【摘要】：CD73即胞外-5’-核苷酸酶(ecto-5'-nucleotidase,eN),是由GPI錨定在細(xì)胞膜外表面的糖蛋白。其主要功能是水解AMP生成重要的生理活性物質(zhì)腺苷。胞外腺苷通過作用于靶細(xì)胞膜上4種G蛋白偶聯(lián)的腺苷受體(A1R、A2aR、A2bR、A3R),發(fā)揮抑制炎癥、擴(kuò)張血管、提高內(nèi)皮屏障功能、刺激血管新生、抑制血小板聚集、減少自由基產(chǎn)生等作用。近年還有研究發(fā)現(xiàn),CD73參與了脂肪細(xì)胞中的脂滴形成過程,而血脂水平增高是動(dòng)脈粥樣硬化(artherosclerosis,AS)的重要危險(xiǎn)因素,這提示CD73在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮著重要作用,但是如何發(fā)揮作用及其作用機(jī)制目前國(guó)內(nèi)外尚無報(bào)導(dǎo)。本課題首先利用CD73-/-敲基因小鼠和ApoE-/-敲基因小鼠進(jìn)行雜交,培育出CD73-/-ApoE-/-雙基因敲除小鼠,然后高脂喂養(yǎng)建立動(dòng)脈粥樣硬化模型,整體水平研究CD73對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的影響,并探討CD73在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制,從而為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的靶點(diǎn)及途徑。 本研究主要分為三部分： 第一部分培育出CD73-/-ApoE-/-雙基因敲除小鼠。利用CD73-/-小鼠與相同遺傳背景ApoE-/-小鼠雜交,產(chǎn)生的F1代小鼠與ApoE-/-小鼠回交,在其F2代中篩選出基因型為CD73+/-ApoE-/-的小鼠,再進(jìn)行互交,從F3代中篩選出CD73-/-ApoE-/-后代。運(yùn)用PCR方法對(duì)小鼠的基因型進(jìn)行鑒定。根據(jù)PCR產(chǎn)物凝膠電泳的結(jié)果,能同時(shí)擴(kuò)增出280bp和245bp片段的小鼠為成功培育的CD73-/-ApoE-/-小鼠。 第二部分選擇CD73-/-、CD73+/+、CD73-/-ApoE-/-及ApoE-/-四組4周齡小鼠予以高脂飼料喂養(yǎng)8周,同樣分組的小鼠予以高脂飼料喂養(yǎng)16周,構(gòu)建動(dòng)脈粥樣硬化模型,檢測(cè)各組小鼠的體重、血脂水平,觀察主動(dòng)脈血管斑塊形成情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CD73-/-與CD73+/+小鼠體重、血脂水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而CD73-/-ApoE-/-小鼠體重明顯低于ApoE-/-小鼠,且CD73-/-ApoE-/-小鼠的血漿甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白也明顯低于ApoE-/-小鼠,但高密度脂蛋白和脂蛋白(a)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。選取左鎖骨下動(dòng)脈下2mm開始至髂動(dòng)脈分支處血管進(jìn)行蘇丹Ⅳ染色,發(fā)現(xiàn)高脂喂養(yǎng)16周后,CD73-/-ApoE-/-小鼠斑塊總面積占血管總面積的比例明顯低于ApoE-/-小鼠。以上結(jié)果提示,CD73在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展中有升高血脂水平,促進(jìn)斑塊形成的作用。 第三部分研究CD73影響脂質(zhì)代謝的潛在機(jī)制。提取ApoE-/-CD73-/-、ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化小鼠的肝臟總RNA,運(yùn)用realtime-PCR法檢測(cè)以下11個(gè)參與脂質(zhì)代謝的關(guān)鍵酶及基因水平：FAS、LCAT、HL、ABCA1、SRBI、GPAT、HSL、PPARα、PPARγ、CYP7A1、FDPS。其中, ApoE-/-CD73-/-小鼠的LCAT和CYP7A1mRNA表達(dá)水平明顯高于ApoE-/-小鼠,HL、PPARα、PPARγ、FDPS的(?)nRNA表達(dá)水平明顯低于ApoE-/-小鼠,其余基因]nRNA表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 基于以上研究,我們得出以下結(jié)論：1.CD73與動(dòng)脈粥樣硬化形成有關(guān),可促進(jìn)斑塊形成,并且與脂質(zhì)代謝關(guān)系尤為密切。2.CD73促進(jìn)體內(nèi)血脂水平的增高,主要升高血漿總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平,對(duì)高密度脂蛋白和脂蛋白(a)無明顯影響。3.CD73可以通過影響動(dòng)脈粥樣硬化小鼠的LCAT、HL、PPARα、PPARγ、CYP7A1、FDPS基因的表達(dá)而發(fā)揮調(diào)節(jié)血脂代謝、促進(jìn)斑塊形成的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：2414496