發(fā)布時(shí)間：2019-01-27 06:49

【摘要】：流行性感冒是人類至今不能有效控制的傳染病之一，一直是威脅全世界人類安全的疾病。雖然有抗病毒藥物，但可能會(huì)誘導(dǎo)耐藥株，不適合大范圍長(zhǎng)時(shí)間來(lái)應(yīng)對(duì)流感病毒。疫苗是預(yù)防和控制流感的重要手段。除了傳統(tǒng)的雞胚制備流感疫苗，傳代細(xì)胞系如MDCK細(xì)胞、Vero細(xì)胞、RER.C6細(xì)胞等也被用作制備流感疫苗。MDCK細(xì)胞具有易培養(yǎng)、對(duì)多種不同亞型的流感病毒株敏感、病毒用MDCK細(xì)胞培養(yǎng)的產(chǎn)量高等特點(diǎn)，是作為流感疫苗生產(chǎn)的理想細(xì)胞系。 本文建立了適用于生產(chǎn)的MDCK細(xì)胞三級(jí)種子庫(kù)，并使用該種子庫(kù)開(kāi)展對(duì)于MDCK細(xì)胞的生長(zhǎng)情況的研究。通過(guò)對(duì)不同血清比較，葡萄糖濃度調(diào)整，，確定了在培養(yǎng)瓶中MDCK細(xì)胞最佳貼壁生長(zhǎng)條件。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究MDCK細(xì)胞在微載體表面反應(yīng)器系統(tǒng)中貼壁生長(zhǎng)情況。MDCK細(xì)胞以微載體貼壁生長(zhǎng)，在初始接種細(xì)胞密度為2.0×105cells/mL，在不更換培養(yǎng)基的情況下，經(jīng)過(guò)72小時(shí)，細(xì)胞密度最高能達(dá)到（13.77±0.69）×105cells/mL，細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)增了6.89倍。另外，對(duì)MDCK細(xì)胞培養(yǎng)流感病毒的條件進(jìn)行優(yōu)化。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至72小時(shí)，按照M.O.I=0.01接種流感病毒，以含2.5μg/mL TPCK-胰酶的MEM培養(yǎng)基培養(yǎng)流感病毒。在48小時(shí)后，培養(yǎng)基上清中能夠獲得的流感病毒血凝滴度為9log2HA/50μL。為今后建立以生物反應(yīng)器微載體系統(tǒng)大規(guī)模培養(yǎng)流感疫苗技術(shù)平臺(tái)奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Influenza is one of the infectious diseases which can not be effectively controlled by human beings, and it has been a threat to human security all over the world. Although antiviral drugs are available, resistant strains may be induced and are not suitable for a wide range of long-term influenza viruses. Vaccine is an important means to prevent and control influenza. In addition to the traditional chicken embryo flu vaccine, passage cell lines such as MDCK cells, Vero cells and RER.C6 cells are also used to prepare influenza vaccines. MDCK cells are easy to culture and sensitive to a variety of different subtypes of influenza viruses. The high yield of MDCK cells is the ideal cell line for influenza vaccine production. In this paper, a three-stage seed bank of MDCK cells suitable for production was established, and the growth of MDCK cells was studied by using the seed bank. By comparing different serum and adjusting the concentration of glucose, the optimal conditions of MDCK cell adhesion in culture flask were determined. On this basis, the adherent growth of MDCK cells in the microcarrier surface reactor system was further studied. MDCK cells grew on microcarriers, and the initial inoculation cell density was 2.0 脳 105 cells / mL, without changing the culture medium. After 72 hours, the maximum cell density was (13.77 鹵0.69) 脳 10 ~ 5 cells / mL, and the cell number was 6.89 times. In addition, the conditions of MDCK cell culture of influenza virus were optimized. When the cells were cultured for 72 hours, influenza virus was inoculated according to M.O.I=0.01 and cultured on MEM medium containing 2.5 渭 g/mL TPCK- trypsin. After 48 hours, the hemagglutination titer of influenza virus was 9log2HA/50 渭 L. It lays a foundation for the establishment of a bioreactor microcarrier system for the large-scale cultivation of influenza vaccine technology platform in the future.
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R392.1

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2416018