD)是中老年女性常見病,發(fā)病率約40%,主要包括盆底器官膨出(pelvic organ prolapsed, POP)和壓力性尿失禁(stress urinary incontinence, SUI)。多數(shù)研究認(rèn)為PFD盆底結(jié)締組織中總膠原含量下降,并認(rèn)為是膠原纖維數(shù)量的減少導(dǎo)致了韌帶、筋膜等支持結(jié)構(gòu)的松弛,最終導(dǎo)致PFD的發(fā)生。目前關(guān)于PFD的治療主要有保守治療和手術(shù)治療,保守治療適用于病情較輕的患者,手術(shù)治療又分傳統(tǒng)手術(shù)和新的手術(shù)方式治療,新手術(shù)方式應(yīng)用生物材料重建盆底的支持結(jié)構(gòu),相比傳統(tǒng)術(shù)式局部損傷小,復(fù)發(fā)率低,但存在易感染,植入網(wǎng)片易侵蝕、外漏、排異等問題。隨著組織工程學(xué)的發(fā)展,為PFD的治療提供了新思路。 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)來(lái)源于中胚層,具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能,能產(chǎn)生具有各種表型的子代細(xì)胞。BMSCs在體內(nèi)、外不同的誘導(dǎo)條件下,具有向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞及支持造血的基質(zhì)細(xì)胞等中胚層和神經(jīng)外胚層組織細(xì)胞分化的能力。 另外,BMSCs獲取相對(duì)簡(jiǎn)便,且可從自身獲取,對(duì)體外培養(yǎng)條件要求不高,分裂增殖能力強(qiáng),具有無(wú)異體排斥反應(yīng)、生物相容性好等多種優(yōu)點(diǎn)。此發(fā)現(xiàn)為組織工程中自體BMSCs替代韌帶成纖維細(xì)胞的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。 目的 探討在體外條件下大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(rBMSCs)的培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化為成纖維細(xì)胞的方法。本實(shí)驗(yàn)采用條件培養(yǎng)液直接誘導(dǎo)大鼠BMSCs向韌帶成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化,為韌帶組織工程構(gòu)建中種子細(xì)胞的選擇提供依據(jù)。 研究方法 (1)利用差速貼壁法體外分離純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；通過(guò)形態(tài)學(xué)方法與流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原表達(dá)的方法,對(duì)在體外培養(yǎng)的rBMSCs進(jìn)行鑒定；并將其向成骨細(xì)胞、成脂細(xì)胞誘導(dǎo)證實(shí)分化潛能。 (2)用條件培養(yǎng)液(LG-DMEM含10%的胎牛血清、10ug/L bFGF、1 mmol/L磷酸維生素C、0.04 mmo/L脯氨酸)進(jìn)行細(xì)胞誘導(dǎo),對(duì)第3代細(xì)胞誘導(dǎo)分化3天、6天,使之分化為成纖維細(xì)胞后行生長(zhǎng)曲線測(cè)定,證實(shí)其誘導(dǎo)后增殖能力；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法和免疫蛋白印跡法(Western-blot)檢測(cè)其Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)。 (3)所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,在免疫細(xì)胞化學(xué)染色和Western-blot的結(jié)果處理中,采用one-way ANOVA檢驗(yàn)樣本與對(duì)照組之間的組間差異,以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 (1)利用差速貼壁法獲得rBMSCs具有干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征(核漿比大)；流式細(xì)胞儀鑒定結(jié)果：BMSCs高表達(dá)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志CD90(98.9%)、CD44(98.6%),而造血干細(xì)胞標(biāo)志CD34(1.8%),單核細(xì)胞標(biāo)志CD45(3.6%)均為陰性；r BMSCs具有向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分化的能力。 (2)誘導(dǎo)后的BMSCs細(xì)胞分裂活躍。MTT法檢測(cè)兩組之間A值差異具有顯著性(P0.05)。 (3)條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)3天,免疫細(xì)胞化學(xué)法和Western-blot檢測(cè)膠原合成,BMSCsⅠ、Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (4)條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)6天,免疫細(xì)胞化學(xué)法和Western-blot檢測(cè)膠原合成,BMSCsⅠ、Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)與對(duì)照組相比增高均有顯著差異(P0.05)。 結(jié)論 (1)從大鼠骨髓中成功獲取高分化潛能的BMSCs,差速貼壁法分離獲取的BMSCs純度較高,具有分化為成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的能力。 (2)在體外經(jīng)條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)下,可促進(jìn)BMSCs的增殖,促進(jìn)Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的合成,順利轉(zhuǎn)化為成纖維細(xì)胞。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：2416262