【摘要】：目的微循環(huán)障礙在激素性股骨頭壞死發(fā)病機制中起著重要作用,循環(huán)內(nèi)皮祖細胞直接參與血管新生和維持局部血管穩(wěn)態(tài),其數(shù)量和功能的下降與多種疾病狀態(tài)有關(guān)。本文旨在研究激素性股骨頭壞死患者外周血中兩種內(nèi)皮祖細胞數(shù)量和功能的改變,探討兩種內(nèi)皮祖細胞在激素導(dǎo)致的內(nèi)皮功能失調(diào)中的作用。 方法選擇2008年7月至2010年12月華中科技大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院骨科收治33例激素性股骨頭壞死患者和33例性別與年齡相匹配的健康人,采集其外周血,從外周血中分離早期內(nèi)皮祖細胞(早期EPC)和內(nèi)皮集落形成細胞(ECFC),分別在鋪有人纖維連接蛋白和Ⅰ型鼠尾膠原的培養(yǎng)板上行體外培養(yǎng)擴增,利用Dil標記的乙�；兔芏戎鞍�(Dil-Ac-LDL)和異硫氰酸熒光素標記的荊豆凝集素(FITC-UEA-1)在激光共聚焦顯微鏡下鑒定兩種內(nèi)皮祖細胞,流式細胞儀檢測CD133和VEGFR2雙陽性細胞數(shù)量,并檢測其集落形成能力、CCK-8試劑盒檢測其增殖能力、Transwell小室檢測遷移能力、Matrigel基質(zhì)膠檢測成血管能力、ELISA試劑盒檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和基質(zhì)細胞衍生因子-1(SDF-1)分泌水平。 結(jié)果激素性股骨頭壞死患者中的兩種內(nèi)皮祖細胞集落形成數(shù)目均有所下降(早期EPC集落數(shù)：2.42±1.46vs4.52±2.00,P0.05；ECFC集落數(shù)：0.62±0.55vs1.12±0.82,P0.05),早期內(nèi)皮祖細胞的遷移能力下降(63.8±11.7vs152.3±12.4,P0.001),分泌VEGF因子能力下降(50.8±7.2pg/ml vs62.8±10.1pg/ml, P=0.001),內(nèi)皮集落形成細胞的增殖能力下降(P0.05),成血管能力下降(7.1±2.7vs23.8±4.3,P0.001)。結(jié)論激素性股骨頭壞死患者中兩種內(nèi)皮祖細胞的功能在不同方面受損,表明其在激素導(dǎo)致的內(nèi)皮功能失調(diào)中發(fā)揮不同作用。 目的關(guān)于內(nèi)皮祖細胞的一種亞型——內(nèi)皮集落形成細胞的體外培養(yǎng)擴增及其在組織工程中的應(yīng)用尚不明確。探索從人臍血中分離培養(yǎng)擴增內(nèi)皮集落形成細胞并研究其生物相容性,為其作為組織工程種子細胞提供依據(jù)。探索體外激素干預(yù)對內(nèi)皮集落形成細胞的細胞因子合成有無影響。 方法采用密度梯度離心法從人臍血中分離單個核細胞,接種于Ⅰ型鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板上,采用內(nèi)皮祖細胞專用EGM-2培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng),早期傳代后擴增,Dil-Ac-LDL和FITC-UEA-1雙染及CD31, vWF, KDR和Tie-2免疫熒光鑒定細胞,并檢測其體外成血管和增殖能力,與納米羥基磷灰石/磷酸三鈣材料復(fù)合培養(yǎng)后觀察生物相容性。將內(nèi)皮集落形成細胞用不同濃度激素(地塞米松0,1uM,1nM)干預(yù)下,Western檢測細胞內(nèi)SDF-1及其受體CXCR4、以及KDR、Tie-2的表達水平有無差異。 結(jié)果臍血來源內(nèi)皮集落形成細胞呈鋪路石樣集落生長,吞噬Dil-Ac-LDL并結(jié)合FITC-UEA-1,表達CD31, vWF, KDR和Tie-2,早期傳代后擁有較強增殖潛能,可在體外大量擴增,在體外基質(zhì)膠上可形成閉合管腔樣結(jié)構(gòu),復(fù)合納米羥基磷灰石／磷酸三鈣材料后生物學(xué)特性不受影響。地塞米松1uM,1nM對內(nèi)皮集落細胞的四種因子SDF-1及其受體CXCR4、以及KDR、Tie-2表達有抑制作用,濃度越高,抑制作用越強。 結(jié)論提示可從臍血中分離并體外大量擴增內(nèi)皮集落形成細胞,臍血來源內(nèi)皮集落形成細胞適合作為組織工程的種子細胞。地塞米松對內(nèi)皮集落形成細胞的關(guān)鍵細胞因子表達具有抑制作用。 目的探討利用人臍帶血來源內(nèi)皮集落形成細胞在體外培養(yǎng)擴增,局部回輸兔早期激素性股骨頭壞死模型的股骨頭內(nèi),觀察其呈血管和成骨能力。 方法采用密度梯度離心法從人臍血中分離單個核細胞,接種于Ⅰ型鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板上,采用內(nèi)皮祖細胞專用EGM-2培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng),早期傳代后擴增。選取健康新西蘭大白兔35只,經(jīng)耳緣靜脈注射10μg/Kg低劑量的脂多糖內(nèi)毒素兩次,再連續(xù)肌肉注射20mg/Kg甲強龍三次,建立兔股骨頭壞死模型。四周后,X線,MRI和組織學(xué)切片檢測造模成功率,將造模成功兔行手術(shù)處理,在股骨大轉(zhuǎn)子后下方鉆孔,將經(jīng)過擴增的人臍帶血來源的內(nèi)皮集落形成細胞局部輸入,明膠海綿封閉孔道。術(shù)后8周取股骨頭行組織學(xué)檢查和顯微CT檢測。 結(jié)果臍血來源內(nèi)皮集落形成細胞在體外大量擴增。X線顯示造模組兔股骨頭軟骨下下囊性變,股骨近端骨質(zhì)疏松,MRI示造模組兔股骨頭局部信號異常,組織學(xué)見骨細胞陷窩空泡,脂肪細胞增多,部分血管栓塞。治療組8周后,組織學(xué)示新生骨質(zhì)形成,骨細胞增多,顯微CT示治療組股骨頭形態(tài)正常,骨小梁分布均勻,未治療組股骨頭塌陷,骨小梁疏松,斷裂。X線示治療組股骨頭形態(tài)正常,密度均勻,未治療組股骨頭塌陷變形,骨密度不均勻。 結(jié)論小劑量脂多糖聯(lián)合甲強龍成功誘導(dǎo)兔早期股骨頭壞死,臍血來源內(nèi)皮集落形成細胞在體外經(jīng)擴增后注入兔股骨頭內(nèi)可促進骨細胞再生,新骨形成,是一種較好的修復(fù)骨壞死的方法。
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【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R329

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 謝松濤;陳璧;陶克;韓軍濤;王洪濤;;含內(nèi)皮祖細胞的組織工程皮膚體外構(gòu)建及裸鼠移植研究[J];中華實驗外科雜志;2006年12期

2 劉燕榮,陳君柱,王興祥,朱軍慧,謝旭東,孫堅;冠心病患者外周血內(nèi)皮祖細胞的數(shù)量和功能變化[J];浙江大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年02期

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本文編號：2415477